柑橘黃酮的活性功能機(jī)制及柑橘提取物在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用的研究進(jìn)展

余詩強(qiáng) 趙玉超 熊本海 蔣林樹*

(1. 北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，奶牛營養(yǎng)學(xué)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193)

柑橘屬于蕓香科柑橘屬植物，全世界每年的柑橘產(chǎn)量可達(dá)1 000多萬t，是世界上第一大類水果，其中50%～60%作為新鮮水果被人們食用，其余的被用作工業(yè)生產(chǎn)[1-2]，其產(chǎn)生的副產(chǎn)品富含黃酮、檸檬烯和精油等多種活性成分，其中含有的橙皮苷、柚子苷及橘皮素等黃酮類化合物是動(dòng)物飲食中黃酮類化合物的主要來源[3-4]。中國的柑橘產(chǎn)業(yè)在世界上占有重要地位，為世界的水果供應(yīng)做出了巨大貢獻(xiàn)，但是在生產(chǎn)加工過程中產(chǎn)生的大量皮渣引出了一系列資源浪費(fèi)與環(huán)境污染問題，這些柑橘加工后剩余的副產(chǎn)品含有豐富的黃酮類物質(zhì)，合理的提取利用這些剩余副產(chǎn)品具有重要的生態(tài)及社會(huì)意義。

柑橘黃酮及其提取物具有顯著的抗菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等多種生物活性作用[5-6]。2021年7月27日，歐盟食品安全局發(fā)表聲明：富含黃酮類化合物的柑橘提取物可以作為一種飼料添加劑在動(dòng)物生產(chǎn)中使用，其在飼糧中的功能與在食物中的功能基本相同。相關(guān)試驗(yàn)也表明，在動(dòng)物飼糧中添加柑橘黃酮可以提高動(dòng)物抗炎、抗氧化能力及免疫力，改善動(dòng)物的生產(chǎn)性能[7]。隨著人們對非常規(guī)飼料資源的開發(fā)與應(yīng)用，柑橘皮渣以其來源廣泛、成本低廉、營養(yǎng)成分與活性物質(zhì)豐富的優(yōu)點(diǎn)開始被廣泛關(guān)注，并在畜牧養(yǎng)殖中開始應(yīng)用，但是有關(guān)柑橘黃酮提取方法與發(fā)揮活性作用機(jī)制的研究較少。因此，本文綜述了柑橘黃酮的提取方法、活性作用機(jī)制及柑橘提取物在動(dòng)物生產(chǎn)上的應(yīng)用，以期為柑橘黃酮及柑橘提取物在畜牧養(yǎng)殖上的進(jìn)一步應(yīng)用與推廣提供理論依據(jù)和生產(chǎn)指導(dǎo)。

1 柑橘黃酮的主要活性成分與提取方法

柑橘黃酮主要富集在柑橘屬果實(shí)的外皮中，柑橘果肉與外皮包含170多種植物化學(xué)成分，其中已鑒定出的黃酮類化合物有80種，主要分為黃烷酮類和多甲氧基黃酮類2類，黃烷酮類含量最高，約占黃酮類化合物的80%，其主要成分為橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷和云香柚皮苷等；多甲氧基黃酮類次之，主要成分為橘皮素、甜橙黃酮及川陳皮素等，橘皮素等多甲氧基黃酮是柑橘屬中特有的物質(zhì)，黃烷酮類和多甲氧基黃酮類這兩大類物質(zhì)均具有一定的抗炎、抗氧化活性[8-9]。有效的分離和純化是得到柑橘黃酮的基礎(chǔ)和前提，不同的提取工藝對柑橘黃酮的成分具有一定的影響，目前對柑橘黃酮進(jìn)行提取的方法主要有有機(jī)溶劑浸提法、超聲波輔助提取法、酶提法、亞臨界水萃取法、閃式提取法和高效液相色譜法等[8,10]，其主要提取方法與優(yōu)缺點(diǎn)見表1。

表1 柑橘黃酮的提取方法比較

2 柑橘黃酮的活性功能及其機(jī)制

2.1 抗菌

黃酮類活性物質(zhì)結(jié)構(gòu)中的羥基可以與細(xì)菌β-葡萄糖醛酸苷酶中的活性位點(diǎn)結(jié)合，抑制細(xì)菌內(nèi)皮細(xì)胞生長因子產(chǎn)生，影響細(xì)胞膜通透性，抑制細(xì)菌生物膜的形成，影響細(xì)菌內(nèi)細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)，降低核苷酸和細(xì)菌體內(nèi)能量合成速率，發(fā)揮抗菌活性[19-20]。研究發(fā)現(xiàn)，不同種屬的柑橘黃酮可以通過抑制細(xì)胞代謝活性及細(xì)菌形成生物膜的方式阻礙細(xì)菌生長，并顯著抑制大腸桿菌(Escherichiacoli)、單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和胡蘿卜軟腐果膠桿菌(Pectobacteriumcarotovorum)的生長[21]。同樣，柑橘不同部位的黃酮提取物均有顯著的抑菌效果，相比之下，果皮提取物比果肉提取物的抑菌效果更為顯著，柑橘黃酮中富含的多甲氧基黃酮能直接破壞細(xì)菌細(xì)胞壁，使細(xì)胞的Na+和K+從細(xì)胞內(nèi)壁流向細(xì)胞外壁，抑制革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生長[22]。Ulhaq等[23]也證明0.625%的柑橘黃酮對革蘭氏陰性菌鼠傷寒沙門氏菌具有顯著的抑制作用。此外，1%～4%的柑橘皮水提酸解物(酸水解目的是為了讓類黃酮苷釋放游離糖，可提高柑橘皮提取物中黃酮的活性)可降低4 ℃貯藏牛奶中的單核細(xì)胞增生李斯特菌的增值，并且對蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)和金黃色葡萄球菌等有害菌的生長表現(xiàn)出抑制作用[24]。

2.2 抗炎

柑橘黃酮獨(dú)特的結(jié)構(gòu)是其發(fā)揮抗炎活性的關(guān)鍵，在柑橘黃酮中B環(huán)3位和4位的羥基取代基黃酮是一種脂氧合酶抑制劑，含有5個(gè)及更多的甲氧基取代基黃酮，具有顯著的磷酸二酯酶抑制活性[25]。柑橘黃酮可以通過抑制蛋白激酶、類花生酸合成酶、磷酸二酯酶和前列腺素合成等多種途徑與方式發(fā)揮抗炎活性[26]。柑橘黃酮中富含的柚皮苷、橙皮苷和柚皮素等物質(zhì)可以抑制嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生超氧自由基，激活胱天蛋白酶-3(Caspase-3，凋亡執(zhí)行的標(biāo)志物)，逆轉(zhuǎn)活性氧通過降低Caspase-3抑制細(xì)胞凋亡的過程，發(fā)揮抗炎作用[27]。柑橘黃酮也能通過降低環(huán)氧合酶-2(COX-2)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的表達(dá)，抑制腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)的核因子-κB(NF-κB)途徑，減少炎性細(xì)胞浸潤，抑制促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生[28]。從柑橘中分離出的橙皮素、橙皮苷等物質(zhì)在抗炎過程中發(fā)揮顯著作用，橙皮素通過促進(jìn)Toll樣受體4(TLR4)介導(dǎo)的游離鈣結(jié)合轉(zhuǎn)接器分子1/膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Iba-1/GFAP)的表達(dá)，顯著降低炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，減少脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的活性氧/脂質(zhì)過氧化物(ROS/LPO)的產(chǎn)生，提高腦中核轉(zhuǎn)錄因子紅系2相關(guān)因子2(Nrf2)和血紅素加氧酶-1(HO-1)等抗氧化蛋白的水平，降低磷酸化c-Jun N末端激酶(p-JNK)、B細(xì)胞淋巴瘤2(Bcl-2)相關(guān)X蛋白(Bax)和Caspase-3蛋白的表達(dá)，并提高Bcl-2蛋白水平，以此來改善LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性和ROS/LPO[29]；橙皮苷也能以劑量依賴的方式抑制促炎細(xì)胞因子[TNF-α、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)]、炎性酶(COX-2和iNOS)和Caspase-3的表達(dá)，顯著下調(diào)NF-κB的表達(dá)來減少炎癥，同時(shí)其可以通過抑制NF-κB抑制蛋白(IκB)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)的磷酸化來調(diào)節(jié)絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)[主要的2種轉(zhuǎn)錄因子：激活蛋白-1(AP-1)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)]和NF-κB信號(hào)通路，達(dá)到抗炎的目的[30]。大量研究證明柑橘中的黃酮類化合物具有顯著的抗炎作用，但其作用的分子機(jī)制研究主要集中在體外試驗(yàn)，并且其在不同動(dòng)物中的使用劑量也尚未明確。

2.3 抗氧化

柑橘黃酮具有顯著清除自由基的能力，能抑制脂質(zhì)氧化，提高機(jī)體抗氧化酶活性，減少體內(nèi)過氧化物的形成，其還可以提高過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、對氧磷酶(PON)等抗氧化酶的活性，顯著增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力[31]。此外，柑橘黃酮能通過螯合變價(jià)金屬離子的方式發(fā)揮抗氧化活性，其含有的橙皮苷可與Cu(Ⅱ)按2∶1形成螯合物，抑制氫過氧化物分解，進(jìn)而發(fā)揮抗氧化作用[32]。對柑橘黃酮中的單體比較發(fā)現(xiàn)，其黃酮物質(zhì)中B環(huán)3’,4’端連接羥基形成鄰羥基可以顯著增強(qiáng)抗氧化能力，B環(huán)中4’端甲基化后抗氧化能力減弱，這是由于甲氧基結(jié)構(gòu)穩(wěn)定無法在體外清除自由基的性質(zhì)所導(dǎo)致的[33]。不同品種的柑橘提取出的柑橘黃酮其抗氧化能力存在顯著的差異，Huang等[34]對不同品種的柑橘黃酮的抗氧化能力進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，8個(gè)不同品種柑橘黃酮的抗氧化能力表現(xiàn)為椪柑>橘子>檸檬>葡萄柚>柑橘>金桔>柚子>甜橙，且這些柑橘提取出的黃酮可以通過氫鍵和范德華力與脂肪酶相互作用發(fā)揮生物活性。此外，楊雪妍[35]對柑橘黃酮中含量較高的4種黃酮(橙皮素、柚皮素、橘皮素、川陳皮素)的抗氧化能力進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，4種黃酮的抗氧化能力指數(shù)(ORAC)高低依次為川陳皮素>橙皮素>柚皮素>橘皮素，且川陳皮素清除自由基的能力最強(qiáng)，橘皮素則最弱，4種黃酮的濃度在200 μmol/L內(nèi)對細(xì)胞沒有毒性，但4種黃酮共同使用時(shí)具體是發(fā)揮拮抗還是協(xié)同作用尚未見報(bào)道。綜上可知，柑橘黃酮具有顯著的抗氧化活性，可以維持動(dòng)物體內(nèi)的自由基穩(wěn)態(tài)，促進(jìn)動(dòng)物氧化應(yīng)激-炎癥反應(yīng)-免疫三方聯(lián)動(dòng)效應(yīng)的穩(wěn)定[36]。

2.4 調(diào)節(jié)免疫

黃酮類活性物質(zhì)可以通過上調(diào)免疫與下調(diào)免疫進(jìn)行免疫雙向調(diào)節(jié)，其通過調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞以及改善白細(xì)胞介素和腫瘤壞死因子的分泌達(dá)到調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的目的[37]。動(dòng)物健康營養(yǎng)理論也指出動(dòng)物免疫狀態(tài)與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)是密不可分的，即氧化應(yīng)激-炎癥-免疫失衡三方聯(lián)動(dòng)效應(yīng)理論，其指出，在動(dòng)物養(yǎng)殖過程中可以通過營養(yǎng)干預(yù)的方式降低炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激(維持自由基穩(wěn)態(tài))，維持免疫穩(wěn)態(tài)，促進(jìn)機(jī)體健康，預(yù)防發(fā)生亞健康和疾病[36]。研究表明，柑橘黃酮是一種效果顯著的營養(yǎng)干預(yù)物質(zhì)，它能顯著提高動(dòng)物體內(nèi)的免疫球蛋白E(IgE)和免疫球蛋白G(IgG)水平，增強(qiáng)來源于骨髓的樹突狀細(xì)胞呈遞抗原的能力，提高抗原特異性細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)[38]。同時(shí)，柑橘黃酮中的柚皮素能以劑量依賴性的方式抑制抗CD3/CD28和MOG35-55誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖，產(chǎn)生T細(xì)胞因子，干擾活化T細(xì)胞中白細(xì)胞介素-2(IL-2)/白細(xì)胞介素-2受體(IL-2R)介導(dǎo)的信號(hào)通路和信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白5(STAT5)磷酸化途徑[39]，并通過影響非受體型酪氨酸蛋白激酶2-信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3(JAK2/STAT3)信號(hào)通路，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化，改善動(dòng)物的免疫狀態(tài)[40]。柑橘黃酮中的3,5,6,7,8,3’,4-七甲基乙氧基黃酮可降低抗D3/CD28抗體刺激的小鼠脾細(xì)胞對3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化銨(MTT)的還原作用，抑制磷酸二酯酶(磷酸二酯酶4B和磷酸二酯酶3B)活性，增加環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量，提高動(dòng)物的免疫能力[41]。綜合柑橘黃酮對炎癥、氧化應(yīng)激和免疫3個(gè)方面的影響可知，其可以作為一種效果顯著的營養(yǎng)活性物質(zhì)來維持動(dòng)物自由基穩(wěn)態(tài)和免疫平衡穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而改善動(dòng)物的健康狀態(tài)。

2.5 調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝

柑橘黃酮在多種高脂食物誘導(dǎo)的動(dòng)物試驗(yàn)中表現(xiàn)出顯著的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用，柑橘黃酮可以依賴于AMP依賴的蛋白激酶(AMPK)-α途徑抑制過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α，增強(qiáng)產(chǎn)熱因子(包括解偶聯(lián)蛋白1和PPARγ共激活因子1α)分化，促進(jìn)熱產(chǎn)生及抑制脂肪生成[42]。同時(shí)，柑橘黃酮中完全甲氧基化的A環(huán)可以抑制肝臟載脂蛋白B(apoB)的分泌，在不影響低密度脂蛋白的條件下，適度抑制膽固醇和甘油三酯的合成，進(jìn)而降低血液中脂質(zhì)的濃度，發(fā)揮降低血脂的作用，其含有的橘皮素和川陳皮素是發(fā)揮降低脂質(zhì)活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)[43]。柑橘黃酮也可以通過調(diào)節(jié)Nrf2-抗氧化反應(yīng)元件(ARE)信號(hào)通路，增強(qiáng)抗氧化基因HO-1、醌氧化還原酶1(NQO1)、r-谷氨酰半胱氨酸合成酶(r-GCS)表達(dá)，顯著提高抗氧化能力，降低氧化損傷，改善脂質(zhì)代謝[44]。此外，柑橘黃酮也可以通過對腸道微生物群的雙向調(diào)節(jié)作用提高去甲基化活性和短鏈脂肪酸(SCFA)產(chǎn)量，調(diào)節(jié)異桿菌屬(Allobaculum)和羅氏菌屬(Roseburia)與柑橘黃酮的生物轉(zhuǎn)化，增加體內(nèi)脂質(zhì)代謝的途徑[45]。目前廣泛的研究關(guān)注于柑橘黃酮在AMPK信號(hào)通路上對脂質(zhì)代謝的影響，而對其他代謝途徑的關(guān)注較少，并且柑橘黃酮在實(shí)際應(yīng)用中的劑量、周期和適用群體不盡相同，其具體調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

2.6 保護(hù)腸道健康

柑橘類植物及其生物活性物質(zhì)可以作為膳食補(bǔ)充劑和功能性成分在保護(hù)腸道健康方面發(fā)揮重要作用，通過保護(hù)腸黏液層、調(diào)節(jié)腸道免疫系統(tǒng)、對抗腸道氧化應(yīng)激、積極塑造微生物組和代謝組等多種途徑保護(hù)腸道健康[46]。柑橘黃酮通過磷脂酶C(PLC)、蛋白激酶C(PKC)、激酶(ERK)1-2途徑誘導(dǎo)2種主要腸凝膠形成黏蛋白(Muc)2和Muc5AC的分泌，阻斷受體相互作用蛋白激酶3/混合譜系激酶結(jié)構(gòu)域樣蛋白(RIPK3/MLKL)壞死因子信號(hào)傳導(dǎo)，上調(diào)Muc2表達(dá)，維持上皮屏障功能，保護(hù)腸黏液層[47-48]。純化后富含柑橘多甲氧基黃酮提取物(PMFE)的代謝調(diào)節(jié)作用主要依賴于腸道微生物群，PMFE顯著地富集了卵形擬桿菌(Bacteroidesovatus)，降低肥胖小鼠的支鏈氨基酸(BCAA)濃度，有效改善高脂飲食誘導(dǎo)的代謝綜合征，緩解腸道失調(diào)，調(diào)節(jié)BCAA代謝[49]。不僅如此，腸道微生物群代謝柑橘黃酮的同時(shí)，柑橘黃酮也在影響著微生物結(jié)構(gòu)，在動(dòng)物體內(nèi)雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)和乳桿菌屬(Lactobacillus)是參與柑橘黃烷酮的主要代謝細(xì)菌，它們通過切割黃烷酮骨架上的蕓香苷基，催化柑橘黃烷酮的環(huán)裂變，發(fā)生去甲基化和脫羥基化，產(chǎn)生比母體生物利用度更高的苯丙酸，再進(jìn)一步發(fā)揮生物活性[50]；而柑橘黃酮可以降低厚壁菌與擬桿菌比率并富集擬桿菌，提高嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansiamuciniphila)和異桿菌屬(Allobaculum)2種腸道保護(hù)細(xì)菌的相對豐度，調(diào)節(jié)腸道生態(tài)失調(diào)[49,51]。此外，柑橘黃酮還可以通過優(yōu)化微生物區(qū)系，提高腸道中SCFA的濃度，維持并調(diào)節(jié)宿主的腸道代謝穩(wěn)態(tài)[46,52]。

3 柑橘提取物在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用

3.1 在反芻動(dòng)物上的應(yīng)用

在奶牛飼糧中添加柑橘提取物對奶牛干物質(zhì)采食量、喂養(yǎng)行為、產(chǎn)奶量、乳脂率、乳蛋白率和乳成分沒有顯著影響，但提高了總C16脂肪酸的濃度，且降低了血漿胰島素的濃度，對奶牛的生理狀態(tài)具有一定的改善作用[53]。Williams等[54]用柑橘代替飼糧中的部分苜蓿時(shí)，發(fā)現(xiàn)其對奶牛瘤胃發(fā)酵及生產(chǎn)性能沒有產(chǎn)生任何不良影響，這說明柑橘可以作為一種低成本的飼料補(bǔ)充劑降低奶牛養(yǎng)殖成本。Santos等[55]給奶牛飼喂含18% DM柑橘皮渣的飼糧時(shí)，牛乳中單不飽和脂肪酸的含量升高﹐飽和脂肪酸的含量降低，當(dāng)添加量為9%～18% DM時(shí)，乳中總多酚和黃酮含量增加，同時(shí)乳的抗氧化能力也顯著提高；瘤胃內(nèi)容物和瘤胃液中真菌和古菌的相對豐度增加，更有效地促進(jìn)瘤胃發(fā)酵[56]。使用脫水柑橘飼喂奶牛能降低血液中葡萄糖和尿素氮濃度，增加非酯化脂肪酸濃度，緩解脂多糖誘導(dǎo)的奶牛炎癥反應(yīng)[57]。此外，用干燥柑橘皮渣代替玉米飼喂斷奶羔羊時(shí)發(fā)現(xiàn)柑橘皮渣對瘤胃pH及門水平的微生物組成沒有顯著影響，但極顯著提高了乙丙比，降低了丙酸和異戊酸濃度，在屬水平上提高了瘤胃菌群的多樣性，促進(jìn)了羔羊瘤胃上皮肌層和瘤胃乳頭的發(fā)育，提高了瘤胃內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[58]；柑橘渣還可以增加肉牛瘤胃中總揮發(fā)性脂肪酸、乙酸鹽和異戊酸鹽的濃度以及乙酸鹽與丙酸鹽的比例，降低丙酸鹽的濃度，提高飼糧中干物質(zhì)、有機(jī)物和無機(jī)物的表觀消化率[59]。綜上可知，柑橘可以作為一種非常規(guī)飼料添加在奶牛飼糧中，且柑橘提取物有望成為改善反芻動(dòng)物生產(chǎn)性能的飼料添加劑。

3.2 在家禽上的應(yīng)用

在生產(chǎn)中，合理的使用天然植物飼料添加劑能改善家禽的健康狀態(tài)及生產(chǎn)性能。在肉雞飼糧中添加10 mg/kg的柑橘提取物可顯著改善血漿總蛋白、白蛋白和葡萄糖濃度，降低血漿尿素濃度[60]，并且能顯著提高腸道中厭氧桿菌屬(Barnesiella)、布勞特氏菌屬(Blautia)、雙歧桿菌屬和乳桿菌屬的數(shù)量，降低另枝菌屬(Alistipes)、擬桿菌屬(Bacteroides)和大腸桿菌(Escherichiacoli)的數(shù)量，增加盲腸中乳酸、SCFA、乙酸鹽和丁酸鹽的濃度，降低氨基酸發(fā)酵產(chǎn)物(氨、胺、對甲酚和吲哚)的濃度，并上調(diào)回腸屏障基因閉鎖小帶蛋白-1(ZO-1)和封閉蛋白(Claudin)的mRNA表達(dá)，增強(qiáng)黏膜免疫穩(wěn)態(tài)，營造更適合宿主健康生產(chǎn)的腸道環(huán)境[61]，同時(shí)也可以提高IgG和免疫球蛋白M(IgM)的抗體滴度反應(yīng)，增強(qiáng)肉雞的體液免疫和抗病性[62]。當(dāng)肉雞處于熱應(yīng)激條件下時(shí)，補(bǔ)充400 mg/kg柑橘提取物(柑橘黃酮含量為47.9%)可顯著提高雞紅細(xì)胞谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶活性，升高血漿生長激素濃度及血清總磷、總蛋白和氯化物濃度，降低血清低密度脂蛋白和膽固醇濃度，提高肉雞的抗應(yīng)激能力和免疫力[63]。在蛋雞飼糧中添加柑橘提取物物時(shí)，其能提高雞蛋蛋黃的氧化穩(wěn)定性，改善蛋黃顏色，降低雞蛋中膽固醇的含量，提高雞蛋品質(zhì)[64-65]。此外，鵝飼糧中添加4%的柑橘提取物時(shí)有提高鵝日增重的趨勢，添加量不高于16%時(shí)不會(huì)對鵝產(chǎn)生任何不良反應(yīng)[66]。家禽屬于小型家畜，在飼糧中添加柑橘提取物時(shí)應(yīng)注意添加劑量，以免過量添加造成應(yīng)激等不良反應(yīng)。

3.3 在豬上的應(yīng)用

柑橘副產(chǎn)品及其提取物可以有效提高豬的免疫能力和抗應(yīng)激能力，調(diào)節(jié)腸道健康。崔藝燕等[67-69]發(fā)現(xiàn)，長期在育肥豬的飼糧中添加柑橘提取物(黃酮含量為20.77%)時(shí)，育肥豬體內(nèi)免疫球蛋白A(IgA)水平顯著提高，抗炎、抗氧化水平也均顯著提高，促進(jìn)了豬體內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)，同時(shí)還增強(qiáng)了腸道內(nèi)蛋白酶和脂肪酶活性，降低了淀粉酶活性，提高了小腸絨毛高度與隱窩深度的比率和結(jié)腸中乙酸濃度，促進(jìn)了糞桿菌屬(Faecalibacteriumspp.)和巨球型菌屬(Megasphaeraspp.)等有益菌的增殖，調(diào)節(jié)結(jié)腸的發(fā)酵模式，有效緩解斷奶仔豬的應(yīng)激反應(yīng)，其在不影響豬生產(chǎn)性能的情況下能提高豬的健康狀態(tài)，利于其高效生產(chǎn)。在不同飼糧蛋白質(zhì)水平下，需要合理的使用柑橘提取物，其添加在低蛋白質(zhì)(16%)飼糧中不會(huì)影響豬的整體生長性能，但會(huì)輕微增加斷奶仔豬腸道形態(tài)的損傷，減少蛋白質(zhì)發(fā)酵代謝產(chǎn)物，改變斷奶仔豬腸道的發(fā)酵模式，但其添加在高蛋白(20%)質(zhì)飼糧中會(huì)則促進(jìn)豬對飼糧中營養(yǎng)物質(zhì)的吸收[70]。此外，補(bǔ)充0.2～0.25 mg/kg柑橘提取物也可以在不影響豬生長性能、胴體特征和肉質(zhì)的前提下，增加肌內(nèi)脂肪含量，提高十五烷酸(C15∶0)濃度和超氧化物歧化酶活性，改善部分肉質(zhì)指標(biāo)[71]?？傊?，在豬飼糧中添加柑橘提取物不會(huì)對豬的生產(chǎn)性能產(chǎn)生負(fù)面影響，其可以改善豬機(jī)體免疫狀態(tài)，提高腸道健康，能作為一種非常規(guī)飼料資源應(yīng)用在豬生產(chǎn)中。

4 小結(jié)與展望

柑橘黃酮來源廣泛，含量豐富，可以預(yù)防與氧化應(yīng)激、炎癥和免疫功能失調(diào)有關(guān)的動(dòng)物健康問題[72]，促進(jìn)動(dòng)物健康生長，提高畜產(chǎn)品品質(zhì)，有望成為天然綠色飼料添加劑。目前，柑橘黃酮和柑橘提取物在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用的研究主要集中在柑橘皮渣和柑橘粗提物，其在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮活性作用的機(jī)制尚未闡明，深入挖掘柑橘黃酮在動(dòng)物體內(nèi)的代謝途徑與作用機(jī)制，將有助于為其在動(dòng)物生產(chǎn)中的研究與應(yīng)用提供理論支持，促進(jìn)動(dòng)物的綠色健康養(yǎng)殖；此外，如何提取純化柑橘副產(chǎn)品中的黃酮類活性物質(zhì)也是亟待解決的問題。深入研究發(fā)掘柑橘黃酮的應(yīng)用價(jià)值將有助于緩解飼料資源緊缺，減少環(huán)境污染，促進(jìn)畜禽健康綠色養(yǎng)殖。