一例大林羚腸毒血癥的診斷

鄭秉武 智 宇 李彥軍 丁玉林 高 雅 劉佳利 張承天 王金玲*

(1.呼和浩特市動(dòng)物園，呼和浩特，010050；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，呼和浩特，010051；3.內(nèi)蒙古阿拉善右旗動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，阿拉善右旗，737300；4.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特，010010)

腸毒血癥(entorotoxaemia)是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens，魏氏梭菌)所引起的家養(yǎng)動(dòng)物、野生動(dòng)物和人的一種急性致死性傳染病[1-2]。大林羚(Tragelaphusoryx)，也叫大羚羊，屬于林羚屬的反芻動(dòng)物，分布于非洲南部、中部和東部，從南非北部至剛果民主共和國(guó)和肯尼亞均有分布。大林羚的棲息地主要是林地和稀樹草原，從沿海平原至山區(qū)，從半沙漠到降雨量相對(duì)較高的地區(qū)。目前，大林羚是野生動(dòng)物園內(nèi)重要的觀賞動(dòng)物，關(guān)于其疾病的報(bào)道只涉及創(chuàng)傷性蠅蛆病[3]、睪丸小結(jié)石、腫瘤病[4]、牛病毒性腹瀉[5-6]、心包黏液樣脂肪肉瘤[7]和眼內(nèi)線蟲病[8]，尚未有腸毒血癥的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過多種方法確診了1例大林羚腸毒血癥的死亡病例，為大林羚腸毒血癥的診斷和防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

1只病死成年大林羚，由大青山野生動(dòng)物園提供。6只6周齡昆明種小白鼠(SPF級(jí))，購(gòu)于斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司。

1.2 尸體剖檢

對(duì)病死大林羚進(jìn)行系統(tǒng)尸體剖檢，觀察和記錄大體病變。剖檢過程中分別取心、肝、脾、肺和腎等各組織器官(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)，立即放入10%福爾馬林溶液中固定。

1.3 病理組織切片制備和觀察

對(duì)固定24 h的組織進(jìn)行修塊，脫水、透明、石蠟包埋、切片(厚度為3 μm)、蘇木素-伊紅染色(HE)、封片和烤片后，顯微鏡下觀察。

1.4 觸片檢查

無菌環(huán)境下，在嚴(yán)重出血的小腸黏膜表面制備觸片，自然干燥，革蘭氏染色，油鏡下觀察。

1.5 小白鼠毒素試驗(yàn)

取空腸血樣內(nèi)容物3 mL，加2倍生理鹽水稀釋后，3 000 r/min 離心5 min，取上清液，均勻分成2份，1份60 ℃加熱30 min，1份不加熱。取6只小白鼠，隨機(jī)分為2組，3只/組。2份上清液分別腹腔注射于1組小白鼠，1.2 mL/只，觀察結(jié)果至接種后24 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床病史

2016年8月31日晨，動(dòng)物園僅存的1只15歲大林羚死于圈舍內(nèi)，死亡前1 d未出現(xiàn)任何臨床癥狀，于死亡當(dāng)日上午進(jìn)行全面的尸體剖檢。

2.2 剖檢病變

尸體角弓反張(圖1A)，眼結(jié)膜和肛門黏膜輕度發(fā)紺?？漳c出血性腸炎，腸壁變薄，局部腸管內(nèi)有較多血樣內(nèi)容物(圖1B)，腸黏膜呈彌漫性深紅色。十二指腸黏膜嚴(yán)重出血性腸炎，腸黏膜彌漫性暗紅色到黑紅色，腸腔內(nèi)充有大量血樣內(nèi)容物(圖1C)。皺胃黏膜充血呈紅色，黏膜面有大量出血性壞死灶。輕度腹腔積水，腹水呈淡黃色。心包腔內(nèi)積有較多淡黃色透明液體，左心室向心性肥大，心壁增厚明顯。肝臟和腎臟腫大，呈暗紅色至黑紅色。肺臟大面積呈暗紅色，質(zhì)度輕度變實(shí)，尖葉和心葉氣腫嚴(yán)重。全身淋巴結(jié)輕度腫大。其他組織器官無明顯眼觀病理變化。

2.3 組織病理學(xué)變化

十二指腸和空腸嚴(yán)重的出血性壞死性腸炎，整個(gè)腸黏膜層均發(fā)生壞死，呈均質(zhì)粉紅染(圖1D)，伴有大小不等的出血灶或彌漫性出血。大腸局部黏膜絨毛頂部上皮細(xì)胞壞死，肌層可見較多的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。壞死性皺胃炎，皺胃黏膜層水腫，局部胃黏膜在上1/3處壞死明顯，壁細(xì)胞變性明顯，可見散在壞死。中毒性肝損傷，肝淤血和水腫，狄氏腔顯現(xiàn)，肝細(xì)胞普遍小泡性脂肪變性和部分大泡性脂肪變性，肝細(xì)胞散在性壞死(圖1E)，肝小葉邊緣肝細(xì)胞壞死相對(duì)明顯。中毒性腎損傷，腎淤血，上皮細(xì)胞嚴(yán)重腫脹，呈明顯的顆粒變性和水泡變性，散在性壞死，細(xì)胞核濃縮(圖1F)。腎上腺髓質(zhì)腺上皮細(xì)胞多數(shù)腫脹，散在壞死。胰腺以整個(gè)腺胞為單位發(fā)生散在性壞死，壞死腺泡細(xì)胞胞漿紅染加深，核溶解消失。肺淤血，局部區(qū)域肺泡壁毛細(xì)血管內(nèi)可見較多中性粒細(xì)胞。其他組織器官不同程度充血和變質(zhì)。

圖1 大林羚病理結(jié)果

2.4 觸片檢查

產(chǎn)氣莢膜梭菌的菌體呈直桿狀，兩端鈍圓，單個(gè)或成雙，短鏈很少出現(xiàn)，革蘭氏染色陽(yáng)性。無鞭毛，不運(yùn)動(dòng)。芽孢大而卵圓，位于菌體中央或近端，使菌體膨脹[2]。通過革蘭染色，在大林羚腸黏膜觸片上可見散在或成簇的單個(gè)或成雙的革蘭陽(yáng)性粗大的桿菌，有的菌體中央已形成芽孢，與產(chǎn)氣莢膜梭菌形態(tài)一致(圖2)。

圖2 革蘭陽(yáng)性粗大的產(chǎn)氣莢膜梭菌 (×1 000)

2.5 小白鼠毒素試驗(yàn)

不加熱組小白鼠于接種后13～18 h全部死亡，加熱組小白鼠接種后24 h未見異常。試驗(yàn)結(jié)果表明腸血樣內(nèi)容物有致死性毒素存在。

3 診斷

根據(jù)臨床病史、剖檢病變、組織病理學(xué)變化、觸片檢查和毒素試驗(yàn)綜合診斷為大林羚腸毒血癥。

4 討論

家養(yǎng)反芻動(dòng)物的腸毒血癥主要見于牛[9-10]、羊[9-12]和駱駝[13]等，野生反芻動(dòng)物的腸毒血癥常見于鹿(Cervidae)[14]和羊駝(Vicugnapacos)[15-16]等，腸毒血癥還報(bào)道于豬[17]、馬[18]、貓科(Felidae)動(dòng)物[19]、熊(Ursidae)[20]、狐貍(Vulpes)[21]、雞[22]、鴕鳥(Struthiocamelus)[23]和白鸛(Ciconiaciconia)[24]等。反芻動(dòng)物腸毒血癥的臨床特點(diǎn)為發(fā)病急，死亡快，多數(shù)在沒有任何癥狀下突然死亡，生前有短暫的角弓反張、搐搦和昏迷等神經(jīng)癥狀[25]，具有證病意義的病變?yōu)槭改c和空腸嚴(yán)重的出血性或出血—壞死性腸炎，腸黏膜呈暗紅色或紫紅色血樣，腸腔內(nèi)有大量血樣內(nèi)容物，俗稱“血腸子病”。腎臟皮質(zhì)軟化而有波動(dòng)感，嚴(yán)重病例質(zhì)軟如泥，因此本病又有“軟腎病”之稱[25]。腎的軟化程度取決于動(dòng)物死后的剖檢時(shí)間，如果動(dòng)物死后短時(shí)間內(nèi)剖檢，常見腎臟腫大，淤血；若尸體在10 h后剖檢，則腎臟皮質(zhì)很快自溶而軟化[16，25]。在出血性壞死性腸炎病變基礎(chǔ)上，中毒性肝損傷在反芻動(dòng)物腸毒血癥時(shí)也具有特征性，肝臟表現(xiàn)肝淤血和水腫，肝細(xì)胞脂肪變性和散在性壞死，肝小葉邊緣肝細(xì)胞壞死相對(duì)明顯。

本研究中大林羚的十二指腸和空腸表現(xiàn)典型的出血性壞死性腸炎，與“血腸子病”病變相似?！败浤I病”的病變?cè)诒纠坏湫?，只出現(xiàn)腎臟腫大，但組織病理學(xué)病變顯示腎小管上皮細(xì)胞普遍腫脹和散在性壞死。這是由于本研究中大林羚于死亡后2 h內(nèi)剖檢，腎臟無明顯“軟腎病”病變。為了預(yù)防野生動(dòng)物園內(nèi)大林羚等動(dòng)物腸毒血癥的發(fā)生，建議定期進(jìn)行羊快疫、羊猝狙、羔羊痢疾和腸毒血癥三聯(lián)四防滅活疫苗免疫或定期在飼草料中添加磺胺咪片(按說明書用量)，1次/d，連續(xù)用藥3～5 d。