RNA干擾LncRNA GIHCG表達(dá)通過(guò)負(fù)調(diào)控miR-204-5p對(duì)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性的影響

王守忠 孔海燕

(1棗莊市腫瘤醫(yī)院微創(chuàng)病房，山東 棗莊 277500；2滕州市中心人民醫(yī)院檢驗(yàn)科)

肺癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率與死亡率逐年上升，已嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命安全，由于肺癌早期臨床癥狀較為隱匿導(dǎo)致患者確診時(shí)已處于癌癥晚期，大部分患者進(jìn)行化療或放療，其中吉非替尼成為晚期肺癌患者的主要治療方法，但長(zhǎng)時(shí)間治療后患者易產(chǎn)生耐藥性導(dǎo)致生存率降低〔1,2〕。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)可在腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移及耐藥性等過(guò)程中發(fā)揮重要作用，研究表明LncRNA在肺癌患者耐藥性發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用，還可能作為耐藥性的分子標(biāo)志物〔3,4〕。研究表明長(zhǎng)鏈非編碼RNA GIHCG(LncRNA GIHCG)在宮頸癌等腫瘤中上調(diào)表達(dá)，并可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、遷移，抑制細(xì)胞凋亡〔5〕。相關(guān)報(bào)道指出GIHCG在結(jié)直腸癌中高表達(dá)，在耐藥細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，干擾GIHCG表達(dá)可降低結(jié)直腸癌細(xì)胞的耐藥性〔6〕。但GIHCG對(duì)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性的影響尚未可知。LncBase Predicted v.2靶基因預(yù)測(cè)顯示微小RNA-204-5p(miR-204-5p)可能是GIHCG的靶基因，研究表明miR-204-5p的前體微小RNA-204(miR-204)在肺癌組織中表達(dá)下調(diào)，沉默其表達(dá)可促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖及侵襲〔7〕。但GIHCG是否可通過(guò)調(diào)控miR-204-5p的表達(dá)從而影響肺癌細(xì)胞Gefitinib耐藥性尚未可知。本研究主要探討GIHCG通過(guò)調(diào)控miR-204-5p的表達(dá)參與肺癌細(xì)胞對(duì)Gefitinib耐藥性的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料與試劑 肺癌細(xì)胞株HCC827購(gòu)自廣州賽庫(kù)生物技術(shù)有限公司；吉非替尼購(gòu)自美國(guó)AstraZeneca公司；RPMI1640培養(yǎng)基購(gòu)自上海語(yǔ)純生物科技有限公司；胎牛血清購(gòu)自上海江林生物科技有限公司；胰蛋白酶購(gòu)自北京博爾邁生物技術(shù)有限公司；細(xì)胞計(jì)數(shù) (CCK)-8試劑盒購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司；膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶(PI)細(xì)胞凋亡試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；Trizol、反轉(zhuǎn)錄及熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)試劑盒均購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；Lipofectamine2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；GIHCG小干擾RNA(si-GIHCG)、亂序無(wú)意義陰性序列(si-NC)、miR-204-5p模擬物(mimics)、陰性對(duì)照(miR-NC)、miR-204-5p特異性寡核苷酸抑制劑(anti-miR-204-5p)及陰性對(duì)照(anti-miR-NC)均購(gòu)自上海吉瑪公司；pcDNA3.1購(gòu)自上海索寶生物科技有限公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量檢測(cè)試劑盒、RIPA裂解液、增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑(ECL)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；兔抗人細(xì)胞周期蛋白(Cyclin)D1、B淋巴細(xì)胞瘤(Bcl)-2、p21、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司；辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2方法

1.2.1構(gòu)建肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞株(HCC827 GR) HCC827細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，待細(xì)胞覆蓋瓶底時(shí)棄培養(yǎng)基，置于含有2.5 mg/ml吉非替尼的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，將培養(yǎng)基更換為含有0.2 mmol/L吉非替尼的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)7 d，將培養(yǎng)基更換為不含吉非替尼的正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)14 d，將細(xì)胞置于含有0.3～0.5 mmol/L吉非替尼的96孔板中培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)28 d即可獲得單克隆細(xì)胞株，擴(kuò)大培養(yǎng)，采用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞對(duì)吉非替尼的抗藥性，選取在無(wú)吉非替尼條件下抗性表型且已穩(wěn)定時(shí)間超過(guò)6個(gè)月的細(xì)胞株為耐藥細(xì)胞株(HCC827 GR)〔8〕。

1.2.2吉非替尼處理與實(shí)驗(yàn)分組 用不同濃度(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 μmol/L)的吉非替尼處理HCC827細(xì)胞與HCC827 GR細(xì)胞〔9〕，通過(guò)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率，選用對(duì)HCC827細(xì)胞增殖抑制作用較小的濃度進(jìn)行后續(xù)研究。取對(duì)數(shù)期HCC827 GR細(xì)胞，按照隨機(jī)數(shù)字表法將HCC827 GR細(xì)胞分為吉非替尼+si-NC組(si-NC轉(zhuǎn)染至HCC827 GR細(xì)胞48 h，含有0.5 μmol/L的吉非替尼處理48 h)、吉非替尼+si-GIHCG組(si-GIHCG轉(zhuǎn)染至HCC827 GR細(xì)胞48 h，含有0.5 μmol/L的吉非替尼處理48 h)、吉非替尼+miR-NC組(miR-NC轉(zhuǎn)染至HCC827 GR細(xì)胞48 h，含有0.5 μmol/L的吉非替尼處理48 h)、吉非替尼+miR-204-5p組(miR-204-5p mimics轉(zhuǎn)染至HCC827 GR細(xì)胞48 h，含有0.5 μmol/L的吉非替尼處理48 h)、吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-NC組(si-GIHCG與anti-miR-NC共轉(zhuǎn)染至HCC827 GR細(xì)胞48 h，含有0.5 μmol/L的吉非替尼處理48 h)、吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-204-5p組(si-GIHCG與anti-miR-204-5p共轉(zhuǎn)染至HCC827 GR細(xì)胞48 h，含有0.5 μmol/L的吉非替尼處理48 h)，各組轉(zhuǎn)染時(shí)均按照Lipofectamine2000說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量(qRT)-PCR檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染效果。

1.2.3CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率 HCC827細(xì)胞與轉(zhuǎn)染后HCC827 GR細(xì)胞經(jīng)0.25%胰蛋白酶消化，加入培養(yǎng)基制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度至5×103個(gè)/ml，將細(xì)胞懸液接種于96孔板(100 μl/孔)，置于37℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h，將培養(yǎng)基更換為含有吉非替尼的培養(yǎng)基，藥物濃度按照1.2.2處理，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，置于37℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h，每孔加入10 μl CCK-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測(cè)每孔450 nm時(shí)吸光度值(OD值)，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率(%)=〔(對(duì)照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/對(duì)照組OD值〕×100%。計(jì)算吉非替尼的半數(shù)抑制濃度(IC50)：應(yīng)用Msvbvm50軟件計(jì)算OD值減少50%所需的藥物濃度，實(shí)驗(yàn)設(shè)置3次重復(fù)。

1.2.4qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中GIHCG、miR-204-5p表達(dá)水平 取對(duì)數(shù)期HCC827與HCC827 GR細(xì)胞，同時(shí)分別將pcDNA、pcDNA-GIHCG、si-NC、si-GIHCG轉(zhuǎn)染至HCC827 GR細(xì)胞，收集各組HCC827 GR細(xì)胞，采用Trizol法提取細(xì)胞總RNA，應(yīng)用Nanodrop2000c超微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度，參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，GIHCG正向引物5′-CTTTCAAGAAGTTTGGCTGTC-3′，反向引物5′-GCTCATTCAACGGATAAGTC-3′；GAPDH正向引物5′-AACGGATTTGGTCGTATTG-3′，反向引物：5′-GGAAGATGGTGATGGGATT-3′；miR-204-5p正向引物5′-GGCTACAGTCTTTCTTCATGTGA-3′，反向引物5′-ACAATTGAACGTCCCTTTGCC-3′；U6正向引物5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′，反向引物5′-GGAACGCTTCACGAATTTG-3′，引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。根據(jù)熒光定量PCR試劑盒配制qRT-PCR體系，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性2 min，95℃變性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共循環(huán)40次，置于ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)，GIHCG以GAPDH為內(nèi)參，miR-204-5p以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算GIHCG、miR-204-5p相對(duì)表達(dá)量。

1.2.5流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集各組HCC827 GR細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化，4℃條件下經(jīng)1 000 r/min轉(zhuǎn)速離心6 min，加入預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌，加入500 μl結(jié)合緩沖液，依次加入5 μl 膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素與5 μl PI，充分混勻，于1 h內(nèi)置于FACS Calibur流式細(xì)胞儀及應(yīng)用Cellauest軟件檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡。

1.2.6熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)LncRNA GIHCG的靶基因 LncBase Predicted v.2靶基因預(yù)測(cè)顯示GIHCG的序列中含有與miR-204-5p互補(bǔ)的核苷酸序列，將結(jié)合位點(diǎn)與突變位點(diǎn)片段分別插入熒光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建野生型報(bào)告基因載體WT-GIHCG與突變型報(bào)告基因載體MUT-GIHCG，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HCC827 GR細(xì)胞，按照隨機(jī)數(shù)字表法將HCC827 GR細(xì)胞分成：轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-GIHCG的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：miR-NC組、miR-204-5p組；轉(zhuǎn)染MUT-GIHCG的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：miR-NC組、miR-204-5p組。置于37℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48 h，檢測(cè)各組熒光素酶活性。

1.2.7Western印跡檢測(cè)CyclinD1、Bcl-2、p21、Bax蛋白表達(dá) 收集吉非替尼+si-NC組、吉非替尼+si-GIHCG組、吉非替尼+miR-NC組、吉非替尼+miR-204-5p組、吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-NC組、吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-204-5p組HCC827 GR細(xì)胞，加入RIPA裂解液提取細(xì)胞總蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白濃度，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離蛋白，分離的蛋白凝膠轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜，封閉，孵育一抗(CyclinD1 1∶1 000，Bcl-2 1∶2 000，p21 1∶1 000，Bax 1∶2 000)稀釋液，TBST洗滌，4℃孵育24 h，TBST洗滌，孵育二抗稀釋液(1∶5 000)，室溫條件下孵育1 h，TBST洗滌，滴加ECL，暗室內(nèi)曝光，顯影，定影，應(yīng)用凝膠成像分析系統(tǒng)及ImageJ軟件分析各條帶灰度值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1不同濃度吉非替尼對(duì)肺癌細(xì)胞和肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞增殖抑制率的影響 隨著吉非替尼使用劑量的增加，HCC827 GR細(xì)胞增殖抑制率顯著低于HCC827細(xì)胞(P<0.05)，HCC827 GR細(xì)胞IC50值顯著高于HCC827細(xì)胞(P<0.05)，其中吉非替尼濃度為0.5 μmol/L時(shí)對(duì)HCC827細(xì)胞的抑制作用較小，因而選用0.5 μmol/L的吉非替尼進(jìn)行后續(xù)研究，見(jiàn)表1。

表1 各組細(xì)胞增殖抑制率、LncRNA GIHCG和miR-204-5p表達(dá)水平比較的影響

2.2LncRNA GIHCG和miR-204-5p在肺癌細(xì)胞和肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞中的表達(dá) HCC827 GR細(xì)胞中GIHCG的表達(dá)水平顯著高于HCC827細(xì)胞(P<0.05)，而miR-204-5p的表達(dá)水平顯著低于HCC827細(xì)胞(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.3LncRNA GIHCG靶向調(diào)控miR-204-5p的表達(dá) LncBase Predicted v.2靶基因預(yù)測(cè)顯示GIHCG的序列中含有與miR-204-5p互補(bǔ)的核苷酸序列，見(jiàn)圖1。雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染野生型報(bào)告基因載體WT-GIHCG的HCC827 GR細(xì)胞中，與miR-NC組相比，miR-204-5p組熒光素酶活性顯著降低(P<0.05)；轉(zhuǎn)染突變型報(bào)告基因載體MUT-GIHCG的HCC827 GR細(xì)胞中，與miR-NC組相比，miR-204-5p組熒光素酶活性無(wú)明顯變化(P>0.05)，見(jiàn)表2。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與pcDNA組HCC827 GR細(xì)胞中miR-204-5p表達(dá)水平(1.00±0.07)相比，pcDNA-GIHCG組(0.56±0.05)顯著降低(P<0.05)；與si-NC組HCC827 GR細(xì)胞中miR-204-5p表達(dá)水平(1.01±0.08)，si-GIHCG組(2.49±0.25)顯著升高(P<0.05)。

圖1 GIHCG的序列中含有與miR-204-5p互補(bǔ)的核苷酸序列

表2 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

2.4干擾LncRNA GIHCG表達(dá)聯(lián)合吉非替尼(0.5 μmol/L)對(duì)肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞增殖和凋亡的影響 相較于吉非替尼+si-NC組，吉非替尼+si-GIHCG組HCC827 GR細(xì)胞中GIHCG的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，細(xì)胞增殖抑制率顯著升高(P<0.05)，細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.05)，CyclinD1、Bcl-2、蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，p21、Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，見(jiàn)圖2、圖3、表3。

1，2：吉非替尼+si-NC組，吉非替尼+si-GIHCG組圖2 Western印跡檢測(cè)增殖、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

圖3 干擾LncRNA GIHCG表達(dá)聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞凋亡的影響

2.5miR-204-5p過(guò)表達(dá)聯(lián)合吉非替尼(0.5 μmol/L)對(duì)肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞增殖和凋亡的影響 相較于吉非替尼+miR-NC組，吉非替尼+miR-204-5p組HCC827 GR細(xì)胞中miR-204-5p的表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，細(xì)胞增殖抑制率與細(xì)胞凋亡率均顯著升高(P<0.05)，CyclinD1、Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，p21、Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，見(jiàn)表4、圖4、圖5。

表3 干擾LncRNA GIHCG表達(dá)聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞增殖和凋亡的影響

表4 miR-204-5p過(guò)表達(dá)聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞增殖和凋亡的影響

1，2：吉非替尼+miR-NC組,吉非替尼+miR-204-5p組圖4 Western印跡檢測(cè)增殖、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

圖5 miR-204-5p過(guò)表達(dá)聯(lián)合吉非替尼對(duì)肺癌吉非替尼耐藥細(xì)胞凋亡的影響

2.6抑制miR-204-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾LncRNA GIHCG表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性的作用 與吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-NC組相比，吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-204-5p組HCC827 GR細(xì)胞中miR-204-5p的表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，細(xì)胞增殖抑制率與細(xì)胞凋亡率均顯著降低(P<0.05)，CyclinD1、Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，p21、Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)圖6、圖7、表5。

1，2：吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-NC組,吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-204-5p組圖6 Western印跡檢測(cè)增殖、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

圖7 抑制miR-204-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾LncRNA GIHCG表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性的作用

表5 抑制miR-204-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾LncRNA GIHCG表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性的作用

3 討 論

肺癌靶向治療具有療效顯著且副作用小等特點(diǎn)，表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)可調(diào)控肺癌細(xì)胞增殖及凋亡，研究表明針對(duì)EGFR靶向治療已成為熱點(diǎn)問(wèn)題，其中吉非替尼是EGFR-酪氨酸激酶抑制劑并可有效提高肺癌治療效果，但耐藥性的出現(xiàn)導(dǎo)致肺癌患者生存率降低〔10〕。相關(guān)報(bào)道指出LncRNA可通過(guò)充當(dāng)miRNA的海綿分子從而影響肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性〔11〕。GIHCG通過(guò)調(diào)節(jié)miR-429的表達(dá)從而促進(jìn)卵巢癌的發(fā)展〔12〕。研究表明GIHCG通過(guò)調(diào)節(jié)miR-429促進(jìn)舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)展〔13〕。陳恩利等〔14〕研究表明GIHCG在肝癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著升高，并且通過(guò)調(diào)控miR-429的表達(dá)從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲。本研究結(jié)果提示HCC827 GR細(xì)胞對(duì)吉非替尼的耐藥性明顯增強(qiáng)；GIHCG表達(dá)量升高可能促進(jìn)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性的發(fā)生；干擾LncRNA GIHCG表達(dá)聯(lián)合吉非替尼處理后，HCC827 GR細(xì)胞增殖抑制率與細(xì)胞凋亡率均顯著升高，提示干擾GIHCG表達(dá)可能通過(guò)抑制肺癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡從而降低吉非替尼耐藥性。研究表明CyclinD1可通過(guò)與細(xì)胞周期依賴(lài)蛋白激酶結(jié)合形成復(fù)合物從而正向調(diào)控細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞增殖，p21可抑制CyclinD1與細(xì)胞周期依賴(lài)蛋白激酶結(jié)合從而誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，抑制細(xì)胞增殖〔15，16〕。線(xiàn)粒體通路在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用，促凋亡蛋白Bax表達(dá)上調(diào)可通過(guò)激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抗凋亡蛋白Bcl-2可抑制細(xì)胞凋亡〔17〕。本研究結(jié)果提示干擾GIHCG表達(dá)可能通過(guò)上調(diào)p21、Bax的表達(dá)及下調(diào)CyclinD1、Bcl-2的表達(dá)從而降低肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性。

miR-204-5p通過(guò)下調(diào)USP47抑制卵巢癌細(xì)胞增殖〔18〕。研究表明miR-204-5p可抑制甲狀腺乳頭狀癌K1細(xì)胞增殖、遷移及侵襲〔19〕。相關(guān)報(bào)道指出miR-204-5p通過(guò)下調(diào)RAB22A抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和侵襲并可增強(qiáng)其化學(xué)敏感性〔20〕。本研究結(jié)果提示miR-204-5p過(guò)表達(dá)可能通過(guò)促進(jìn)p21、Bax表達(dá)及抑制CyclinD1、Bcl-2表達(dá)從而增強(qiáng)肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼的敏感性。本研究結(jié)果說(shuō)明抑制miR-204-5p表達(dá)可逆轉(zhuǎn)干擾GIHCG表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞吉非替尼耐藥性的作用，提示干擾GIHCG表達(dá)可通過(guò)上調(diào)miR-204-5p的表達(dá)從而增強(qiáng)肺癌細(xì)胞吉非替尼敏感性。