MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性及血脂水平與GDM的關(guān)系

王玲玲， 任春麗

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院產(chǎn)科，河北 承德 067000）

妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是妊娠期女性較為常見的并發(fā)癥，發(fā)病率為1%～14%[1]。GDM的病因和致病機(jī)制較為復(fù)雜，脂代謝異常是其發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一[2]。另外，GDM的發(fā)生可能還具有遺傳特異性[3]，亞甲基四氫葉酸還原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）基因等遺傳易感基因可能參與了GDM的發(fā)生、發(fā)展。為此，本研究擬探討MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性及血脂與GDM的關(guān)系，為GDM的病因研究提供線索和依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年1月—2020年12月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院分娩的GDM患者144例，年齡23～36歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥20周歲，孕前無糖尿病史，無其他臟器疾病，無其他代謝性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：孕前患有糖尿病、其他臟器疾病及其他代謝性疾病，臨床資料不全。孕婦在孕24～28周行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（oral glucose tolerance test，OGTT），根據(jù)國際糖尿病與妊娠研究組（the International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups，IADPSG）標(biāo)準(zhǔn)：（1）空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)PG）≥5.1 mmol/L；（2）OGTT 1 h血糖≥10.0 mmol/L；（3）OGTT 2 h血糖≥8.5 mmol/L；3項(xiàng)中滿足任意1項(xiàng)，且排除孕前糖尿病，即可診斷為GDM。選取同期承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院正常孕婦142例作為對(duì)照組，年齡22～36歲。2個(gè)組之間年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有對(duì)象均知情同意。

1.2 方法

采集所有孕婦孕24～28周空腹靜脈血4 mL，其中2 mL采用乙二胺四乙酸抗凝，用于MTHFR基因檢測(cè)；另2 mL采用肝素抗凝，用于血脂項(xiàng)目檢測(cè)。采用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）-熒光探針法檢測(cè)MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性，MTHFR677C/T基因檢測(cè)試劑盒購自深圳奧薩醫(yī)藥有限公司，檢測(cè)儀器為L(zhǎng)ightCycler 480熒光定量PCR儀（瑞士羅氏公司）。采用AU5800全自動(dòng)生化分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）及配套試劑檢測(cè)三酰甘油（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平，計(jì)算非高密度脂蛋白膽固醇（non-high-density lipoprotein cholesterol，non-HDL-C）水平，計(jì)算公式為：non-HDL-C=TC-HDL-C。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。等位基因頻率采用基因頻率法計(jì)算，Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)采用擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。呈非正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用二元Logistic回歸分析評(píng)估GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果

GDM組和對(duì)照組MTHFR基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（χ2值分別為1.22、2.30，P>0.05）。

2.2 GDM組與對(duì)照組MTHFR基因型分布和等位基因頻率比較

GDM組MTHFR基因型分布及等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

表1 GDM組與對(duì)照組MTHFR基因型分布和等位基因頻率比較

2.3 GDM組與對(duì)照組血脂水平的比較

與對(duì)照組比較，GDM組TG、TC、LDL-C和non-HDL-C水平顯著升高（P<0.05），HDL-C水平顯著降低（P<0.01）。與CC基因型的GDM患者比較，TT基因型的GDM患者TC、non-HDL-C水平顯著升高（P<0.05），HDL-C水平明顯降低（P<0.01）；CT基因型的GDM患者TG、TC、LDL-C和non-HDL-C水平顯著升高（P<0.05），HDL-C水平顯著降低（P<0.01），其他項(xiàng)目各基因型之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與CC基因型的正常孕婦比較，TT和CT基因型的正常孕婦TG、TC和non-HDL-C水平均顯著升高（P<0.01），其他項(xiàng)目各基因型之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表2 GDM組與對(duì)照組血脂水平比較

2.4 GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素分析

二元Logistic回歸分析結(jié)果顯示，MTHFRT等位基因頻率及LDL-C、non-HDL-C水平升高是GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素[比值比（odds ratio，OR）值分別為5.25、2.44、1.65，95%可信區(qū)間分別為3.66～7.53、1.69～3.53、1.41～1.92]，HDL-C升高是GDM發(fā)生的保護(hù)因素（OR=0.05，95%CI為0.02～0.13）。見表3。

表3 GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素的分析

3 討論

由于診斷標(biāo)準(zhǔn)和人群的差異，不同國家和地區(qū)GDM的發(fā)病率有所不同，歐洲的發(fā)病率為5.4%[4]，我國則高達(dá)14%[5]，且呈逐年上升趨勢(shì)。GDM會(huì)導(dǎo)致孕婦發(fā)生心腦血管疾病及2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）的風(fēng)險(xiǎn)增高，還會(huì)增加子代發(fā)生T2DM和肥胖等慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn)[6]。GDM的致病因素尚不完全清楚，目前認(rèn)為可能具有與T2DM相似的發(fā)病機(jī)制和遺傳特性[7-8]。這提示與T2DM有關(guān)的遺傳易感基因和血脂代謝異常可能也參與了GDM的發(fā)生、發(fā)展。因此，分析GDM的危險(xiǎn)因素，了解致病原因，并針對(duì)相關(guān)危險(xiǎn)因素采取預(yù)防措施，對(duì)于有效降低GDM的發(fā)病率和改善妊娠結(jié)局有十分重要的價(jià)值。

MTHFR基因位于染色體1p36.3，含有11個(gè)外顯子，編碼的MTHFR是蛋氨酸代謝過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶，相對(duì)分子質(zhì)量為77 000。MTHFR基因的第677個(gè)核苷酸等位基因可發(fā)生突變，由胞嘧啶（C）突變?yōu)樾叵汆奏ぃ═），并產(chǎn)生3種基因型，即野生型（CC）、突變雜合型（CT）、突變純和型（TT），發(fā)生基金突變后的MTHFR活性和耐熱性均下降。目前，已有研究報(bào)道MTHFR基因C677T的多態(tài)性與T2DM有關(guān)[9-10]，但其與GDM關(guān)系的研究較少。本研究結(jié)果顯示，GDM組MTHFR基因型分布及等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這提示MTHFRC677T基因的多態(tài)性可能是GDM的遺傳危險(xiǎn)因素。

2016年，我國對(duì)《中國成人血脂異常防治指南》做了進(jìn)一步的修訂[11]，提出了明確的高脂血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)推薦不同人群采取不同的血脂管理辦法。但該指南是否適用于孕婦尚不明確，目前我國還沒有孕期血脂異常的診斷標(biāo)準(zhǔn)和管理辦法。女性懷孕后，母體為了滿足儲(chǔ)存能量和胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的需要，血脂水平會(huì)出現(xiàn)生理性升高。正常情況下，孕婦生產(chǎn)以后血脂水平會(huì)逐漸恢復(fù)正常。但有時(shí)孕期的血脂異常會(huì)導(dǎo)致妊娠高血壓、GDM等妊娠并發(fā)癥[12]。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，GDM組TG、TC、LDL-C和non-HDL-C的水平顯著升高（P<0.05），HDL-C水平顯著降低（P<0.01）。這表明血脂水平與GDM密切相關(guān)。一項(xiàng)監(jiān)測(cè)整個(gè)孕期血脂水平的縱向研究結(jié)果顯示，GDM患者孕早期TG、TC和LDL-C水平顯著高于正常孕婦，且隨著孕期的延長(zhǎng)呈升高趨勢(shì)[13]。

本研究結(jié)果顯示，與CC基因型的GDM患者比較，TT基因型的GDM患者TC、non-HDL-C水平顯著升高（P<0.05），HDL-C水平明顯降低（P<0.01）；CT基因型的GDM患者TG、TC、LDL-C和non-HDL-C水平顯著升高（P<0.05），HDL-C水平顯著降低（P<0.01）。與CC基因型的正常孕婦比較，TT和CT基因型的正常孕婦TG、TC和non-HDL-C水平均顯著升高（P<0.01）。二元Logistic回歸分析結(jié)果顯示，MTHFRT等位基因頻率及LDL-C、non-HDL-C水平升高是GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素（OR值分別為5.25、2.44、1.65，95%可信區(qū)間分別為3.66～7.53、1.69～3.53、1.41～1.92），HDL-C升高是GDM發(fā)生的保護(hù)因素（OR=0.05，95%可信區(qū)間為0.02～0.13）。由此可見，存在MTHFR基因C677T突變的GDM患者和正常孕婦的血脂水平明顯異常。GDM組TT、CT基因型分布和T等位基因頻率均明顯高于對(duì)照組（P<0.01），提示MTHFR基因C677T突變可能與GDM患者血脂異常有關(guān)。

本研究的不足之處：（1）GDM的危險(xiǎn)因素有很多，MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性和血脂只是其中的一部分，更多危險(xiǎn)因素尚需進(jìn)一步研究；（2）樣本量較少，因此得出的結(jié)論尚需多中心、大樣本量的研究進(jìn)一步驗(yàn)證；（3）本研究只是發(fā)現(xiàn)GDM患者血脂與對(duì)照組有差異，尚需進(jìn)一步確定有效的分界點(diǎn)，以利于GDM的防治和管理。

綜上所述，MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性可能與GDM患者血脂異常有關(guān)，MTHFRT等位基因頻率升高是GDM發(fā)生的危險(xiǎn)因素。