沒食子酸檢測方法的研究進(jìn)展

沒食子酸是一種天然多酚類化合物， 廣泛存在于五倍子、 拳參、 地榆、 余甘子等中藥材

， 具有抗菌、抗炎、 抗氧化、 抗病毒、 抗腫瘤、 降脂、 降糖、 保護(hù)心腦血管等藥理作用

。 《中國藥典》 將沒食子酸作為五倍子、 拳參、 地榆、 余甘子等中藥材的有效活性成分。LY/T 1302—2016 等標(biāo)準(zhǔn)將沒食子酸作為五倍子等中藥材分等分級的重要指標(biāo)。 隨著中藥材產(chǎn)業(yè)化和市場化的不斷擴大和升級， 五倍子等中藥材質(zhì)量安全問題凸顯，如不同產(chǎn)地、 貯存年限的中藥材混收混用導(dǎo)致藥效不穩(wěn)定

， 這些問題不僅影響中藥材質(zhì)量安全， 危害公眾健康， 也阻礙著中藥材產(chǎn)業(yè)和中醫(yī)藥事業(yè)健康發(fā)展。 因此， 亟需建立科學(xué)有效的沒食子酸檢測方法為五倍子、余甘子、 拳參等中藥材質(zhì)量評價提供技術(shù)支撐。

1 沒食子酸檢測的意義

沒食子酸廣泛存在于石榴、 茶葉、 酒等農(nóng)產(chǎn)品及食品中

。 NG 等

發(fā)現(xiàn)， 年份越高的蘇格蘭酒中沒食子酸含量也越高， 12 年、 17 年、 30 年的蘇格蘭酒中沒食子酸含量分別為2.4、 7.0、 37.6 mg/L， 認(rèn)為沒食子酸可作為蘇格蘭酒的品質(zhì)評價指標(biāo)。 郭炳瑩等

報道沒食子酸含量與綠茶品質(zhì)等級呈正相關(guān)， 如平炒青的1~2 等級中沒食子酸含量為0.188 6%， 而4 ~8 級中沒食子酸含量為0.147 5%， 因此沒食子酸可作為綠茶的品質(zhì)評價指標(biāo)， 沒食子酸的檢測對于農(nóng)產(chǎn)品及食品的品質(zhì)評價與質(zhì)量控制具有重要意義。

取出生48 h的乳鼠分離提取腹股溝脂肪進(jìn)行培養(yǎng)，貼壁生長后為P0代，然后消化傳代為P1代以備后面實驗使用。

2 沒食子酸的檢測方法

目前， 研究者針對中藥材、 中藥復(fù)方制劑、 水果等建立了不同的沒食子酸檢測方法， 包括色譜法、 光譜法、 毛細(xì)管電泳法等(附表)。

交通方式劃分是以出行者選擇交通工具的比例為依據(jù)，以居民出行調(diào)查數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)，研究人們出行時所選擇的交通方式，從而建立模型預(yù)測交通需求的變化.主要方法有轉(zhuǎn)移曲線法、重力模型的轉(zhuǎn)換模型、回歸模型法、概率模型法等.

2.1 色譜法

在我國相當(dāng)長的時間里一直處于應(yīng)試教育的大環(huán)境下，如何提高學(xué)生的考試成績就是整個教學(xué)工作的中心.這樣的教育體制在近些年來越來越暴露其出現(xiàn)的問題，高分低能日益顯現(xiàn).以高中的數(shù)學(xué)教學(xué)為例，教師只是一味地去灌輸，去告訴學(xué)生解題的過程和答案，如何才能在高考的數(shù)學(xué)中獲得高分，而卻完全忽視對于學(xué)生的個人核心素養(yǎng)的培養(yǎng)，并沒有從根本上調(diào)動學(xué)生的積極性，學(xué)生缺乏學(xué)習(xí)數(shù)學(xué)的主動性和探索知識的創(chuàng)造性.同時，在高中的數(shù)學(xué)課堂上，學(xué)生處于聽課狀態(tài)的時間較長，而真正動手練習(xí)的機會較少，更不用說小組合作探究與自我總結(jié)反思更被忽略了.如果長此下去，勢必會嚴(yán)重地影響學(xué)生的核心素養(yǎng)的提高，甚至?xí)绊憞液兔褡宓奈磥?/p>

2.1.1 薄層掃描法 薄層掃描法是用一定波長的光照射在薄層板上， 對薄層色譜中有紫外或可見吸收的斑點或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點進(jìn)行掃描， 將獲得的圖譜及積分值用于分析的方法。 劉文等

采用反向鋸齒薄層掃描法建立了余甘子中沒食子酸的檢測方法， 該方法線性范圍為0.535~4.280 μg/μL， 平均加樣回收率為99.11%。 Anandjiwalal 等

采用薄層色譜光密度法建立了田繁縷中沒食子酸的檢測方法， 測得田繁縷中沒食子酸的含量為0.288%。 Zeng 等

應(yīng)用聚酰胺膜薄板建立了薄層掃描法， 用于檢測古銀葉渣提取物和土耳其膽膏中沒食子酸， 該方法線性范圍為0.001 ~0.005 mg/g，相關(guān)系數(shù)為0.999， 平均回收率為98.59%。 薄層掃描法前處理要求低， 可同時分析多個樣品， 但由于制板、 點樣、 展開等操作的差異， 穩(wěn)定性較差。

2.2.1 近紅外光譜法 近紅外光譜易受樣品粒度、 儀器狀態(tài)與檢測條件等多種因素影響， 出現(xiàn)基線漂移、 光散射等干擾分析準(zhǔn)確度， 可對光譜進(jìn)行恰當(dāng)?shù)念A(yù)處理以減少干擾， 并能夠更好地提取光譜的特征信息

。 顧志榮等

通過化學(xué)計量學(xué)進(jìn)行預(yù)處理， 以最小二乘法建立定量分析模型， 并通過高效液相色譜法測定化學(xué)參考值， 建立了鎖陽中沒食子酸的定量分析方法， 該方法沒食子酸模型預(yù)測值和真實值的相對誤差在0.84% ~7.1%內(nèi)， 平均回收率為101.6%， 由此所建模型預(yù)測結(jié)果準(zhǔn)確、 可靠， 方法操作簡單、 快速。 ALFEI 等

使用傅立葉變換紅外光譜技術(shù)， 通過獲取不同沒食子酸濃度下的光譜， 選定光譜數(shù)據(jù)并使用最小二乘法建立線性回歸模型， 對測試樣品聚合物中沒食子酸進(jìn)行分析， 該法檢測限為0.011 89 mg/mL， 定量限為0.036 04 mg/mL。近紅外光譜法對于樣品中沒食子酸的前處理簡單、 檢測快速方便， 可以作為半定量分析用于大規(guī)模篩查。

高楊亞雅等

采用毛細(xì)管電泳法建立了拳參飲片中沒食子酸的檢測方法， 其中緩沖液為20 mmol/L 硼砂溶液(pH ＝9.0)， 運行電壓為20 kV， 檢測波長為290 nm， 進(jìn)樣壓力為5 kPa， 進(jìn)樣時間10 s， 運行溫度為室溫， 該方法線性范圍為0.225 ~2.250 mg/mL， 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.37%， 加樣回收率為105.9%。 瞿海云等

建立了毛細(xì)管電泳高頻電導(dǎo)法測定5 倍子中沒食子酸， 該方法可在5.5 min 內(nèi)完成沒食子酸測定， 檢測限為1.0 μg/mL， 回收率為96.8 % ~ 99.0%。 毛細(xì)管電泳法能夠在短時間內(nèi)測定沒食子酸的含量， 但是在分析過程中， 吸附引起電滲變化， 使得毛細(xì)管電泳重現(xiàn)性較差。 解決電滲問題， 對于短時間分析沒食子酸毛細(xì)管電泳法將是較好的選擇。

2.1.4 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 氣相色譜對有機化合物具有有效的分離、 分辨能力， 而質(zhì)譜則是準(zhǔn)確鑒定化合物的有效手段。 沒食子酸結(jié)構(gòu)上存在羧基和羥基， 酯化或?；疾荒芤淮涡酝耆貙]食子酸衍生化， 申銅飛

采用硅烷化的衍生方法應(yīng)用電子轟擊離子源， 以苯甲酸乙酯作為內(nèi)標(biāo)物建立氣相色譜-質(zhì)譜法分析藏青果中沒食子酸， 該方法沒食子酸的濃度在0.20 ~1.60 mg/L 的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系， 相關(guān)系數(shù)為0.998，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.02%。 氣相色譜-質(zhì)譜法分離性能和檢測性能高， 分析時間相對較快， 但檢測結(jié)果會由于樣品提取方法不同而導(dǎo)致沒食子酸的分析結(jié)果受到影響。

2.2.2 差示分光光度法 差示法采用比待測溶液濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為參比溶液， 測量待測溶液的吸光度， 根據(jù)測得吸光度計算濃度， 這樣可提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確度

。 彭燕等

利用沒食子酸在0.1 mol/L 氫氧化鈉溶液(參比液) 和0.1 mol/L 鹽酸溶液(測定液) 中， 于波長272 nm 處存在差示吸收值， 建立了差示分光光度法，通過差示值測定西帕依固齦液中沒食子酸的含量， 該方法加樣回收率為100.7%， 且不受基質(zhì)中其他成分的干擾。差示法中可以減少基質(zhì)中其他成分的影響， 提高分析沒食子酸的準(zhǔn)確度， 可用于液體樣品中沒食子酸的檢測分析。

2.2 光譜法

2.4.1 分子印跡法 分子印跡法具有可預(yù)測結(jié)構(gòu)、 特異性識別的特點， 在不同領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用

。 陳星光

將電化學(xué)檢測技術(shù)、 分子印跡技術(shù)、 聚吡咯材料、 金屬-有機框架材料和納米材料聯(lián)用， 構(gòu)建了分子印跡電化學(xué)傳感器檢測沒食子酸， 該方法檢測限為0.297 pmol/L， 且對沒食子酸結(jié)構(gòu)類似物具有良好的抗干擾效果。 Yang 等

研制了一種低成本分子印跡電位傳感器， 用于精密測定可食用植物中沒食子酸的含量，該傳感器的傳感元件是通過在聚氯乙烯基體中加入以三甲基丙烷三丙烯酸酯和2， 2-偶氮雙異丁腈為交聯(lián)劑和反應(yīng)引發(fā)劑合成的印跡聚合物制備而成的。 在1×10

~3.2×10

mol/L 范圍內(nèi)， 該傳感器對沒食子酸具有快速反應(yīng)， 同時采用高效液相色譜法對可食用植物中沒食子酸進(jìn)行了檢驗， 2 種檢測結(jié)果無顯著性差異(

＞0.05)， 回收率為95.2% ~98.4%。 分子印跡具有很強的特異性， 可以消除樣品基質(zhì)對沒食子酸檢測結(jié)果的影響， 結(jié)合不同的檢測方法提高檢測靈敏度。

2.1.2 高效液相色譜法 高林曉等

建立了高效液相色譜法測定刺三加葉中沒食子酸的含量， 樣品先后經(jīng)沸水和石油醚浸泡， 再經(jīng)乙醇溶液超聲提取， 該方法的檢測限為0.03 mg/L， 定量限為0.08 mg/L， 平均加標(biāo)回收率為99.4%， 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.97%。 Song 等

建立了固相萃取-高效液相色譜法測定大黃煎劑中沒食子酸的方法， 使用C

柱通過固相萃取對分析物進(jìn)行預(yù)處理，該方法線性范圍為4.66~233 g/mL， 檢測限和定量限分別為0.466 、 0.621 μg/mL。 田明

建立了超高效液相色譜法測定血美安膠囊中沒食子酸的含量， 該方法線性范圍為3.36~84.10 μg/mL， 平均回收率分別為98.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.83%。 高效液相色譜具有選擇性好、靈敏度高、 穩(wěn)定性好等優(yōu)點， 是檢測沒食子酸應(yīng)用最普遍的方法

， 但對于沒食子酸的檢測存在時間長等問題， 需要開發(fā)更簡便的前處理方式。

本次比賽得到了各參賽館的高度重視，中共上海市委黨校圖書館館長唐月娥和副館長李敏、上海財經(jīng)大學(xué)圖書館書記戴洪霞、上海對外經(jīng)貿(mào)大學(xué)圖書館館長王群、上海中醫(yī)藥大學(xué)圖書館黨總支書記兼副館長石德響、復(fù)旦大學(xué)圖書館副書記史衛(wèi)華、同濟大學(xué)圖書館副書記危紅、華東師范大學(xué)圖書館副館長周健、華東政法大學(xué)圖書館副館長吳志鴻、上海師范大學(xué)圖書館副館長莊雷、上海工程技術(shù)大學(xué)圖書館副館長盛芳和王鎮(zhèn)、上海健康醫(yī)學(xué)院圖書館副館長柳麗花、奉賢區(qū)圖書館副館長浦颯、松江區(qū)圖書館副館長奚建治等出席并擔(dān)任各獎項頒獎嘉賓。

沒食子酸色譜法檢測技術(shù)大多基于液相色譜和氣相色譜， 按照不同的檢測需求， 與不同檢測器聯(lián)用， 對沒食子酸分析檢測。

2.3 毛細(xì)管電泳法

2.1.3 液相-質(zhì)譜聯(lián)用 黃旭東等

采用高效液相-電噴霧離子源及多反應(yīng)監(jiān)測模式定量分析寧泌泰膠囊中沒食子酸， 該方法檢測限和定量限分別為2.5、 5.0 ng/mL。 秦鵬等

建立超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定葉下珠中沒食子酸的含量， 對葉下珠進(jìn)行超聲提取， 采用電噴霧離子源進(jìn)行負(fù)離子掃描。 該方法線性范圍為0.300 ~30.0 μg/mL， 平均回收率為98.1%， 并測得葉下珠沒食子酸含量為12.88 ~70.65 μg/g。 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)法靈敏度高， 不依賴于峰與峰之間的分離度， 信號采集時間短， 為分析沒食子酸提供了可靠方法。

2.4 其他方法

光譜法是一種基于物質(zhì)與輻射能作用時， 分子發(fā)生能級躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、 吸收或散射的光波長或強度進(jìn)行分析的方法。 目前用于沒食子酸檢測的光譜法主要有近紅外光譜法和分光光度法。

2.4.2 化學(xué)修飾電極法 化學(xué)修飾電極是當(dāng)前電化學(xué)和電分析化學(xué)領(lǐng)域非?；钴S的研究熱點。 羅君華

將聚乙烯亞胺功能化的石墨烯直接滴涂在打磨光亮的玻碳電極表面制備了聚乙烯亞胺功能化的石墨烯修飾電極， 首次應(yīng)用于黑茶和綠茶中沒食子酸的分析檢測， 方法檢測限為0.07 mg/L， 回收率分別為99.50% ~102.9%和93.49%~100.7%。 Chen

采用石墨烯修飾玻碳電極(石墨烯/GCE) 建立了沒食子酸測定方法， 通過脈沖循環(huán)伏安法研究了沒食子酸在該晶體電極上的一種基于電化學(xué)鍵的運動反應(yīng)行為， 并構(gòu)建了標(biāo)準(zhǔn)曲線， 該方法對8.0 ×10

~2.0×10

mol/L 濃度范圍內(nèi)的沒食子酸呈現(xiàn)響應(yīng)， 檢測限為1.2×10

mol/L， 回收率為97.9% ~100.6%。 化學(xué)修飾電極法分析沒食子酸不易受其他干擾物質(zhì)的影響， 靈敏度高， 但檢測器的不同可能會影響檢測結(jié)果。

（一）片面理解“以讀為本”的內(nèi)涵。新課程指出，閱讀教學(xué)要“以讀為本”。確實，“讀”是閱讀教學(xué)永恒的主題?！耙宰x為本”是閱讀教學(xué)的基本理念。但“讀”不僅僅體現(xiàn)為書聲瑯瑯的有聲朗讀，還有同樣重要的靜思默讀。《語文課程標(biāo)準(zhǔn)》指出：“各個學(xué)段的閱讀教學(xué)都要重視朗讀和默讀，加強對閱讀方法的指導(dǎo)?！倍覍Ω鲗W(xué)段的閱讀教學(xué)均提出了明確的要求。眾所周知，語文課程目標(biāo)之一是“養(yǎng)成語文學(xué)習(xí)的良好習(xí)慣，掌握最基本的語文學(xué)習(xí)方法”。

2.4.3 流動注射化學(xué)發(fā)光法 流動注射化學(xué)發(fā)光技術(shù)是化學(xué)發(fā)光分析與流動注射相結(jié)合的高靈敏痕量分析技術(shù)， 該檢測方法快速、 重現(xiàn)性好、 自動化程度高， 現(xiàn)已受到人們的普遍關(guān)注

。 李青輕等

基于沒食子酸對Luminol-NaIO

發(fā)光體系強烈的增敏作用， 建立了流動注射化學(xué)發(fā)光方法， 用于測定紅酒中沒食子酸的含量， 該方法線性范圍為1.0 ×10

~1.0 ×10

mol/L， 檢測限低至3.1 ×10

mol/L， 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%。 方盧秋等

利用酸性介質(zhì)中Fe

-H

O

體系生成羥基自由基氧化沒食子酸產(chǎn)生微弱的化學(xué)發(fā)光， 用18 mol/L HCl、0.04 mol/L FeCl

、 1.0 mol/L H

O

與1.0 ×10

mol/L 羅丹明6G 溶液組成最優(yōu)的化學(xué)發(fā)光體系增敏化學(xué)發(fā)光，建立快速簡便的流動注射化學(xué)發(fā)光分析法， 用于測定中藥材中沒食子酸， 該方法在沒食子酸濃度1.0 ×10

~1.0×10

g/L 和0.0l~1.0 g/L 范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強度呈良好的線性關(guān)系， 相關(guān)系數(shù)分別為0.998 4、 0.994 7，檢測限為3.0×l0

g/L。 流動注射化學(xué)發(fā)光方法利用沒食子酸與發(fā)光體系檢測沒食子酸， 該方法的檢測限較低， 可用于沒食子酸的精密分析。

3 結(jié)論

近年來， 國內(nèi)外研究者開發(fā)了許多沒食子酸的檢測方法， 這些方法在靈敏度、 穩(wěn)定性等方面各具特色。 薄層掃描法的主要優(yōu)點是操作簡便， 但檢驗靈敏度相對較差。 分光光度法樣品前處理簡單， 但檢驗結(jié)果的穩(wěn)定性相對較低。 高效液相色譜法、 液相色譜-質(zhì)譜法、 氣相色譜-質(zhì)譜法等靈敏度高， 重現(xiàn)性好， 但檢驗儀器昂貴，對檢測人員要求高。 沒食子酸在中藥材、 中藥復(fù)方制劑、 水果等農(nóng)產(chǎn)品及制品中都有所存在， 沒食子酸的檢測有助于支撐產(chǎn)品品質(zhì)評價、 分等分級及質(zhì)量控制。 目前， 沒食子酸的檢測方法無法滿足大規(guī)模的現(xiàn)場篩查工作， 未來研究建立便捷、 靈敏、 快速、 可實現(xiàn)現(xiàn)場檢測的沒食子酸檢測方法， 將能更好地推進(jìn)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

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