正交法優(yōu)化復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑提取工藝研究

袁榮獻(xiàn)劉天翔曾 真梁 會

（1.貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，貴州貴陽550001；2.貴州省建筑醫(yī)院，貴州貴陽550001）

正交法優(yōu)化復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑提取工藝研究

袁榮獻(xiàn)1劉天翔2曾 真1梁 會1

（1.貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，貴州貴陽550001；2.貴州省建筑醫(yī)院，貴州貴陽550001）

目的：建立復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑制備工藝。方法：采用正交試驗(yàn)法，對復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑制備工藝進(jìn)行研究，以其有效成分反丁烯二酸的提取量為考察指標(biāo)，對浸泡時(shí)間、煎煮次數(shù)、溶劑用量、提取時(shí)間等主要影響因素進(jìn)行考察，篩選最佳提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝參數(shù)為浸泡1h，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，提取時(shí)間0.5h，煎煮3次。結(jié)論：本產(chǎn)品各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)與工藝優(yōu)選條件相同，且工藝條件穩(wěn)定，說明工藝可行，適合批量生產(chǎn)。

復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑 提取工藝 反丁烯二酸 正交試驗(yàn)

復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑是由處方腫節(jié)風(fēng)、魚腥草等組成，是在貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院五官科長期臨床實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)方基礎(chǔ)上，按照國家第6類中藥新藥的要求研制的新藥，主治急慢性咽炎及扁桃體炎[1]。

原工藝生產(chǎn)可行，質(zhì)量穩(wěn)定，臨床療效確切，但原劑型為湯劑，不能起到局部理療的作用，藥液不能直接到達(dá)患處，因此，將該品改變劑型為合劑（使用前將其霧化），使用方便，起霧效果好。經(jīng)口腔黏膜超聲霧化給藥后，既起到局部理療的作用，又使藥液直達(dá)患處以清熱解毒、抗炎、消腫止痛、潤喉利咽。

本實(shí)驗(yàn)在沿用原工藝路線基礎(chǔ)上，以復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑君藥腫節(jié)風(fēng)有效成分反丁烯二酸的提取量指標(biāo)對工藝進(jìn)行評價(jià)，采用L9（34）正交試驗(yàn)，篩選最佳提取工藝條件，同時(shí)對主要有效成分進(jìn)行定性、定量控制，提高了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以期獲得更好的療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AL204電子分析天平；真空干燥箱；電熱鼓風(fēng)干燥箱；EM-202MS1微波真空干燥機(jī)。

1.2 試藥 反丁烯二酸 （中國藥品生物制品檢定所，批號:1541-200001）；乙腈為色譜純 （江蘇漢邦）；娃哈哈純凈水；磷酸、乙醇均為分析純；液相用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 指標(biāo)選擇 為了使工藝能充分反映藥物療效，并結(jié)合本方藥物組成的特點(diǎn)及功能主治，以本方中腫節(jié)風(fēng)的有效成分反丁烯二酸的提取量為考察指標(biāo)對工藝進(jìn)行評價(jià)。

2.2 反丁烯二酸含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為 Hypersil ODS2柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相乙腈-0.1%磷酸溶液（2∶98），檢測波長210nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量5μL；流速1.0mL/min，色譜圖見圖1。

圖1 對照品（a）、復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑（b）的HPLC圖

2.2.2 供試品溶液的制備 按1/45處方量取藥材39g，精密稱定，加8倍量水煎煮3次，每次煎煮0.5h，藥液用200目濾布過濾后，定容到100mL，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加蒸餾水至刻度，定容，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密稱取反丁烯二酸對照品適量，置10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超聲，搖勻，即得2.49μg/mL的對照品溶液。

2.3 提取工藝優(yōu)化

2.3.1 單因素考察

2.3.1.1 藥材吸水率的測定 按1/10處方量稱取藥材（魚腥草除外）175g，加10倍量水浸泡，浸泡不同時(shí)間，濾過，稱濕藥重量（至藥材重量不再增加為止），測定藥材吸水率。結(jié)果見表1?？梢娝幉奈蕿?10%，為方便操作，以吸水率為200%計(jì)算，即藥材吸水量為藥材重的2.0倍。因此首次水提時(shí)應(yīng)該多加2.0倍量的水。

表1 藥材吸水率考察

2.3.1.2 浸泡時(shí)間的考察 稱取魚腥草藥材8份，每份250g，剪碎，分別裝入水蒸氣蒸餾裝置中，各自加入10倍量水，浸泡0、1、3、5h，于水沸后6h收集餾出液，將收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去溶劑，即可得深黃色精油。用電子天平稱重精油，計(jì)算產(chǎn)率，結(jié)果見表2。單因素方差分析結(jié)果表明，P＜0.05，說明不同的浸泡時(shí)間揮發(fā)油提取率有顯著性差異，而浸泡1、3、5h之間揮發(fā)油提取率無顯著性差異，因此根據(jù)節(jié)約時(shí)間及成本的需要，選用浸泡時(shí)間為1h。

表2 魚腥草浸泡時(shí)間考察

2.3.1.3 提取時(shí)間的考察 稱取魚腥草藥材8份，每份250g，剪碎，分別裝入水蒸氣蒸餾裝置中，各自加入10倍量水，浸泡1h，于水沸后2、4、6、8h收集餾出液，將收集到的混合液倒入分液漏斗，加入一定量的石油醚萃取，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去溶劑，即可得深黃色精油。用電子天平稱重精油，計(jì)算產(chǎn)率，結(jié)果見表3。單因素方差分析結(jié)果表明，P＜0.05，說明不同的提取時(shí)間揮發(fā)油提取率有顯著性差異；6h的提取率遠(yuǎn)大于2、4h，6h與8h之間提取率無顯著性差異。因此，為節(jié)約成本起見，選用提取時(shí)間為6h。

表3 魚腥草提取時(shí)間考察

2.3.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)單因素考查結(jié)果，本試驗(yàn)以溶劑用量（A）、煎煮次數(shù)（B）、煎煮時(shí)間（C）為考察因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，每次試驗(yàn)平行3份，篩選最佳工藝條件，因素水平見表4，正交試驗(yàn)結(jié)果見表5，主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)見表6。從表6的結(jié)果分析得知，各因素作用主次為B＞A＞C，B因素有顯著性差異，且因素B中B3＞B2＞B1，則應(yīng)選擇B3為水提工藝條件參數(shù)；其他A、C均無顯著性差異，且A3＞A2＞A1，C3＞C1＞C2，但結(jié)合大生產(chǎn)實(shí)際，無顯著性差異的A、C因素應(yīng)選擇A1、C1為水提工藝條件，故選擇水提工藝A1B3C1，即煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。

表4 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平

表5 煎煮工藝條件L9（34）正交試驗(yàn)安排及結(jié)果

表6 主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)表（因變數(shù)：總固體物得率）

2.3.3 優(yōu)化工藝的驗(yàn)證 對優(yōu)選的工藝進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表7，按條件A1B2C1進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)。結(jié)果可見，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交結(jié)果相一致，說明此水提工藝條件基本穩(wěn)定。

表7 正交結(jié)果驗(yàn)證

3 結(jié)語

結(jié)合腫節(jié)風(fēng)、魚腥草等的有效成分、藥理學(xué)的研究、臨床應(yīng)用及功能主治的特色，腫節(jié)風(fēng)在本方中用水提取是合理的。

在沿用原工藝路線的基礎(chǔ)上，為提高復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑藥物利用率，將原劑型湯劑改變?yōu)楹蟿瑫r(shí)，為了提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)對原工藝進(jìn)行驗(yàn)證、細(xì)化，對主要有效成分進(jìn)行定性、定量控制，以期獲得更好的療效。本研究以復(fù)方腫節(jié)風(fēng)合劑中反丁烯二酸的含量為考察指標(biāo)，考察了最佳水提工藝。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取溶劑倍量、提取時(shí)間、煎煮次數(shù)進(jìn)行正交試驗(yàn)，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化，確定最佳提取工藝為浸泡1h，煎煮3次，第1次加8倍量水（扣除藥材吸水），第2、3次加6倍量水，每次提取0.5h。本試驗(yàn)優(yōu)化的工藝簡便、重復(fù)性好，其各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)與工藝優(yōu)選條件相同，且工藝條件穩(wěn)定，說明工藝可行，適合批量生產(chǎn)。

[1] 李松林，崔熙，喬傳卓，等.五種金粟蘭屬植物揮發(fā)油成分及其抗真菌活性研究.中藥材，1992，15（7）：28

R289.5

A

1672-397X（2015）06-0061-03

袁榮獻(xiàn)（1972—），女，本科學(xué)歷，副主任藥劑師，主要從事藥劑學(xué)研究。

曾真，碩士。yuanrongxianyr@163.com

2014-11-04

編輯：吳 寧

貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)課題研究資助項(xiàng)目（QZYY2011-26）；貴陽中醫(yī)學(xué)院科研項(xiàng)目（貴中醫(yī)科院內(nèi)[201204]號）