高效液相色譜法測定蔬菜中4種農(nóng)藥殘留

◎ 鄭碧秋

（茂名市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 茂名 525000）

高效氯氟氰菊酯類農(nóng)藥是一種廣譜性殺蟲劑，由于其具有殺蟲效果好、毒性較低以及殘留期短等優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于蔬菜、糧食以及水果等農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)之中。雖說使用這類農(nóng)藥能夠有效防治土壤之中的害蟲，但長期大量使用也會導(dǎo)致在蔬菜上面殘留部分農(nóng)藥，為蔬菜帶來新的質(zhì)量問題。而針對蔬菜中所殘留的氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉等農(nóng)藥檢測通常使用的方法有氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜-質(zhì)譜法等，這些方法都各具特點(diǎn)，針對不同的測定需求應(yīng)合理選擇使用方法。本次研究選擇使用高效液相色譜法來檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留，主要因其具有選擇性較強(qiáng)、靈敏度較高、重現(xiàn)性較好的優(yōu)點(diǎn)，能夠很好地滿足本次實(shí)驗(yàn)針對農(nóng)藥殘留的檢測需求。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

配二極管陣列檢測器的LC-2030C3D液相色譜儀，日本島津有限公司；色譜柱型號：ZORBA×SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），Aglient；電 子 天 平ME104E/02，梅特勒-托利多儀器有限公司；HZQ-Q恒溫振蕩器，上海達(dá)姆實(shí)業(yè)有限公司；SX2-2.5-10箱式電阻爐，上海昕儀儀器儀表有限公司；SK5210HP超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)有限公司；DHG-9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，深圳市標(biāo)雅科技有限公司；SY-2000型旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器有限公司；層析柱（玻璃，規(guī)格1.5 mm×300 mm），江陰市創(chuàng)通層析設(shè)備有限公司；二極管陣列檢測器，廣東晟澤科技有限公司。

1.2 材料與試劑

新鮮大白菜購買自茂名市的蔬菜農(nóng)貿(mào)市場。

氯氰菊酯99.7%、聯(lián)苯菊99%、吡蟲啉98.5%、噻蟲嗪96%標(biāo)準(zhǔn)品，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；甲醇、乙腈為色譜純；純凈水；乙酸乙酯、正己烷、丙酮、乙腈、甲苯、弗羅里硅土、活性炭和無水硫酸鈉等，均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的流動相為乙腈∶水=70∶30（V/V）、乙腈∶水=85∶15（V/V）、甲醇∶水=20∶80（V/V）、甲醇∶水=40∶60（V/V）；流速為0.6 mL·min-1、1.0 mL·min-1、0.8 mL·min-1和0.5 mL·min-1；進(jìn)樣量為10 μL；柱溫為35 ℃；外標(biāo)法定量。

1.3.2 樣品處理

稱取50 g大白菜樣品，放入錐形瓶中待用，向錐形瓶中加入80 mL的水，浸泡樣品30～45 min，浸泡完成后，向其加入按照5∶1比例配制的正己烷和丙酮混合液30 mL[1]?；旌暇鶆蚝螅袷幪崛? h，到時間后取下抽濾，剩下的濾液用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，然后放置在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，水浴真空模式下進(jìn)行處理，在35 ℃下蒸發(fā)至樣品呈現(xiàn)近似干燥的狀態(tài)，然后將樣品取出待凈化。

1.3.3 樣品凈化

選取30 cm×15 mm規(guī)格的玻璃層析柱作為主要設(shè)備開展凈化，凈化前需先使用15 mL正己烷預(yù)淋洗濕潤玻璃層析柱，然后依次向玻璃層析柱中添加4 cm厚的無水硫酸鈉，4 g弗羅里硅土和0.8 g粉末活性炭混合物，4 cm厚的無水硫酸鈉[2]。然后用20 mL淋洗液（乙腈∶甲苯=3∶1，V/V）洗脫，收集洗脫液，將洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在35 ℃下水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，冷卻后用甲醇定容，待檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測波長選擇

用PDA檢測器對供試4種農(nóng)藥進(jìn)行三維掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氯氰菊酯在225 nm處有較大吸收，且基線噪音小，色譜峰的信噪比更為理想，因此選擇225 nm作為氯氰菊酯的檢測波長；聯(lián)苯菊酯在210 nm處有較大吸收，且基線噪音小，色譜峰的信噪比更為理想，因此選擇210 nm作為聯(lián)苯菊酯的檢測波長[3]。采用同樣方法對噻蟲嗪、吡蟲啉進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)噻蟲嗪適宜以254 nm波長進(jìn)行檢測，而吡蟲啉適宜在270 nm波長下進(jìn)行檢測。

2.2 流動相選擇

本次實(shí)驗(yàn)研究分別對乙腈+水、甲醇+水兩組流動相不同配比進(jìn)行了研究，先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，得到分離結(jié)果后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的比例。研究結(jié)果表明，在甲醇+水流動相的體積比為4∶6時，具有較好的色譜分離效果，且此時的基線表現(xiàn)相對穩(wěn)定、噪音較小，樣品中的雜質(zhì)峰能夠與氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉色譜峰完全分離；而采用乙腈+水作為本次實(shí)驗(yàn)的流動相經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證也可以很好地分離目標(biāo)，但同時考慮到乙腈具有較強(qiáng)的毒性，因此本次實(shí)驗(yàn)采用甲醇+水作為流動相。

2.3 線性范圍和相關(guān)性

分別配制0.02 mg·mL-1、0.15 mg·mL-1、0.45 mg·mL-1、1.00 mg·mL-1、2.20 mg·mL-1和3.00 mg·mL-1的系列質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，并按照對應(yīng)的色譜條件對其進(jìn)行分析，從而將殘留農(nóng)藥質(zhì)量濃度（x）與其對應(yīng)的色譜峰面積（y）進(jìn)行線性回歸，進(jìn)而得出4種殘留農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線[4]。計(jì)算結(jié)果表明，氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉在0.02～0.30 mg·mL-1呈現(xiàn)出良好的線性相關(guān)關(guān)系，而且其相關(guān)系數(shù)均維持在0.999 5以上，依據(jù)3倍信噪比來對各組樣品的最低檢出限進(jìn)行計(jì)算，得出的結(jié)果如表1所示，說明該方法檢出限較小，靈敏度較高。

表1 4種農(nóng)藥線性范圍、回歸方程以及檢出限表

2.4 回收率和精密度

選擇新鮮無雜質(zhì)的大白菜作為空白樣，并向空白樣中分別添加0.2 mg·kg-1、0.5 mg·kg-1、1.0 mg·kg-1的氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，并將添加水平設(shè)定為3個平行樣，依據(jù)回收率測定方法對加標(biāo)回收率和RSD進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果表明，平均回收率為83.0%～105.8%，RSD為0.5%～3.4%，具體如表2所示。這足以說明4種殘留農(nóng)藥的回收率均較高，且標(biāo)準(zhǔn)偏差值相對較小。由此可知，使用高效液相色譜法來對蔬菜農(nóng)藥殘留進(jìn)行測定具有很高的準(zhǔn)確度和精密度[5]。大白菜樣品以及添加回收色譜圖如圖1、圖2所示。

表2 4種樣品的添加回收率和精密度表

3 結(jié)論

本文以大白菜為具體研究對象，通過對提取條件、凈化條件以及色譜條件的合理選擇和完善，構(gòu)建了一種用于對蔬菜中氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉4種農(nóng)藥進(jìn)行同時測定的高效液相色譜法。該種方法使用乙腈溶液作為提取溶劑，利用高效液相色譜儀進(jìn)行測定，并采用外標(biāo)法進(jìn)行量化處理，從而獲得了較高的實(shí)驗(yàn)靈敏度和精準(zhǔn)度。綜合來講，該種方法具有高效簡便、上手容易等優(yōu)點(diǎn)，因此十分適用于對蔬菜中氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、噻蟲嗪、吡蟲啉農(nóng)藥殘留的檢測。