內(nèi)蒙古地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR和EML4-ALK基因檢測(cè)

蔡琳 岳林 邢少姬 穆永平 戈娜 張智燕 池敏

(1包頭醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)與麻醉學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)中心，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2包頭市腫瘤醫(yī)院病理科；包頭醫(yī)學(xué)院 3臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)與分子診斷教研室；4營(yíng)養(yǎng)與食品健康研究所；5內(nèi)蒙古腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科；6包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科；7內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科)

與非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)發(fā)生有關(guān)的驅(qū)動(dòng)基因很多，其中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變和由棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白樣(EML)4和間變性淋巴瘤激酶(ALK)兩種基因的特定部分發(fā)生融合而成的EML4-ALK融合基因也是NSCLC細(xì)胞靶向治療中最重要的靶點(diǎn)和療效預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。

由于我國(guó)地域廣闊，在國(guó)內(nèi)惡性腫瘤的發(fā)生與靶向治療等和相關(guān)驅(qū)動(dòng)基因突變發(fā)生的相關(guān)研究中，會(huì)受到不同地域、飲食習(xí)慣、檢測(cè)技術(shù)和樣本量等因素的影響，進(jìn)而使研究結(jié)果出現(xiàn)差異〔1～5〕。

目前尚未見關(guān)于內(nèi)蒙古地區(qū)NSCLC患者上述兩種驅(qū)動(dòng)基因的異常情況的研究報(bào)道數(shù)據(jù)。本研究旨在了解內(nèi)蒙古地區(qū)NSCLC患者EGFR與EML4-ALK基因異常突變情況。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 選取收集來自內(nèi)蒙古地區(qū)多家醫(yī)院2016年12月至2019年12月就診且經(jīng)分子病理基因診斷室組織病理學(xué)確診為NSCLC，且針對(duì)其兩種驅(qū)動(dòng)基因EML4-ALK融合基因和EGFR基因突變進(jìn)行檢測(cè)的263例患者(包括腺癌214例和非腺癌49例)腫瘤組織活檢樣本作為研究對(duì)象。入選對(duì)象均未在檢測(cè)前接受過任何形式的放化療或抗腫瘤的靶向治療。年齡33～88歲，平均(60.8±14.6)歲。男161例，女102例，民族均為漢族，且在內(nèi)蒙古地區(qū)居住有10年以上，彼此無血緣關(guān)系。

1.2檢測(cè)方法

1.2.1腫瘤細(xì)胞DNA和RNA的提取 嚴(yán)格遵循試劑盒(天根生化科技有限公司生產(chǎn))提取說明步驟規(guī)范操作提取出腫瘤活檢組織標(biāo)本中可用于下一步基因突變檢測(cè)的基因組DNA和總RNA。

1.2.2EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合檢測(cè) 嚴(yán)格按照試劑盒(鑫諾美迪基因檢測(cè)技術(shù)科技公司生產(chǎn))說明要求在ABI 7300 PIUS熒光定量檢測(cè)儀上完成EGFR基因突變(PCR熒光探針法)和EML4-ALK融合基因(RT-PCR熒光探針法)的檢測(cè)與結(jié)果判定。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合陽性結(jié)果一般情況 發(fā)現(xiàn)有EML4-ALK融合基因陽性者15例(5.70%)，EGFR基因的18、19、20和21號(hào)共4個(gè)外顯子上7種常見突變位點(diǎn)類型均存在，共計(jì)突變陽性者92例(34.98%)，EGFR基因突變形式有單一位點(diǎn)和雙位點(diǎn)，前者占總突變的93.48%(86/92)，后者占總突變的6.52%(6/92)；單一位點(diǎn)包括19del 34例、L858R 43例、G719X 1例、T790M 1例、20ins 1例、S768I 2例、L861Q 4例；雙位點(diǎn)突變包括G719X/L861Q和19del/L858R各1例，L858R/T790M和G719X/S786I各2例。

2.2EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合與患者臨床相關(guān)參數(shù) 不同性別、病理類型患者EGFR突變率差異顯著(均P<0.01)；不同性別、年齡EML4-ALK融合基因陽性表達(dá)率差異顯著(P<0.05，P<0.01)；無同時(shí)發(fā)生EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性的患者。見表1。

表1 EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合與患者臨床相關(guān)參數(shù)〔n(%)〕

3 討 論

人類體細(xì)胞中EGFR基因發(fā)生突變后可導(dǎo)致其信號(hào)傳導(dǎo)通路持續(xù)性激活，并與包括NSCLC在內(nèi)的多種惡性腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移相關(guān)〔6〕。同時(shí)，EGFR基因酪氨酸激酶功能區(qū)的18～21號(hào)外顯子上的多種突變與針對(duì)以其為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的EGFR-酪氨酸激酶抑制劑(TKI)靶向藥物對(duì)NSCLC患者治療的敏感性與有效性相關(guān)。

研究表明，EML4-ALK基因融合后激發(fā)NSCLC發(fā)生的機(jī)制與EGFR突變引發(fā)惡性腫瘤的機(jī)制相似，均具有酪氨酸激酶的持續(xù)激活及對(duì)癌基因的特殊依賴性〔7〕。同時(shí)，EML4-ALK融合基因和EGFR基因一樣，目前已成為NSCLC靶向治療的新型分子靶標(biāo)，克唑替尼等EML4-ALK靶向藥物對(duì)其融合基因陽性者有效。

本研究EGFR基因突變率與陜西南部(35.19%)〔8〕的較為接近，高于云南(25.55%)〔9〕和青海(31.33%)〔10〕，低于四川(47.78%)〔11〕、遼寧沈陽(53.7%)〔12〕、上海(47.34%)〔13〕等地區(qū)。本研究中EGFR基因4個(gè)外顯子上7種常見突變位點(diǎn)類型中檢出最多的突變位點(diǎn)類型，也與上述地區(qū)基本一致。同時(shí)，本研究人群中發(fā)現(xiàn)除以單一位點(diǎn)為主要突變外，還有雙位點(diǎn)突變個(gè)體，這與上述四川地區(qū)的結(jié)果較為一致。本研究結(jié)果也與上述報(bào)道的云南、四川、遼寧沈陽、上海的結(jié)果一致。

在EGFR基因突變熱點(diǎn)中已經(jīng)公認(rèn)：19-del、21-L858R和18-G719X 3種突變屬于敏感性突變，即均對(duì)EGFR-TKI靶向藥物治療敏感有效，而另兩種突變20-T790M和20-Ins為耐藥性突變，均對(duì)EGFR-TKI靶向藥物耐藥無效。本研究結(jié)果提示絕大多數(shù)EGFR基因突變NSCLC患者個(gè)體能夠從EGFR-TKI靶向藥物中受益。

本研究中EML4-ALK融合基因的陽性率低于報(bào)道的中山市(9.09)〔14〕和華南地區(qū)(17.1%)〔4〕，高于浙江省(4.70%)地區(qū)〔5〕。同時(shí)，本研究與上述中山市、浙江省的結(jié)果一致，而華南地區(qū)的研究結(jié)果存在差異，該研究沒有發(fā)現(xiàn)該融合基因的發(fā)生與性別和年齡有關(guān)。

EML4-ALK融合基因的表達(dá)與NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)，V1、V3為常見的融合〔15〕。EML4-ALK融合基因的耐藥機(jī)制主要是：激酶域的突變從而影響ALK活性位點(diǎn)對(duì)藥物的敏感性，基因拷貝數(shù)目的增加，抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路從而激活信號(hào)旁路。臨床研究表明，當(dāng)EML4-ALK陽性患者出現(xiàn)耐藥的情況后，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其EGFR基因易發(fā)生敏感性突變〔16〕。因此，EML4-ALK融合基因陽性患者在使用ALK-TKI靶向藥物治療過程中即使出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，其也可從EGFR-TKI靶向藥物中受益。

此外，有文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)現(xiàn)，有少數(shù)患者同時(shí)發(fā)生EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性〔17〕。本研究未發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性兩者共存者。這可能與本研究所涉樣本數(shù)不足夠多有關(guān)。隨著靶向治療由單靶點(diǎn)向多靶點(diǎn)的發(fā)展，對(duì)于上述EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性同時(shí)并存患者能否從中受益，還需要大量的臨床試驗(yàn)研究來進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)。同時(shí)，還需要在后續(xù)的研究中增加樣本數(shù)，并進(jìn)一步深入研究探討其他的NSCLC驅(qū)動(dòng)基因如ROS融合基因等與患者臨床相關(guān)參數(shù)及其飲食生活習(xí)慣等的相關(guān)性，以便更好地為NSCLC的早期預(yù)防和晚期靶向治療提供幫助。