火棘果黃酮提取工藝優(yōu)化及其抗油脂氧化活性分析

火棘果是薔薇科常綠野生灌木果樹火棘的果實，主要分布在我國東南、 西南和西北部

。 火棘果提取物具有抗氧化、 增強(qiáng)免疫力、 促進(jìn)血凝等作用， 這與其含有槲皮素、 蘆丁等黃酮類化合物有關(guān)

。 黃酮類化合物不僅具有抗菌、 抗病毒、 抗腫瘤、 抗心血管疾病等廣泛的生理活性和藥理活性， 而且具有較強(qiáng)的抗氧化性能

。 各種食用油脂是人們?nèi)粘Ｉ钪胁豢苫蛉钡氖称吩希?但油脂在加工、 運輸和貯藏等過程中極易受到外界環(huán)境如光照等因素的影響發(fā)生氧化， 從而影響食用油脂品質(zhì)與安全

。 為保證油脂在貯藏期內(nèi)的穩(wěn)定性， 常在油脂中加入BHT、 TBHQ 等化學(xué)抗氧化劑以延緩食用油脂的氧化， 而這些人工合成抗氧化劑的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及其潛在毒性備受爭議

， 故無毒副作用的天然油脂抗氧化劑的開發(fā)受到了社會各屆的關(guān)注。 鑒于黃酮的抗氧化性能

， 本研究采用火棘果為原料， 提取其中黃酮類物質(zhì)， 以正交法優(yōu)化最佳提取工藝， 并探索火棘果黃酮在油脂中的抗氧化效果， 為開發(fā)天然高效的油脂抗氧化劑提供一定的理論依據(jù)與試驗基礎(chǔ)的同時， 實現(xiàn)商洛當(dāng)?shù)刈匀毁Y源的綜合開發(fā)利用。

圍手術(shù)期護(hù)理是從患者確定入院治療時起， 是對患者進(jìn)行心理、生理、社會等整體性護(hù)理，在整個圍手術(shù)期中，根據(jù)不同階段需求，給予護(hù)理措施[5]。陳秀麗等人[6]為探討鏡下切除腸息肉圍術(shù)期護(hù)理措施，納入251例結(jié)腸息肉患者例，對患者的腸息肉切除患者進(jìn)行圍術(shù)期護(hù)理，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鏡下息肉切除術(shù)是一種方便、快捷的治療方法，但易發(fā)生并發(fā)癥，因此應(yīng)加強(qiáng)患者的圍術(shù)期護(hù)理。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料及試劑 火棘果， 采自陜西省商洛市商州區(qū)； 乙醇、 石油醚、 三氯化鋁、 醋酸鈉等(均為分析純)， 國藥集團(tuán)； 蘆丁， 廣州分析測試中心科力技術(shù)開發(fā)公司； 菜籽油、 豬油(市售)。

1.1.2 主要儀器及設(shè)備 電熱恒溫水浴鍋(HH-6)，上海康華生化儀器制造廠； 紫外可見分光光度計(754型)， 上海菁華儀器有限公司； 電動研磨粉碎機(jī)(HXYM19)， 佛山市海迅電器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 原料的預(yù)處理 將采摘的火棘果清洗干凈， 放至恒溫干燥箱中60 ℃烘干(前后兩次質(zhì)量差不超過0.01~0.05 g)， 粉碎后， 過60 目篩后備用

。

2.2.4 提取溫度對提取效果的影響 由圖5 可知， 隨著提取溫度的增加， 火棘果黃酮的得率增加， 當(dāng)提取時間超過70 ℃時， 火棘果黃酮的得率呈現(xiàn)出下降趨勢。這可能是由于適當(dāng)升溫有利于黃酮類物質(zhì)的溶出、 擴(kuò)散； 但當(dāng)溫度過高時， 一方面乙醇提取劑開始揮發(fā)， 導(dǎo)致提取劑濃度降低， 另一方面溫度過高會造成黃酮物質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞， 影響黃酮提取效果， 致使黃酮得率降低

。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.012 5 g，加入乙醇溶解， 定容至100 mL， 即得蘆丁對照品溶液。準(zhǔn)確吸取對照品溶液0、 2.0、 4.0、 6.0、 8.0、 10.0 mL分別置于25 mL 容量瓶中， 加入AlCl

溶液2 mL 及NaCl溶液3 mL， 搖勻后在25 ℃環(huán)境中顯色5 min， 再以80%乙醇定容至刻度搖勻， 以80%乙醇溶液作空白對照， 在波長418 nm 處測定吸光度

， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.2 從最基本的需要滿足了農(nóng)村文化生活需要。在農(nóng)村鄉(xiāng)鎮(zhèn)官場開展的民間自娛性廣場文化，如村頭街尾的扭秧歌、交誼舞、健身操，公園、庭院的演唱會、故事會、讀書會等。這種類型的廣場文化不受時間、場地、服飾、設(shè)施、水平等條件的限制，多以健身強(qiáng)體、自娛自樂為目的。這種自娛性廣場文化滿足了農(nóng)民群眾精神生活的需求，起到了調(diào)節(jié)身心，陶冶思想情操，增進(jìn)人際交往，激發(fā)工作活力等最基本的作用。

1.2.4 樣品中黃酮含量的測定 準(zhǔn)確量取火棘果提取液2 mL 置于25 mL 容量瓶中， 按1.2.3 中的方法， 在波長418 nm 處測定吸光度， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算樣品濃度， 并通過式(1) 計算火棘果中黃酮類化合物的得率。

今后，只要在住宅小區(qū)內(nèi)有固定場所，為小區(qū)居民或村民提供自行車維修、小家電維修、縫紉修補、管道疏通和衛(wèi)生保潔等服務(wù)的，就可不辦理營業(yè)執(zhí)照，只要向所屬居委會或村委會備案即可。

1.2.5 火棘果黃酮提取的單因素試驗 (1) 料液比對提取效果的影響: 按照1.2.2 中的方法， 稱取10 g 火棘果粉末， 在乙醇濃度為75%、 提取溫度為70 ℃條件下提取3 h。 設(shè)置料液比為1 ∶5、 1 ∶10、 1 ∶15、 1 ∶20、1 ∶25 進(jìn)行試驗， 測定樣品吸光度并計算黃酮的得率。(2) 乙醇濃度對提取效果的影響: 按照1.2.2 中的方法， 稱取10 g 火棘果粉末， 在料液比為1 ∶15， 提取溫度為70 ℃條件下提取3 h。 設(shè)置乙醇濃度為55%、65%、 75%、 85%、 95% 進(jìn)行試驗， 測定樣品吸光度并計算黃酮的得率。 (3) 提取時間對提取效果的影響: 按照1.2.2 中的方法， 稱取10 g 火棘果粉末， 在料液比為1 ∶15、 乙醇濃度為75%、 提取溫度為70 ℃條件下， 設(shè)置提取時間為1、 2、 3、 4、 5 h 進(jìn)行試驗， 測定樣品吸光度并計算黃酮的得率。 (4) 提取溫度對提取效果的影響: 按照1.2.2 中的方法， 稱取10 g 火棘果粉末， 在料液比為1 ∶15、 乙醇濃度為75%、 提取時間為3 h 條件下， 設(shè)置提取溫度為50 ℃、 60 ℃、 70 ℃、 80 ℃、90 ℃進(jìn)行試驗， 測定樣品吸光度并計算黃酮的得率。

1.2.6 正交試驗 根據(jù)火棘果黃酮提取的單因素試驗結(jié)果， 以黃酮得率作為標(biāo)準(zhǔn)， 采用L

( 3

) 正交表進(jìn)行正交試驗， 優(yōu)化火棘果黃酮提取的最佳工藝條件(表1)。

2.2.2 乙醇濃度對提取效果的影響 由圖3 可知， 隨著乙醇濃度的增加， 火棘果黃酮的得率增加， 當(dāng)乙醇濃度超過75%時， 火棘果黃酮的得率呈現(xiàn)出下降趨勢。 這可能是由于當(dāng)乙醇濃度較小時， 乙醇濃度的增加會加大乙醇與溶質(zhì)接觸， 同時由于溶劑濃度不同極性不同， 在一定的乙醇濃度范圍內(nèi)， 會利于黃酮類物質(zhì)的溶出； 隨著乙醇濃度繼續(xù)增加， 親脂性成分(如鞣質(zhì)等) 會與黃酮類物質(zhì)競爭溶劑， 阻礙其溶出， 從而使火棘果黃酮的得率降低

。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.2.1 料液比對提取效果的影響 由圖2 可知， 隨著料液比的增加， 火棘果黃酮的得率增加， 當(dāng)料液比超過1 ∶15 時， 火棘果黃酮的得率呈現(xiàn)出下降趨勢。 這可能是由于溶劑量的增加， 加大了溶液傳質(zhì)推動力， 利于黃酮類物質(zhì)的溶出， 進(jìn)而提取率變大； 之后溶劑量的繼續(xù)增加， 會使雜質(zhì)溶出， 有礙黃酮類物質(zhì)溶出， 提取率下降

。

2.2 火棘果黃酮提取的單因素試驗結(jié)果

由圖1 可知， 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為

＝15.971

-0.011，

＝0.999 4 ＞0.999， 證明該回歸方程有效。

1.2.7 火棘果黃酮的抗油脂氧化性試驗 抗油脂氧化試驗設(shè)計2 組， 1 組為動物油新煉制豬油、 1 組為植物油菜籽油。 準(zhǔn)確稱取50.0 g 油脂數(shù)份， 置于100 mL 的燒杯中， 分別添加相同濃度的黃酮樣品、 蘆丁、 BHT(2， 6-二叔丁基對甲酚)， 并設(shè)置空白對照。 放置在(60±1)℃烘箱中， 每12 h 振蕩1 次， 并交換在烘箱中的位置。 定期測定過氧化值(POV)， 測定方法采用GB/T5538-2005/ISO 3960: 2001 《動植物油脂過氧化值測定》

。

2.2.3 提取時間對提取效果的影響 由圖4 可知， 隨著提取時間的增加， 火棘果黃酮的得率增加， 當(dāng)提取時間超過3 h 時， 火棘果黃酮的得率呈現(xiàn)出略微下降趨勢。這可能是由于在提取時間較短時， 黃酮與多糖等物質(zhì)結(jié)合不易溶出； 隨著時間的延長， 原料中的黃酮大量快速溶出， 得率升高； 但隨著提取時間繼續(xù)增加， 由于黃酮含量為一定值， 大部分黃酮已基本溶出后， 溶液趨于飽和， 黃酮含量不再升高； 若提取時間過長， 容易造成黃酮的緩慢分解， 使其得率下降

。

從信的內(nèi)容判斷，楊小水與常江的通信遠(yuǎn)遠(yuǎn)不止這八封，有些信可能弄丟了。按時間順序，頭兩封信簡單，客氣，就像兩個陌生人見面先握手，然后才試探著深入。

式(1) 中，

—測定液中黃酮類化合物的濃度(mg/mL)、

—提取液的總體積(mL)、

—稱取的樣品質(zhì)量(mg)

1.2.2 樣品的制備 以石油醚為溶劑， 采用索氏提取法對火棘果進(jìn)行脫色處理。 脫色后的火棘果中加入乙醇， 回流提取并抽濾， 收集濾液， 得到樣品溶液。

回煞這個儀式，在納平山和相距十多公里的坡業(yè)不同。據(jù)坡業(yè)的陶興文介紹，回煞之后，還有除靈，這是兩個時間上分開的儀式。而且，回煞不吹蘆笙，只有除靈才吹。但在納平山，回煞和除靈這兩個儀式，合二為一，一步到位，回煞的后半段就是除靈，期間還要吹16個“調(diào)”的蘆笙。

2.3 正交試驗優(yōu)化最佳提取工藝

根據(jù)火棘果黃酮提取的單因素試驗結(jié)果， 以黃酮得率作為標(biāo)準(zhǔn)， 選定料液比、 乙醇濃度、 提取時間、 提取溫度為正交試驗中的4 個因素， 優(yōu)化火棘果黃酮提取的最佳工藝條件。 由表2 可知， 4 種因素影響火棘果黃酮得率的主次順序為A ＞B ＞C ＞D， 即料液比＞乙醇濃度＞提取時間＞提取溫度。 正交試驗分析確定最佳的提取工藝條件組合為A

B

C

D

。

正交試驗分析的最優(yōu)組合A

B

C

D

與正交試驗(9組) 中最佳組合A

B

C

D

不一致。 為確定最優(yōu)的工藝條件， 進(jìn)行驗證試驗， 由表3 可知， 在A

B

C

D

工藝條件下， 火棘果黃酮得率為2.34%， 高于A

B

C

D

工藝條件下的火棘果黃酮得率2.23%， 因此得到最優(yōu)提取工藝條件組合為A

B

C

D

， 即料液比1 ∶15、 乙醇濃度為75%、 提取時間為3 h、 提取溫度為70 ℃。

2.4 火棘果黃酮的抗油脂氧化活性

選擇植物油脂中代表性的菜籽油、 動物油脂中代表性的豬油作為研究對象。 在2 種油脂中分別加入蘆丁、火棘果黃酮、 BHT， 分別設(shè)置空白對照， 測定這8 種組合放置期內(nèi)的POV。 由圖6 可知， 植物油脂在放置期內(nèi)的氧化酸敗現(xiàn)象不太明顯。 3 種抗氧化劑(火棘果黃酮、 BHT、 蘆丁) 對菜籽油的抗氧化效果相似， 且與空白組相差不大， 即在植物油脂中加入抗氧化劑的意義不大， 這可能是由于植物油脂中含有一些天然的維生素，如維生素E 等具有抗氧化的作用

。

與之形成鮮明對比的是動物油脂， 在放置期內(nèi)， 尤其是后期發(fā)生明顯的氧化酸敗現(xiàn)象， POV 迅速升高。 3種抗氧化劑(火棘果黃酮、 BHT、 蘆丁) 對豬油的抗氧化效果不盡相同。 空白豬油組伴隨著時間的推移， 迅速發(fā)生急劇的氧化酸敗現(xiàn)象； 蘆丁對豬油沒有明顯的抗氧化效果， 與空白組相差不大； BHT 干擾游離基反應(yīng)， 可以有效清除自由基

， 對豬油的氧化酸敗有強(qiáng)烈的抑制作用， 20 d 時過氧化值基本保持不變； 黃酮類化合物是作為金屬離子絡(luò)合物來抑制油脂的自動氧化， 火棘果黃酮可與微量金屬元素螯合以減少自由基的產(chǎn)生， 因而能夠消除金屬離子對油脂的催化作用， 從而發(fā)揮抗氧化功能， 其抗氧化效果明顯， 但不及BHT。

根據(jù)40例頸部富血供包塊患者的臨床診斷資料及其在CT掃描診斷與MRI掃描診斷中的實際表現(xiàn)，對比研究影像學(xué)特征。綜合性的研究CT掃描診斷與MRI掃描診斷頸部富血供包塊的臨床效果。

3 結(jié)論與討論

本研究以乙醇為溶劑提取火棘果中的黃酮， 并對其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化， 同時探索火棘果黃酮對于不同油脂的抗氧化活性。 通過正交試驗確定火棘果中黃酮提取的最佳工藝組合為A

B

C

D

， 即料液比1 ∶15、 乙醇濃度為75%、 提取時間為3 h、 提取溫度為70℃。 其中， 4種因素影響火棘果黃酮得率的主次順序為料液比＞乙醇濃度＞提取時間＞提取溫度。 此工藝下， 火棘果黃酮的得率為2.34%。 植物油脂在放置期內(nèi)氧化現(xiàn)象不明顯，而動物油脂在放置期內(nèi)發(fā)生明顯的氧化酸敗現(xiàn)象， POV迅速升高。 火棘果黃酮在菜籽油中添加的意義不大， 但在豬油中添加火棘果黃酮可以有效地延緩豬油的氧化，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗油脂氧化活性。

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