山香圓葉提取物對(duì)文昌雞生長(zhǎng)性能、血清免疫和抗氧化功能以及腸道微生物的影響

宋文靜 宋瓊莉 鄒志恒 陳小連 劉林秀 譚 佳 魏立民 熊平文 陶秀花 孫瑞萍 張 艷

(1.海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，?？?571100；2.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，南昌 330200；3.海南省熱帶動(dòng)物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海口 570203；4.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，南昌 330200)

為維護(hù)動(dòng)物源性食品安全和公共衛(wèi)生安全，遏制動(dòng)物源細(xì)菌耐藥等問題，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布了第194號(hào)公告，實(shí)施促生長(zhǎng)類藥物飼料添加劑(中藥類除外)退出市場(chǎng)。隨著禁抗時(shí)代的到來，養(yǎng)殖業(yè)面臨著畜禽生產(chǎn)性能下降、死淘率升高、經(jīng)濟(jì)效益顯著下滑等問題，抗生素替代產(chǎn)品研發(fā)是實(shí)現(xiàn)畜禽無抗養(yǎng)殖的重要突破口之一[1]。山香圓為省沽油科植物，廣泛分布在中國(guó)南部地區(qū)，其葉味苦、性寒，為我國(guó)傳統(tǒng)中草藥。山香圓葉的主要有效成分為三萜類化合物、大柱烷類化合物、黃酮類化合物、酚酸類化合物[2]以及多糖類化合物[3]，這些成分使得三香圓葉具有清熱解毒、利咽消腫、抗菌消炎、活血止痛、增強(qiáng)免疫的功效，臨床上多用于膿腫、發(fā)熱、潰瘍、炎癥等的治療[4-5]。山香圓含片能顯著降低小鼠感染金黃色葡萄球菌后的死亡率[6]，對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠疼痛和熱板所致小鼠疼痛均具有非常顯著的鎮(zhèn)痛作用[7]。山香圓葉總黃酮對(duì)環(huán)磷酰胺致免疫低下小鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能、遲發(fā)性超敏反應(yīng)、血清溶血素生成素生成均有增強(qiáng)作用；山香圓葉總黃酮可以調(diào)節(jié)小鼠的免疫功能[8-10]。山香圓葉提取物(Turpiniaefoliumextract，TFE)對(duì)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎具有抗炎作用[11]。目前，鮮有山香圓葉及TFE在家禽上的應(yīng)用研究報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同水平的TFE對(duì)文昌雞生長(zhǎng)性能、血清免疫和抗氧化功能以及腸道微生物的影響，為進(jìn)一步發(fā)揮山香圓葉的利用價(jià)值，改善食品安全和質(zhì)量，促進(jìn)畜禽養(yǎng)殖業(yè)的綠色健康可持續(xù)發(fā)展提供理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與材料

雌性文昌雞由海南省熱帶動(dòng)物繁育與疫病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。TFE含總黃酮119.75 mg/g，總多糖10.15 g/100 g，多酚100.90 mg/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取同一飼養(yǎng)條件下的42日齡健康狀況良好、體重接近的雌性文昌雞432只，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)18只雞。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0.015%、0.030%、0.060% TFE的試驗(yàn)飼糧，試驗(yàn)期為42 d。試驗(yàn)期間文昌雞自由采食，充足飲水。每天觀察文昌雞的采食、糞便和健康狀況，免疫接種參照《文昌雞飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》(DB46/T 44—2011)的規(guī)定執(zhí)行[12]?；A(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

整個(gè)試驗(yàn)在江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)雞場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)雞在入舍前對(duì)整個(gè)雞舍進(jìn)行徹底清掃消毒，期間采用網(wǎng)上分欄籠養(yǎng)，每籠6只(單籠尺寸：75 cm×70 cm×40 cm)，自由采食和飲水，舍內(nèi)溫度在23～26 ℃，相對(duì)濕度在65%～75%，光照24 h/d(5 lx)，做好試驗(yàn)雞死亡記錄。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

飼養(yǎng)期間以重復(fù)為單位記錄試驗(yàn)雞的喂料量、剩余料量、初始體重和終末體重，以此計(jì)算試驗(yàn)雞的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

1.4.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定

在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)重復(fù)選擇健康且體重相近的試驗(yàn)雞2只，翅靜脈采血分離血清(3 000 r/min離心15 min)，-20 ℃保存待測(cè)。

采用比色法在邁瑞B(yǎng)S-420全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)上測(cè)定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)含量(試驗(yàn)盒購(gòu)自中生北控股份有限公司)。

采用比色法在邁瑞B(yǎng)S-420全自動(dòng)生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)上檢測(cè)血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)含量；在華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)上測(cè)定血清丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽過氧化物(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及總抗氧化能力(T-AOC)(試劑盒購(gòu)于北京華英生物技術(shù)研究所)。

采用酶聯(lián)免疫法在華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)上測(cè)定血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)含量(試劑盒購(gòu)于北京華英生物技術(shù)研究所)。

1.4.3 空腸形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和測(cè)定

對(duì)家禽實(shí)施安樂死(頸脫位法)，用無菌解剖剪剪開腹部，取出胃腸道器官，用吸水紙擦干表面血污，采集空腸約3 cm左右，用0.9%的無菌生理鹽水清洗后固定于10%中性甲醛溶液中，制作石蠟切片，蘇木精-伊紅(HE)染色以檢測(cè)腸道形態(tài)，測(cè)量空腸的絨毛高度(VH)和隱窩深度(CD)，計(jì)算絨毛高度與隱窩深度的比值(VH/CD)。

1.4.4 腸道微生物測(cè)定

迅速用滅菌細(xì)線將盲腸結(jié)扎，確保腸道內(nèi)容物充足，剪下結(jié)扎的盲腸段，立即將內(nèi)容物轉(zhuǎn)入2 mL滅菌凍存管中，置于-80 ℃冰箱保存，待測(cè)。采用DNA提取試劑盒提取盲腸內(nèi)容物中DNA，利用1.0%瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA條帶，并檢測(cè)提取DNA的純度和質(zhì)量，采用特異性引物(338F/806R)擴(kuò)增16S rDNA的V3～V4區(qū)。338F:5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′;806R:5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝聚電泳檢測(cè)后,回收目的片段并純化。構(gòu)建MiSeq文庫(kù),并進(jìn)行Illumina測(cè)序。建庫(kù)和測(cè)序工作由北京諾禾致源生物信息科技有限公司完成。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用Excel 2007進(jìn)行初步整理后，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間數(shù)據(jù)使用單因子方差分析(one-way ANOVA)，組間差異顯著再進(jìn)行Duncan氏多重比較檢驗(yàn)。以P<0.05作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果以平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 TFE對(duì)文昌雞生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，試驗(yàn)開始時(shí)各組間初始體重?zé)o顯著差異(P>0.05)。經(jīng)過42 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)，隨著TFE添加水平的增加，終末體重呈顯著線性升高(P<0.05)。TFE對(duì)ADFI無顯著影響(P>0.05)，但0.015%、0.030%和0.060%組的ADFI與對(duì)照組相比分別提高了0.88%、2.40%和2.20%。與對(duì)照組相比，添加0.030%和0.060%的TFE顯著提高了ADG(P<0.05)。隨著TFE添加水平的增加，F(xiàn)/G呈顯著線性和二次曲線變化(P<0.05)。

2.2 TFE對(duì)文昌雞血清代謝指標(biāo)的影響

由表3可知，隨著TFE添加水平的增加，血清TP和GLB含量呈顯著線性和二次曲線變化(P<0.05)。與對(duì)照組相比，飼糧中添加TFE對(duì)血清ALB、TC、TG和GLU含量無顯著影響(P>0.05)。

2.3 TFE對(duì)文昌雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，添加0.030%和0.060% TFE顯著提高了血清IgA和IgG含量(P<0.05)。隨著TFE添加水平的增加，血清IgM含量呈顯著線性增加(P<0.05)。

表2 TFE對(duì)文昌雞生長(zhǎng)性能的影響

表3 TFE對(duì)文昌雞血清代謝指標(biāo)的影響

表4 TFE對(duì)文昌雞血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 TFE對(duì)文昌雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對(duì)照組和0.015%組相比，添加0.060% TFE顯著提高了血清T-AOC和SOD活性(P<0.05)。與對(duì)照組相比，不同添加水平的TFE均顯著提高了血清GSH-Px活性(P<0.05)。飼喂0.030%和0.060% TFE的文昌雞血清MDA含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

2.5 TFE對(duì)文昌雞血清炎癥因子含量的影響

由表6可知，隨著TFE添加水平的增加，血清IL-10、IL-1β、IL-6和TNF-α含量呈顯著線性和二次曲線變化(P<0.05)。與對(duì)照組相比，添加0.060% TFE顯著提高了血清IL-10含量(P<0.05)。與對(duì)照組相比，不同添加水平TFE均顯著降低了血清IL-1β含量(P<0.05)。0.030%和0.060%組血清IL-6和TNF-α含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表5 TFE對(duì)文昌雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

表6 TFE對(duì)文昌雞血清炎癥因子含量的影響

2.6 TFE對(duì)文昌雞腸道組織形態(tài)的影響

由表7可知，與對(duì)照組相比，TFE對(duì)文昌雞空腸VH、CD和VH/CD均無顯著影響(P>0.05)，但隨著TFE添加水平的增加，空腸VH和VH/CD呈顯著線性和二次曲線變化(P<0.05)。

表7 TFE對(duì)文昌雞空腸組織形態(tài)的影響

2.7 TFE對(duì)文昌雞盲腸菌群的影響

2.7.1 TFE對(duì)文昌雞盲腸菌群在門水平上相對(duì)豐度的影響

由表8可知，盲腸內(nèi)容物菌群中門水平共檢測(cè)出19個(gè)門，表中列出的為相對(duì)豐度較高的12個(gè)菌門。盲腸內(nèi)容物主要菌門是擬桿菌門和厚壁桿菌門，占90%左右。隨著TFE添加水平的增加，擬桿菌門相對(duì)豐度呈顯著線性增加(P<0.05)。與對(duì)照組相比，0.060%組變形菌門相對(duì)豐度顯著下降(P<0.05)，各組盲腸中其他菌門相對(duì)豐度無顯著差異(P>0.05)。

表8 TFE對(duì)文昌雞盲腸菌群在門水平上相對(duì)豐度的影響

2.7.2 TFE對(duì)文昌雞盲腸菌群在屬水平上相對(duì)豐度的影響

由表9可知，盲腸內(nèi)容物菌群中主要菌屬為擬桿菌屬和理研菌屬RC9腸道群，占盲腸內(nèi)容物屬水平相對(duì)豐度的50%～60%，表中列出的為相對(duì)豐度較高的10個(gè)菌屬。與對(duì)照組相比，0.060%組盲腸內(nèi)容物中糞腸桿菌的相對(duì)豐度顯著提高(P<0.05)，0.060%組的乳酸菌屬相對(duì)豐度顯著高于其他各組(P<0.05)，各組盲腸中其他菌屬相對(duì)豐度無顯著差異(P>0.05)。

表9 TFE對(duì)文昌雞盲腸菌群在屬水平上相對(duì)豐度的影響

續(xù)表9項(xiàng)目ItemsTFE添加水平 Supplementation level of TFE/%0 (對(duì)照 Control)0.0150.0300.060SEMP值 P-value方差分析ANOVA線性Linear二次Quadratic瘤胃球菌科_UCG-014 Ruminococcaceae_UCG-0141.272.841.311.830.3150.2750.9620.906脫硫弧菌屬 Desulfovibrio1.881.821.041.800.1420.1080.6900.174巨單胞菌屬 Megamonas1.380.593.470.390.7190.4480.8030.598乳酸菌屬 Lactobacillus0.67b0.84b0.91b1.73a0.1540.0490.0060.018

2.8 TFE最適添加水平

以TFE的添加水平為自變量X(0≤X≤0.60)，以二元有顯著的指標(biāo)為因變量Y，進(jìn)行二次回歸分析，結(jié)果如表10所示。TFE添加水平為0.054%、0.060%和0.045%時(shí)，F(xiàn)/G、血清MDA含量、盲腸變形菌門相對(duì)豐度最低。ADG，血清TP、GLB、IgA、IgG、IgM含量，血清T-AOC，血清SOD、GSH-Px活性，血清IL-10、IL-1β、IL-6、TNF-α含量，腸道VH、VH/CD，盲腸糞腸桿菌屬和乳酸桿菌屬相對(duì)豐度分別在TFE添加水平為0.051%、0.060%、0.060%、0.049%、0.060%、0.060%、0.060%、0.048%、0.045%、0.060%、0.059%、0.052%、0.049%、0.060%、0.060%、0.060%和0.060%時(shí)處于最大值。選取上述指標(biāo)最大值時(shí)添加水平的平均值作為最適添加水平，即最適添加水平為0.056%。

表10 基于回歸模型參數(shù)的TFE最適添加水平

3 討 論

3.1 TFE對(duì)文昌雞生長(zhǎng)性能的影響

提高肉雞生長(zhǎng)性能對(duì)于養(yǎng)殖企業(yè)控制生產(chǎn)成本具有重要的意義，在本試驗(yàn)條件下，TFE能夠提高文昌雞的ADG，一定程度降低F/G，并且其效果與添加水平呈線性或二次曲線關(guān)系。TFE具有一定芳香氣味，在飼糧中添加TFE對(duì)文昌雞的ADFI有一定的提高效果，但不顯著，說明TFE的誘食效果不是提高文昌雞生長(zhǎng)性能的主要因素，ADG的提高和生長(zhǎng)性能的改善可能是同樣飼糧攝入量條件下營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(蛋白質(zhì)、脂肪等)吸收、沉積增加的原因。植物提取物中的活性成分進(jìn)入胃腸道后可以保護(hù)腸上皮抵御內(nèi)毒素的危害，維持腸道屏障功能，并通過調(diào)節(jié)消化酶活性促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收[13]。TFE可以改善文昌雞腸道形態(tài)，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)，進(jìn)而提高機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率。此外，TFE中的小分子活性成分如黃酮[14]、多酚[15]、多糖[16]等對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用。TFE對(duì)文昌雞的促生長(zhǎng)作用與其添加水平呈線性和二次相關(guān)，這可能與其添加水平不同時(shí)活性成分如黃酮等含量不同有關(guān)，黃酮類化合物攝入含量不同時(shí)，其在機(jī)體內(nèi)的代謝途徑和作用方式存在差異[17-18]。

3.2 TFE對(duì)文昌雞血清代謝指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)可以反映動(dòng)物機(jī)體的健康狀況。血清TP、ALB、GLB含量可以反映機(jī)體蛋白質(zhì)的吸收和代謝狀況，TP、ALB、GLB含量升高，說明機(jī)體合成蛋白質(zhì)能力較高，免疫功能良好。在本試驗(yàn)條件下，血清TP和GLB含量隨著TFE添加水平的增加呈顯著線性和二次曲線上升，表明TFE可以在一定程度上提高文昌雞機(jī)體蛋白質(zhì)的合成能力，保持機(jī)體代謝水平和免疫功能處于良好的狀態(tài)。血清中的TG、TC含量是反映機(jī)體脂質(zhì)代謝水平的指標(biāo)。TG可被水解為脂肪酸，為組織提供能量。GLU是反映機(jī)體糖代謝水平的指標(biāo)。在本研究中，飼糧中添加TFE對(duì)文昌雞血清TC、TG、GLU含量無顯著影響，提示TFE不影響文昌雞脂質(zhì)和糖代謝。

3.3 TFE對(duì)文昌雞血清免疫功能的影響

免疫球蛋白IgA、IgG、IgM是由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的特異性蛋白，其能夠活化補(bǔ)體，清除病原體，是反映機(jī)體體液免疫水平的重要指標(biāo)[19-20]。當(dāng)機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)時(shí)，免疫相關(guān)基因表達(dá)會(huì)下調(diào)，血液免疫球蛋白含量會(huì)下降，從而提高機(jī)體對(duì)疾病的易感性，降低動(dòng)物生張性能。多種植物提取物被證實(shí)有提高機(jī)體免疫功能的作用，艾蒿水提物分刺激體外培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞，結(jié)果顯著增加了淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中IgM含量[21]。含黃酮19%的飛機(jī)草提取物可顯著提高肉雞血清中IgM和IgG含量[22]?？傸S酮含量20.51%的桑葉提取物可顯著增加斷奶仔豬血漿中IgA和IgM含量[23]。純度97%的桑黃多糖提取物可顯著增加蛋雞血清中IgA、IgM和IgG含量[24]。本研究表明，TFE提高了文昌雞血清IgA、IgG含量，可見TFE對(duì)文昌雞的體液免疫具有促進(jìn)作用，發(fā)揮作用的主要有效成分可能是其中的黃酮、多糖等。本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果存在一定出入，這可能是由于飼養(yǎng)時(shí)間、動(dòng)物品種、添加水平等原因，此外，植物黃酮化合物因來源的植物不同而不同，功能也可能不盡相同。

細(xì)胞因子作為評(píng)估機(jī)體細(xì)胞免疫能力的另一重要指標(biāo)，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。炎癥反應(yīng)在機(jī)體抵御外界感染和損傷中起調(diào)節(jié)作用，是機(jī)體重要的自我防御和修復(fù)機(jī)制，適度的炎癥反應(yīng)能夠加快清除致炎物質(zhì)，并且完成對(duì)受損組織的修復(fù)和再生，而過度的炎癥反應(yīng)不僅對(duì)正常組織和細(xì)胞的生理功能造成負(fù)面影響，并且可能產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成更大的損傷[25]。人為構(gòu)建的應(yīng)激、感染或炎癥模型下，肉雞的外周血單核細(xì)胞吞噬能力改變，其適應(yīng)性T細(xì)胞反應(yīng)發(fā)生變化，導(dǎo)致促炎因子如白細(xì)胞介素-17A(IL-17A)、TNF-α、IL-6、IL-1β等分泌，同時(shí)使抗炎因子白細(xì)胞介素-4(IL-4)、IL-10和干擾素-γ的分泌受阻[26-27]。實(shí)際集約化生產(chǎn)過程中，由于飼養(yǎng)密度較大，受環(huán)境中灰塵和病原體的影響，在無抗生素添加情況下，肉雞極易發(fā)生呼吸道、消化道等炎癥反應(yīng)。多種植物提取物被研究證實(shí)能夠通過抑制核因子-κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)等信號(hào)通路，減少TNF-α和IL-1β等炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，提高抗炎因子IL-10等的分泌達(dá)到抗炎效果[28]。本試驗(yàn)條件下，TFE顯著提高了血清IL-10含量，降低了血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量。這說明TFE可以通過降低文昌雞促炎性因子分泌，提高抗炎性因子含量，來減少機(jī)體炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，改善機(jī)體組織損傷。

3.4 TFE對(duì)文昌雞血清抗氧化功能的影響

機(jī)體細(xì)胞呼吸過程中會(huì)產(chǎn)生活性氧，正常情況下機(jī)體活性氧產(chǎn)生和清除處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，但是當(dāng)活性氧累積量超過機(jī)體對(duì)其清除能力時(shí)，活性氧的高活性和細(xì)胞毒性作用會(huì)導(dǎo)致機(jī)體損傷[29]。SOD和GSH-Px是體內(nèi)重要的抗氧化酶，構(gòu)成了機(jī)體酶促抗氧化體系是反映機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)，T-AOC是反映機(jī)體抗氧化能力的綜合指標(biāo)，MDA是細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，可以衡量機(jī)體內(nèi)氧化損傷程度，抗氧化劑系統(tǒng)可以防止脂質(zhì)和蛋白質(zhì)氧化引起的損傷，并保護(hù)機(jī)體免受細(xì)菌感染。多種植物提取物及其活性成分能夠緩解應(yīng)激狀態(tài)下動(dòng)物氧化損傷，提高非應(yīng)激狀態(tài)下動(dòng)物機(jī)體抗氧化酶活性，其抗氧化作用明顯受添加水平和處理時(shí)間的影響，車前子黃酮可顯著提高氧化應(yīng)激白羽蛋雞血清中T-AOC，SOD、GSH-Px和過氧化氫酶(CAT)活性，并能降低血清中MDA含量[30]。小花棘豆黃酮能顯著提高肉仔雞肌肉組織和血清中SOD、GSH-Px、CAT和谷胱甘肽還原酶活性[31]。植物提取的抗氧化機(jī)制主要是通過直接清除或抑制自由基、提供質(zhì)子和電子、中斷氧化過程中的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、抑制氧化酶活性、增強(qiáng)抗氧化酶活性、螯合起催化作用的金屬離子、抗氧化成分之間互補(bǔ)和協(xié)同作用保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷[32-33]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，TFE可以顯著提高血清SOD、GSH-Px活性和T-AOC，可清除自由基，減少自由基和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞膜的損壞，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。

3.5 TFE對(duì)文昌雞腸道組織形態(tài)的影響

腸道黏膜是阻止病原體和食源性抗體入侵機(jī)體的第1道屏障，其良好的形態(tài)結(jié)構(gòu)是保障營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收和抵御疾病風(fēng)險(xiǎn)的前提條件。小腸的組織形態(tài)一般通過對(duì)其絨毛和隱窩的組織學(xué)測(cè)定來進(jìn)行評(píng)定，VH越高，其接觸面積越大，對(duì)食糜中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收也越充分，CD越小表明腸上皮細(xì)胞越成熟，分泌功能越強(qiáng)，腸道的消化吸收能力越強(qiáng)[34]。劉靖[35]報(bào)道，博落回生物堿能夠促進(jìn)黃雞小腸絨毛結(jié)構(gòu)的發(fā)育，改善小腸的吸收功能，從而提高黃雞的生長(zhǎng)效率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，TFE可以在一定程度上提高文昌雞空腸VH和VH/CD，表明TFE可以改善文昌雞腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高腸道的消化吸收功能，該效果與其添加水平呈劑量依賴效應(yīng)。

3.6 TFE對(duì)文昌雞腸道微生物的影響

植物提取物的抗菌作用主要是通過破壞細(xì)菌細(xì)胞生物膜結(jié)構(gòu)導(dǎo)致內(nèi)容物釋放，抑制細(xì)胞內(nèi)酶活性，抑制DNA、RNA復(fù)制實(shí)現(xiàn)的[36]。研究發(fā)現(xiàn)，植物提取物對(duì)多種革蘭氏陽性菌如金黃色葡萄球菌、腸球菌、單增李斯特、蠟狀芽孢桿菌、鏈球菌和革蘭氏陰性菌如大腸桿菌、彎曲菌、綠膿桿菌、志賀氏菌、沙門氏菌和真菌黑曲霉、青霉、可可毛色二孢菌、尖孢鐮刀菌白色念珠菌、鐮刀菌等多種微生物具有抗菌活性，其抗菌效果取決于其濃度和作用時(shí)間[37-40]。植物提取物除了具有廣譜抗菌活性，也能促進(jìn)腸道有益微生物的生長(zhǎng)[41]。連翹提取物可顯著降低仔斷奶豬腸道中大腸桿菌數(shù)量，提高乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量[42]。通過代謝組學(xué)分析也表明了葡萄籽提取物對(duì)植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei)和保加利亞乳桿菌(Lactobacillusbulgaricus)增殖作用率較強(qiáng)[43]。植物提取物通過抑制有害菌的增殖，提高有益菌的豐度，維持腸道菌群平衡，提高腸道功能和減輕腸道疾病。本試驗(yàn)條件下，TFE可顯著降低盲腸微生物中變形菌門相對(duì)豐度，顯著提高糞腸桿菌屬和乳酸菌屬的相對(duì)豐度，其效果與添加水平呈線性或二次曲線關(guān)系。變形菌門包含多種病原菌如大腸桿菌、沙門氏菌等，其分泌物組胺[44]能夠引起過敏或中毒反應(yīng)[45]，與胃腸道疾病存在著密切關(guān)系[46]。糞腸桿菌屬的分泌物水楊酸可以起到抗炎效果[47]，同時(shí)還可以產(chǎn)生丁酸調(diào)節(jié)T輔助細(xì)胞17(Th17)/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的分化，抑制組蛋白去乙?；?的活性[48]，從而緩解腸道炎癥，保持機(jī)體腸道健康。乳酸菌屬菌類可以降低腸道pH，對(duì)于抑制有害菌群繁殖有一定作用，乳酸菌屬菌類分泌的胞外多糖能夠誘導(dǎo)結(jié)腸的抗癌活性，同時(shí)提高抗氧化酶活性，減少腸道脂質(zhì)過氧化損傷[49]，腸道乳酸菌的增加有提高家禽(雞、鴨)體重的效果，從而提高其生長(zhǎng)性能[50]。從本試驗(yàn)結(jié)果可見，適宜添加水平的TFE可以抑制文昌雞腸道有害微生物繁殖，提高腸道有益微生物的豐度，從而改善文昌雞腸道微生態(tài)環(huán)境，提高文昌雞生長(zhǎng)性能。

4 結(jié) 論

飼糧中添加TFE能夠增加文昌雞ADG，提高血清免疫和抗氧化功能，改善空腸絨毛組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)盲腸微生態(tài)平衡，添加效果與添加水平呈劑量效應(yīng)，經(jīng)回歸分析，推薦42～84日齡文昌雞TFE最適添加水平為0.056%。