浙江長(zhǎng)興揚(yáng)子鱷種群遺傳多樣性研究

方黎明 付春正 李 慧 鄒衛(wèi)強(qiáng) 任大斌 徐菊敏 韓群花 萬(wàn)秋紅 方盛國(guó)*

(1.長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷自然保護(hù)區(qū)，長(zhǎng)興，313100；2.浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，生命系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(浙江大學(xué))，國(guó)家瀕危野生動(dòng)植物種質(zhì)基因保護(hù)中心(浙江大學(xué))，杭州，310058)

生物多樣性是指地球上生存的所有動(dòng)物、植物、微生物和這些生物所擁有的所有遺傳物質(zhì)，以及由這些生物構(gòu)成的生態(tài)系統(tǒng)，即由遺傳多樣性、物種多樣性和生態(tài)系統(tǒng)多樣性三部分組成，其中遺傳多樣性是生物多樣性的重要組成部分，是自然界中物種或種群內(nèi)各種不同等位基因的總和，表現(xiàn)為在生物體遺傳上的千差萬(wàn)別[1-5]。遺傳多樣性能夠反應(yīng)物種或種群的遺傳變異水平，生物的遺傳多樣性越高，其對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力就越強(qiáng)，生存能力也就越強(qiáng)，因此遺傳多樣性是衡量物種或種群生存、進(jìn)化和環(huán)境條件適應(yīng)的關(guān)鍵指標(biāo)[6-7]。此外，遺傳多樣性也是保護(hù)生物學(xué)研究的重要內(nèi)容之一，它可以在一定范圍內(nèi)決定物種的數(shù)量及分布范圍，如果缺乏對(duì)生物的遺傳多樣性研究，就無(wú)法準(zhǔn)確地認(rèn)識(shí)物種種群的地理分布格局、進(jìn)化歷史、適應(yīng)機(jī)理、物種數(shù)量增長(zhǎng)和滅絕等問(wèn)題[8-9]。

微衛(wèi)星標(biāo)記因多態(tài)性豐富、共顯性遺傳、易于檢測(cè)且有效性高和重復(fù)性好等特點(diǎn)，在分析物種或種群的遺傳多樣性及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系中表現(xiàn)出巨大的優(yōu)勢(shì)，被認(rèn)為是研究物種或種群遺傳變異的最優(yōu)分子標(biāo)記，廣泛應(yīng)用于羊、馬、牛、豬和雞等家畜、家禽的遺傳多樣性研究[10-18]。此外，微衛(wèi)星標(biāo)記檢測(cè)因?qū)δ０錎NA要求低，且操作過(guò)程簡(jiǎn)捷、高效和自動(dòng)化，在對(duì)瀕危野生動(dòng)物如揚(yáng)子鱷(Alligatorsinensis)、東北馬鹿(Cervuscanadensis)、朱鹮(Nipponianippon)、大熊貓(Ailuropodamelanoleuca)、虎(Pantheratigris)、豹貓(Prionailurusbengalensis)、丹頂鶴(Grusjaponensis)、東北梅花鹿(Cervusnipponhortulorum)和西伯利亞狍(Capreoluspygargus)[19-27]等的保護(hù)遺傳學(xué)研究中，該檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。

揚(yáng)子鱷是中國(guó)特有的珍稀瀕危物種，屬爬行綱(Reptilia)，鱷形目(Crocodylia)，鼉科(Alligatoridae)，短吻鱷屬(Alligator)[28-29]。該物種曾廣泛分布于我國(guó)大部分區(qū)域，南起海南儋州，北到新疆呼圖壁；西起新疆呼圖壁，東至浙江余姚，均有揚(yáng)子鱷分布[30]。但隨著氣候變遷、人類對(duì)揚(yáng)子鱷的過(guò)度捕殺及人類對(duì)揚(yáng)子鱷棲息環(huán)境的破壞，導(dǎo)致?lián)P子鱷分布范圍大幅縮小，現(xiàn)今揚(yáng)子鱷主要分布于浙江長(zhǎng)興和安徽宣城[30-31]。浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)始建于1979年，最初的種群由11條奠基揚(yáng)子鱷個(gè)體組成，截至2019年9月，該保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷數(shù)量已達(dá)6 691條[32-33]。浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)由核心區(qū)和野放區(qū)兩部分組成，核心區(qū)為揚(yáng)子鱷研究繁育中心，即最初建設(shè)的揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)所在區(qū)域；野放區(qū)在“國(guó)家Ⅱ期工程”——浙江省揚(yáng)子鱷放歸自然建設(shè)項(xiàng)目的資助下于2009年開(kāi)始建設(shè)，2011年完成[32，34]。2012年4月15日，保護(hù)區(qū)首次從核心區(qū)甄選120條揚(yáng)子鱷放歸至野放區(qū)，作為野放區(qū)的奠基種群[34-35]。自此，保護(hù)區(qū)每年都從核心區(qū)內(nèi)挑選一定數(shù)量的7～8齡的揚(yáng)子鱷放歸至野放區(qū)，截至2019年7月，已有960條揚(yáng)子鱷被放歸至野放區(qū)[34，36-37]。隨著野放區(qū)揚(yáng)子鱷的繁殖，野放區(qū)揚(yáng)子鱷已經(jīng)繁衍發(fā)育成一個(gè)數(shù)量較大的種群。

已有研究[32，38-40]大多利用微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群個(gè)體進(jìn)行親子鑒定，或?qū)ΡＷo(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群遺傳多樣性進(jìn)行整體性分析，并未對(duì)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群遺傳多樣性進(jìn)行單獨(dú)分析和比較，導(dǎo)致保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群遺傳多樣性差異研究尚有不足。因此，本研究通過(guò)隨機(jī)采集浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)的成年揚(yáng)子鱷血液樣本，利用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)，對(duì)核心區(qū)和野放區(qū)種群進(jìn)行遺傳多樣性分析，從而了解核心區(qū)和野放區(qū)種群的遺傳多樣性及種群遺傳分化情況，為核心區(qū)揚(yáng)子鱷放歸至野放區(qū)提供分子水平上的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集與DNA提取

1.2 微衛(wèi)星標(biāo)記及引物信息

13個(gè)多態(tài)性較高的微衛(wèi)星標(biāo)記信息見(jiàn)表1[38-39，43]。引物均由上海捷瑞生物工程有限公司合成，上游引物的5′端進(jìn)行熒光修飾(FAM、HEX或TAMRA)。

表1 微衛(wèi)星標(biāo)記信息

續(xù)表1

1.3 PCR擴(kuò)增及STR擴(kuò)增產(chǎn)物掃描分析

使用20.0 μL PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系，包括2×TaqMaster Mix(上海捷瑞生物工程有限公司)10.0 μL，ddH2O 8.0 μL，模板DNA 1.0 μL，上、下游引物各0.5 μL。PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，在各引物對(duì)應(yīng)的退火溫度下退火30 s，72 ℃延伸30 s，擴(kuò)增34個(gè)循環(huán)；72 ℃終延伸5 min，4 ℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳(120 V，30 min)檢測(cè)，將擴(kuò)增成功的PCR產(chǎn)物送至Invitrogen(上海英俊)生物技術(shù)有限公司進(jìn)行STR擴(kuò)增產(chǎn)物掃描分析，確定擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用GeneMarker v1.5讀取STR擴(kuò)增產(chǎn)物掃描分析結(jié)果，確定微衛(wèi)星標(biāo)記片段大??；使用Excel Microsatellite Toolkit version 3.1計(jì)算等位基因頻率、等位基因大小范圍、多態(tài)信息含量和數(shù)據(jù)格式轉(zhuǎn)化；等位基因數(shù)量、有效等位基因數(shù)量、觀測(cè)雜合度、期望雜合度、香農(nóng)信息指數(shù)和F-統(tǒng)計(jì)值用POPGENE 1.32計(jì)算；分子方差分析(AMOVA)、FST矩陣計(jì)算和基因流計(jì)算由Arlequin 3.5.2.2完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 等位基因分布及頻率

核心區(qū)和野放區(qū)130條揚(yáng)子鱷在13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中共檢測(cè)到31個(gè)等位基因，其中含有2個(gè)稀有等位基因(基因頻率<5.00%[44])。13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群中均表現(xiàn)出多態(tài)性，微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-9、CXA-34、CXA-35、CXA-43和CXA-136均具有3個(gè)等位基因，其余8個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記均具有2個(gè)等位基因。核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群在13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記上均具有相同的31個(gè)等位基因，平均等位基因數(shù)量均為2.38個(gè)。

13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因頻率在保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群間存在差異。CXA-4微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因共有2個(gè)，大小分別為123、128 bp，核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群基因頻率較高的等位基因是128 bp(64.62%)，而野放區(qū)為123 bp(52.31%)；CXA-41微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因共有2個(gè)，大小分別為156、160 bp，核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群基因頻率較高的等位基因是160 bp(57.69%)，而野放區(qū)為156 bp(53.08%)；CXA-43微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因共有3個(gè)，大小分別為113、117、129 bp，核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群基因頻率較高的等位基因是為113 bp(56.92%)，而野放區(qū)為117 bp(49.23%)。其余10個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-6、CXA-9、CXA-34、CXA-35、CXA-37、CXA-39、CXA-135、CXA-136、CXA-138和CXA-142，雖然每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因在核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群間的基因頻率存在差異，但每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的較高基因頻率的等位基因是一致的，如CXA-35微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因共有3個(gè)，大小分別為110、114、118 bp，核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群基因頻率較高的等位基因均為114 bp，頻率分別為87.69%和90.00%。此外，基因頻率<5.00%的等位基因包括微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-9的117 bp，核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群中該基因的頻率分別為3.08%和0.77%；微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-35的118 bp，核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群該基因的頻率分別為3.08%和4.62%(表2)。

表2 核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因長(zhǎng)度和頻率

2.2 微衛(wèi)星標(biāo)記的遺傳多樣性

保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群中的各遺傳多樣性參數(shù)詳見(jiàn)表3。13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因數(shù)量為2或3個(gè)，平均等位基因數(shù)量為2.38個(gè)；有效等位基因數(shù)量為1.26～2.59個(gè)，平均有效等位基因數(shù)量為1.88個(gè)，平均等位基因數(shù)量與平均有效等位基因數(shù)量存在差異。有效等位基因數(shù)量最高的微衛(wèi)星標(biāo)記是CXA-34，為2.59個(gè)；有效等位基因數(shù)量最低的微衛(wèi)星標(biāo)記是CXA-35，為1.26個(gè)。

表3 保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的遺傳多樣性參數(shù)

13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的觀測(cè)雜合度為0.21～0.75，平均觀測(cè)雜合度為0.50，觀測(cè)雜合度最高的微衛(wèi)星標(biāo)記為CXA-34；觀測(cè)雜合度最低的微衛(wèi)星標(biāo)記為CXA-9和CXA-35。13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的期望雜合度為0.20～0.62，平均期望雜合度為0.45，期望雜合度最高的微衛(wèi)星標(biāo)記為CXA-34；期望雜合度最低的微衛(wèi)星標(biāo)記為CXA-35。微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-9和CXA-43的觀測(cè)雜合度低于其期望雜合度。

13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的多態(tài)信息含量為0.19～0.54，平均多態(tài)信息含量為0.36，多態(tài)信息含量最高的微衛(wèi)星標(biāo)記為CXA-34；多態(tài)信息含量最低的微衛(wèi)星標(biāo)記為CXA-35。微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-34和CXA-43為高度多態(tài)標(biāo)記(多態(tài)信息含量>0.50[16])；微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-4、CXA-6、CXA-9、CXA-37、CXA-39、CXA-41、CXA-136、CXA-138和CXA-142為中度多態(tài)標(biāo)記(0.25<多態(tài)信息含量<0.50[16])；微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-35和CXA-135為低度多態(tài)標(biāo)記(多態(tài)信息含量<0.25[16])。13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的香農(nóng)信息指數(shù)為0.42～1.01，平均香農(nóng)信息指數(shù)為0.68，香農(nóng)信息指數(shù)最高的微衛(wèi)星標(biāo)記為CXA-34，最低的為CXA-35。

微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-34的各遺傳多樣性參數(shù)，包括有效等位基因數(shù)量、觀測(cè)雜合度、期望雜合度、多態(tài)信息含量和香農(nóng)信息指數(shù)的數(shù)值在13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中均最高，表明該微衛(wèi)星標(biāo)記的遺傳變異最大，遺傳多樣性最豐富；相反，微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-35的各遺傳多樣性參數(shù)在13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中均最低，表明該微衛(wèi)星標(biāo)記的遺傳變異最小，遺傳多樣性最匱乏。

2.3 核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群遺傳多樣性

核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群具有相同的平均等位基因數(shù)量，但核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群的平均有效等位基因數(shù)量高于野放區(qū)；核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群的平均觀測(cè)雜合度、平均期望雜合度、平均多態(tài)信息含量和平均香農(nóng)信息指數(shù)均高于野放區(qū)，表明野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群相較于核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳變異少，遺傳多樣性相對(duì)缺乏(表4)。

表4 核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性參數(shù)

2.4 保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳變異與分化

在保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群具有的總遺傳變異中，有96.83%的遺傳變異來(lái)源于各種群內(nèi)個(gè)體間的遺傳變異，僅有3.17%的遺傳變異來(lái)源于核心區(qū)和野放區(qū)種群間的遺傳變異，表明保護(hù)區(qū)種群內(nèi)的遺傳變異主要來(lái)源于個(gè)體之間的遺傳變異，核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群間的遺傳變異較少，遺傳分化程度較低(表5)。

表5 保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群遺傳變異的分子方差分析結(jié)果

13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群中的FIS值為-0.409 5(CXA-142)～0.289 9(CXA-9)，平均值為-0.153 1，其中只有微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-9的FIS值為正值，其余12個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的FIS值均為負(fù)值；13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群中的FIT值為-0.387 6(CXA-41)～0.301 4(CXA-9)，平均值為-0.130 0，其中微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-9和CXA-43的FIT值為正值，其余11個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的FIT值均為負(fù)值，且13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的FIS值均小于FIT值；13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群中的FST值為0.000 2(CXA-37、CXA-39和CXA-136)～0.056 7(CXA-135)，平均值為0.020 0(表6)。

13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群中的FIS值分別為-0.607 3(CXA-142)～0.413 7(CXA-9)和-0.588 4(CXA-34)～0.0851(CXA-35)；13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群中的FIT值與其自身的FIS值相同，且13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群中的FST值均為0(表6)。此外，保護(hù)區(qū)核心區(qū)與野放區(qū)的FST值為0.031 7，基因流為7.631 5(表7)，表明保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳分化程度較低。

表6 13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的F-統(tǒng)計(jì)值

表7 核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群間的FST值和基因流

3 討論

在微衛(wèi)星標(biāo)記的等位基因中，若某一等位基因的頻率很高，那么該等位基因則很容易遺傳給子代；而若某一等位基因的頻率<5.00%，則稱為稀有等位基因，其在生物種群繁衍過(guò)程中，遺傳給子代的概率很小，很容易在種群繁衍過(guò)程中消失[26，44]。因此，在保護(hù)瀕危動(dòng)物種群繁衍過(guò)程中所發(fā)現(xiàn)的稀有等位基因，也是瀕危動(dòng)物遺傳多樣性研究的重要內(nèi)容[26]。本研究中的13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群中共檢測(cè)到稀有等位基因2個(gè)，占所有等位基因的6.45%，分別為微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-9，長(zhǎng)度為117 bp，該基因在核心區(qū)和野放區(qū)種群中的頻率分別為3.08%和0.77%；微衛(wèi)星標(biāo)記CXA-35，長(zhǎng)度為118 bp，該基因在核心區(qū)和野放區(qū)種群中的頻率分別為3.08%和4.62%。稀有等位基因是生物進(jìn)化的重要成果，同樣也是遺傳多樣性保護(hù)的重要內(nèi)容，特別是對(duì)于像浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)中人工繁殖的瀕危小種群，檢測(cè)到的2個(gè)稀有等位基因很可能是最初揚(yáng)子鱷種群中相對(duì)普遍存在的等位基因，但由于20世紀(jì)60年代的氣候變遷，人類對(duì)揚(yáng)子鱷的過(guò)度捕殺和人類對(duì)揚(yáng)子鱷棲息環(huán)境的破壞，造成了揚(yáng)子鱷種群的遺傳瓶頸以及在保護(hù)過(guò)程中人工選擇造成的基因頻率下降。因此，為了保護(hù)浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性，這些稀有等位基因更應(yīng)該得到重視[24，26，45]。在將來(lái)的揚(yáng)子鱷繁育保護(hù)過(guò)程中，研究人員應(yīng)該重點(diǎn)關(guān)注具有稀有等位基因的揚(yáng)子鱷個(gè)體，如有必要，可對(duì)其進(jìn)行集中飼養(yǎng)繁育，防止稀有等位基因在揚(yáng)子鱷隨機(jī)交配繁衍過(guò)程中丟失，造成保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群遺傳多樣性的進(jìn)一步下降。此外，需對(duì)保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性進(jìn)行定時(shí)檢測(cè)，監(jiān)測(cè)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群內(nèi)稀有等位基因動(dòng)態(tài)變化情況，如發(fā)現(xiàn)其中一個(gè)區(qū)域的揚(yáng)子鱷種群稀有等位基因頻率快速下降且呈消失趨勢(shì)，應(yīng)及時(shí)在另一種群內(nèi)選取合適揚(yáng)子鱷個(gè)體補(bǔ)充至稀有等位基因即將消失的種群內(nèi)。

衡量微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)性的一個(gè)重要指標(biāo)是多態(tài)信息含量，當(dāng)一個(gè)標(biāo)記的多態(tài)信息含量>0.50時(shí)為高度多態(tài)標(biāo)記；0.25<多態(tài)信息含量<0.50時(shí)為中度多態(tài)標(biāo)記；多態(tài)信息含量<0.25時(shí)為低度多態(tài)標(biāo)記[6，46]。此外，微衛(wèi)星標(biāo)記的多態(tài)信息含量還與該標(biāo)記的可用性和使用效率相關(guān)，微衛(wèi)星標(biāo)記的多態(tài)信息含量越大，在一個(gè)生物種群中該標(biāo)記的雜合子比例就越大，提供的遺傳信息就越多[46]。本研究使用的13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記的多態(tài)信息含量為0.19～0.54，平均多態(tài)信息含量為0.36，其中2個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記為高度多態(tài)標(biāo)記，9個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記為中度多態(tài)標(biāo)記，2個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記為低度多態(tài)標(biāo)記，因此本研究使用的13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記可作為研究浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群遺傳多樣性的有效遺傳標(biāo)記[47]。浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的平均有效等位基因數(shù)量、平均觀測(cè)雜合度、平均期望雜合度、平均多態(tài)信息含量和平均香農(nóng)信息指數(shù)均低于保護(hù)區(qū)核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群，表明保護(hù)區(qū)野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性相對(duì)缺乏。這一結(jié)果可能與在野放過(guò)程中未對(duì)核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群、野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群以及挑選的野放個(gè)體的遺傳多樣性進(jìn)行系統(tǒng)性分析有關(guān)。

本研究利用13個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群進(jìn)行遺傳多樣性分析，并比較保護(hù)區(qū)核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性差異，了解了浙江長(zhǎng)興尹家邊揚(yáng)子鱷保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群在生存和繁衍過(guò)程中可能存在低頻等位基因丟失的情況。本研究?jī)H檢測(cè)到2個(gè)稀有等位基因，因此在后續(xù)的揚(yáng)子鱷種群保護(hù)繁殖過(guò)程中，保護(hù)區(qū)應(yīng)注重對(duì)低頻等位基因及稀有等位基因的監(jiān)測(cè)和保護(hù)。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，雖然2012—2019年保護(hù)區(qū)核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群中已有960條揚(yáng)子鱷被放歸至野放區(qū)，但保護(hù)區(qū)野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性與核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群仍存在一定差異[36-37]，野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的平均有效等位基因數(shù)量、平均觀測(cè)雜合度、平均期望雜合度、平均多態(tài)信息含量和平均香農(nóng)信息指數(shù)均低于核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群，因此在后續(xù)的揚(yáng)子鱷野外放歸過(guò)程中，保護(hù)區(qū)應(yīng)注重分析核心區(qū)和野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性，保證保護(hù)區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性不會(huì)在野放過(guò)程中降低，從核心區(qū)揚(yáng)子鱷種群中挑選出合適的野放個(gè)體進(jìn)行野外放歸，從而豐富野放區(qū)揚(yáng)子鱷種群的遺傳多樣性。