松黃和野菊花及其聯(lián)合應(yīng)用對(duì)小鼠血糖及血脂的影響

趙士博 吳忠港 鄭淮遠(yuǎn) 潘智 李昊陽(yáng) 鄧鵬鈺 韋雪海 黃鎖義

(右江民族醫(yī)學(xué)院 1臨床醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000；2護(hù)理學(xué)院；3藥學(xué)院；4廣西高校右江流域特色民族藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

松黃即松花粉，松科植物馬尾松等松屬植物的精細(xì)胞，是中國(guó)藥食兩用的傳統(tǒng)中草藥〔1〕。松黃味甘、性溫、無(wú)毒，兼具益氣除風(fēng)、生肌止血等多種藥理功效，對(duì)血糖的降低有奇效〔2〕。野菊花是菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L．的干燥花序，性味苦辛、微寒，具有抗菌解熱、保肝、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)等藥理作用〔3〕。本實(shí)驗(yàn)研究松黃和野菊花醇提取物對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠體重、食欲、血糖及肝功能的影響。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠，雌雄參半，體重(20±2)g，周齡不詳，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK桂2012-0003。

1.2藥品 藥材松黃和野菊花由右江民族醫(yī)學(xué)院科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心主任黃鎖義教授鑒定為松科植物松屬喬木馬尾松Pinus massoniana Lamb.的干燥花粉和菊科植物野菊Chrysanthemum indicum的干燥頭狀花序。鹽酸二甲雙胍片，規(guī)格:每片 0.25 g，批號(hào):180627，北京京豐制藥集團(tuán)有限公司；四氧嘧啶，規(guī)格：5 g/瓶。批號(hào):227A021，北京索萊寶科技有限公司。

1.3儀器與耗材 安穩(wěn)+血糖儀(三諾生物傳感股份有限公司)；TWCL-T 5000磁力攪拌器(上海標(biāo)和儀器有限公司)；DLSB-5低溫冷卻液循環(huán)泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；JSC電子天平秤CN-BH(福州科迪電子技術(shù)有限公司)；FA1204B電子天平(上海精科天美儀器有限公司)；JMF-320G多級(jí)閃蒸器(河南智晶生物科技股份有限公司)；TH-UP-10實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用超純水機(jī)(山東滕海分析儀器有限公司)；清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)鼠維持飼料(江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司)。

1.4四氧嘧啶誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型的建立 參照文獻(xiàn)〔4〕方法，禁食16 h后，將四氧嘧啶一水合物溶解在0.9%氯化鈉溶液中，通過(guò)腹腔注射150 mg/kg體重的四氧嘧啶進(jìn)行造模，24 h注射1次，共3次。誘導(dǎo)3 d后進(jìn)行篩選。選擇3 d后血糖控制在200 mg/dl及以上的小鼠進(jìn)行本研究?？瞻讓?duì)照組普通飼料喂養(yǎng)，不建模。腹腔注射四氧嘧啶幾小時(shí)內(nèi)，個(gè)別小鼠會(huì)出現(xiàn)低血糖反應(yīng)，以致死亡。模型小鼠出現(xiàn)消瘦、皮毛光澤降低及活動(dòng)減少，同時(shí)鼠籠墊料臟濕加速等現(xiàn)象出現(xiàn)。以上變化符合糖尿病病癥中的“三多一少”(多飲、多食、多尿及體重減少)的特征，提示造模成功。分組時(shí)逐一測(cè)定小鼠空腹血糖，各組小鼠的平均血糖值相差應(yīng)小于20 mg/dl，血糖值升高不符合要求的動(dòng)物予以剔除。

1.5動(dòng)物分組與給藥 試驗(yàn)采用隨機(jī)數(shù)字表法并用5%苦味酸標(biāo)記分為7個(gè)組，即空白對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，松黃組，野菊花組，松花和野菊花1∶1配比低、中、高3個(gè)劑量(低、中、高劑量)組。依照雌雄1∶1分籠并隨機(jī)分配，每組10只。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃12.5 mg/kg鹽酸二甲雙胍溶液。兩種中藥提取物分別配制成1.5、4.5、7.5 mg/ml 3種濃度的藥液，分別對(duì)應(yīng)配伍組低、中、高3個(gè)實(shí)驗(yàn)組。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)1 w適應(yīng)性喂養(yǎng)后逐一測(cè)定體重。為保證灌胃劑量的準(zhǔn)確與實(shí)驗(yàn)操作的嚴(yán)謹(jǐn)，實(shí)驗(yàn)期間每3 d測(cè)定一次體重。實(shí)驗(yàn)中各組均按體重20 ml/kg給予對(duì)應(yīng)藥液，空白對(duì)照組按等體積給予0.9%生理鹽水，共給藥14 d。采用24 h灌胃原則，本實(shí)驗(yàn)遵守動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理要求。

1.6藥物提取 參照文獻(xiàn)中〔5〕松黃的乙醇提取方法，稱(chēng)取2 kg松黃用10倍體積的乙醇超聲提取3次，合并濾液進(jìn)行閃蒸濃縮與冷凍干燥，得到藥物干燥粉末，用純水配成生藥量為1 g/ml的溶液。野菊花2 kg粉碎，過(guò)60目篩，按料液比1∶100加入乙醇，浸泡30 min〔6〕，80℃恒溫加熱，回流2 h，提取3次，合并提取液，蒸發(fā)濃縮得提取物浸膏并配制成生藥量為1 g/ml的藥液。兩種藥物均于4℃冰箱保存。

1.7實(shí)驗(yàn)指標(biāo) 檢測(cè)小鼠體重變化，用快速血糖儀測(cè)定小鼠空腹血糖值，用生化分析儀檢測(cè)樣本中血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽固醇(TC)及三酰甘油(TG)含量。頸椎脫臼處死小鼠后即刻取肝稱(chēng)重，并計(jì)算肝指數(shù)：肝指數(shù)=肝凈重(g)/體重(g)×100%。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0進(jìn)行方差分析、兩實(shí)驗(yàn)組組間比較用矯正檢驗(yàn)水準(zhǔn)后的配對(duì)t檢驗(yàn)；用雙因素重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)方差分析進(jìn)行多重比較，部分用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1各組體重對(duì)比 給藥前及給藥14 d，各組體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給藥7 d除陽(yáng)性對(duì)照組外，各實(shí)驗(yàn)組體重均顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2各組血糖水平對(duì)比 各實(shí)驗(yàn)組血糖均顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，表明造模成功。給藥7 d,低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組血糖均顯著低于給藥前(P<0.05)。給藥14 d，除野菊花組外，其余實(shí)驗(yàn)組血糖均顯著低于給藥前(P<0.05)，且以高劑量組血糖最低。見(jiàn)表2。

表1 各組不同時(shí)間體重比較

表2 各組不同時(shí)間血糖水平比較

2.3各組血生化指標(biāo)和肝臟指數(shù)對(duì)比 各實(shí)驗(yàn)組ALT顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組ALT顯著低于松黃組和野菊花組(P<0.05)。各實(shí)驗(yàn)組AST顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，各實(shí)驗(yàn)組間AST差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組、松黃組、低劑量組、中劑量組TC顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，野菊花組、高劑量組TC與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。除高劑量組TG與空白對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)外(P>0.05)，其余實(shí)驗(yàn)組TG均顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)。各實(shí)驗(yàn)組肝臟指數(shù)顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，高劑量組肝臟指數(shù)顯著高于松黃組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組血生化指標(biāo)水平比較

3 討 論

四氧嘧啶作用于胰島的β細(xì)胞，能夠中止胰島素分泌而引起動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性四氧嘧啶糖尿病〔7〕。四氧嘧啶通過(guò)產(chǎn)生超氧自由基選擇性地破壞胰島β細(xì)胞，并使細(xì)胞內(nèi)DNA 損傷，同時(shí)激活多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖體合成酶的活性，進(jìn)一步致使mRNA 功能受損引起細(xì)胞死亡，形成胰島素依賴(lài)性糖尿病。

西醫(yī)治療糖尿病存在耐受性低、藥物不良反應(yīng)多、依賴(lài)性強(qiáng)等問(wèn)題。中藥通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多效應(yīng)及多功能的作用特點(diǎn)，已成為當(dāng)前治療糖尿病藥物研究的新興方向〔8〕。研究發(fā)現(xiàn)，松黃對(duì)降低血糖有奇效〔9～11〕，同時(shí)佐以野菊花使松黃作為君藥的作用進(jìn)一步發(fā)揮。

本研究表明，松黃和野菊花及其配伍能夠在一定程度上降低胰島素依賴(lài)性糖尿病小鼠的空腹血糖，且效果隨配伍藥物濃度的升高而呈正相關(guān)。此外松黃和野菊花配伍能夠有效降低血清中TG含量與ALT水平，對(duì)緩解糖尿病典型的“三多一少”癥狀，對(duì)預(yù)防糖尿病并發(fā)癥起良性作用。但該配伍對(duì)血清AST水平干預(yù)效果不明顯，表明該配伍對(duì)四氧嘧啶致糖尿病小鼠的肝臟損傷無(wú)修復(fù)或保護(hù)作用。