豬流行性腹瀉免疫臨床效果評估

蔣家霞 林昌華 韓定角 王艷午 李宇 韋秋艷

（1，廣西農(nóng)墾永新畜牧集團新興有限公司 545112；2，廣西職業(yè)技術(shù)學(xué)院 530226；3，廣西農(nóng)墾永新畜牧集團西江有限公司 537100）

豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea,PED），是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的，以腹瀉癥狀為主的高度接觸性傳染病，會發(fā)生急性腹瀉、嘔吐、脫水、厭食、精神沉郁等臨床癥狀，哺乳仔豬死亡率高[1]。全球豬流行性腹瀉病毒分為兩群，一群是經(jīng)典PEDV 毒株，另一群是新型PEDV 毒株，新型PEDV 毒株進一步分為“non-S INDEL”（主要為高致病性）和“S INDEL”亞群[2]；疫苗免疫接種是防控豬流行性腹瀉最主要手段，目前商品化疫苗主要有滅活疫苗和弱毒疫苗[3]。在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，特別是在冬季，溫度變化大，豬舍保溫措施跟不上，很容易爆發(fā)該病，診治不及時可造成大量仔豬脫水死亡，給養(yǎng)殖戶造成巨大經(jīng)濟損失。因此，豬流行性腹瀉免疫效果評估對該病防控具有較大意義，可直接控制仔豬死亡，促進生豬健康養(yǎng)殖。

1 材料和方法

1.1 主要試劑

Baypure 通用型磁珠法病毒DNA/RNA 快速提取試劑盒購自廣州灣區(qū)生物科技有限公司；豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬德爾塔冠狀病毒（PDCV）三重?zé)晒釸T-PCR 檢測試劑盒和豬輪狀病毒（ABC亞型）分型熒光RT-PCR 檢測試劑盒，均購自上海麥諾迪生物科技有限公司；豬流行性腹瀉豬傳染性胃腸炎二聯(lián)弱毒疫苗（簡稱腹瀉二聯(lián)疫苗）購自某生物工程有限公司。

1.2 主要設(shè)備

全自動核酸提取純化儀，品牌型號：北京天根TGuide；熒光定量PCR 儀，品牌型號：瑞士羅氏LightCycler96。

1.3 樣品采集和處理

采集糞便拭子：將2 根棉簽蘸取患病仔豬糞便，浸入含有1ml 生理鹽水的采樣管中，掰斷棉簽，蓋好蓋子。56℃水浴30min 進行滅活。3000r/min 離心3min，取上清液進行核酸提取。

1.4 試驗設(shè)計

采集發(fā)生腹瀉的仔豬糞便拭子樣品，經(jīng)過臨床診斷和實驗室診斷來確診仔豬發(fā)生豬流行性腹瀉疾病；以發(fā)生豬流行性腹瀉豬場為試驗對象，豬場發(fā)生腹瀉后免疫腹瀉二聯(lián)疫苗，妊娠100 日齡母豬后還需免疫，1.5 份/頭，其他母豬包括后備母豬肌肉注射免疫1.5 份/頭；2 周后二免，操作按照一免執(zhí)行；觀察統(tǒng)計免疫前1～10d、免疫后1～10d，免疫后11～20d 哺乳仔豬日均死亡率變化情況，并進行顯著性分析，評估疫苗免疫臨床效果。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析

采用SPSS 17.0 軟件分析數(shù)據(jù)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。＜0.05 表示差異顯著，＜0.01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果和分析

2.1 臨床診斷

哺乳仔豬發(fā)生嘔吐、腹瀉、拉黃色糞便、厭食、脫水、精神不振（見圖1）。剛出生仔豬出現(xiàn)腹瀉急性脫水死亡，每日新增病例加大，發(fā)病率達(dá)80%，隨后日死亡率異常增加。臨床上與傳染性胃腸炎、輪狀病毒等具有很多共同特征，難以鑒別，需進一步進行實驗室診斷。

圖1 臨床癥狀（腹瀉脫水）

2.2 實驗室診斷

采集糞便拭子經(jīng)過處理后，使用全自動核酸提取純化儀進行核酸提取，使用豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV 標(biāo)記FAM）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV 標(biāo)記HEX/VIC）、豬德爾塔冠狀病毒（PDCV 標(biāo)記Cy5）三重?zé)晒釸T-PCR 檢測試劑盒和豬輪狀病毒（RV-A 型標(biāo)記FAM、RV-B 型標(biāo)記HEX/VIC、RV-C 型標(biāo)記Cy5）分型熒光RT-PCR 檢測試劑盒，對提取的核酸產(chǎn)物進行熒光RT-PCR 檢測，檢測仔豬病毒性腹瀉常見病原：豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎、豬德爾塔冠狀病毒、豬輪狀病毒。

結(jié)果顯示：豬流行性腹瀉病毒陽性（Ct 值22.56），豬傳染性胃腸炎、豬德爾塔冠狀病毒、豬輪狀病毒均為陰性（見圖2～3）。

圖2 TGEV/PEDV/PDCV/RV-A/B/C 熒光RT-PCR 檢測結(jié)果

2.3 疫苗免疫臨床效果

2.3.1 免疫前后哺乳仔豬日死亡率變化情況

仔豬發(fā)生豬流行性腹瀉后對母豬使用腹瀉二聯(lián)疫苗進行免疫，由于疫苗免疫產(chǎn)生抗體需要一定時間，試驗統(tǒng)計3 個發(fā)生流行性腹瀉豬場免疫前后哺乳仔豬日死亡率變化情況（圖4），結(jié)果表明，3 個發(fā)生豬流行性腹瀉的豬場免疫前后仔豬日死亡率先升高后降低，最高日死亡率分別為7.05、11.43%、3.91%；哺乳仔豬發(fā)生流行性腹瀉后死亡率會急劇升高、母豬免疫疫苗后，哺乳仔豬被動免疫獲得抗體，日死亡率迅速下降，說明疫苗免疫豬流行性腹瀉具有良好效果。

圖4 免疫前后哺乳仔豬日死亡率變化情況

2.3.2 免疫前后哺乳仔豬日均死亡率顯著性分析

圖3 TGEV/PEDV/PDCV/RV-A/B/C 熒光RT-PCR 檢測結(jié)果

試驗統(tǒng)計3 個發(fā)生豬流行性腹瀉的豬場免疫前1～10d、免疫后1～10d、免疫后11～20d 哺乳仔豬日均死亡率，結(jié)果顯示，免疫后1～10d 日均死亡率顯著高于免疫前1～10d（=0.040），免疫后11～20d 日均死亡率明顯低于免疫后日均死亡率1～10d（=0.077）；由于發(fā)病后才緊急免疫疫苗，疫苗產(chǎn)生抗體需要時間，因此，免疫后出現(xiàn)死亡高峰，免疫后1～10d 和免疫后11～20d 雖然沒有顯著性差異（參見附表），但日均死亡率明顯降低，說明疫苗起到了比較好的保護效果。

附表 3 個場免疫前后哺乳仔豬日均死亡率顯著性分析（單位：%）

3 討論

所有日齡豬都會感染豬流行性腹瀉，但死亡率高主要是1 周齡內(nèi)的仔豬，由于腸道疾病保護力主要取決于腸黏膜sIgA 抗體，因此，防控仔豬豬流行性腹瀉最關(guān)鍵的還是仔豬通過初乳獲得母源抗體，特別是中和抗體和sIgA 抗體[2]。

返飼是通過妊娠母豬接觸PEDV 病毒，激活腸道-乳腺-sIgA 軸，刺激母豬產(chǎn)生乳源性免疫，可減輕仔豬臨床癥狀，縮短臨床發(fā)病期；但存在的其他病原也可通過返飼傳播，尤其在非洲豬瘟防控前提下，返飼會增加疫病爆發(fā)風(fēng)險。因此，豬流行性腹瀉防控比較有效的方法仍是接種疫苗，通過對妊娠100日齡母豬進行跟胎免疫，使仔豬獲得母源抗體來抵抗豬流行性腹瀉病毒的感染。目前，市場上豬流行性腹瀉疫苗種類較多，經(jīng)典PEDV 疫苗并不能保護豬對高致病性non-S INDEL PEDV的感染，且并不是所有接種疫苗的母豬都能產(chǎn)生保護性的乳源性免疫[2]，因此，臨床上并不是所有疫苗對本場發(fā)生的豬流行性腹瀉都有效果，需根據(jù)本場情況評估選擇。

豬場在秋冬季來臨時需做好各項預(yù)防措施，才能更好地防控腹瀉疾病發(fā)生。

（1）提供適宜環(huán)境。做好防寒保暖工作，準(zhǔn)備保溫?zé)?、保溫板、燈線、保溫箱等物資，通過調(diào)節(jié)保溫和通風(fēng)設(shè)施控制保溫區(qū)的溫度；使用干燥粉保持仔豬身體干燥；產(chǎn)房每批次豬出完后盡快清洗消毒，空欄7d 以上，為下批仔豬提供一個更干凈環(huán)境。

（2）強化產(chǎn)房飼養(yǎng)管理。仔豬分娩護理，按照“一擦二斷三保溫四初乳五記錄六寄養(yǎng)”工作要求；仔豬做好固定奶頭、保健及教槽工作；母豬保健防子宮炎，飼喂充足防掉膘嚴(yán)重。

（3）疫苗免疫接種。使用腹瀉疫苗，秋冬季母豬普免1 月后，妊娠100 日齡母豬跟胎免疫。

（4）仔豬腹瀉治療。原則補液、防脫水、緩解酸中毒，防繼發(fā)細(xì)菌感染，對癥治療。細(xì)菌感染可選用抗生素治療，如阿莫西林克拉維酸鉀、水溶性土霉素粉、硫酸粘菌素、恩諾沙星等；使用吸附劑減緩腹瀉癥狀，如蒙脫石、高嶺土等；及時補液防急性脫水死亡，如葡萄糖鹽水、小蘇打；用酸化劑調(diào)節(jié)腸胃，如巧妙酸。

4 結(jié)論

綜上所述，提前做好防寒保暖措施，選擇合適的疫苗對母豬進行免疫接種，強化產(chǎn)房飼養(yǎng)管理措施，及時關(guān)注豬舍環(huán)境變化和仔豬腹瀉情況，發(fā)現(xiàn)仔豬零星拉稀及時采取有效措施進行治療，若出現(xiàn)發(fā)病率高傳染性強的腹瀉，及時進行實驗室診斷，結(jié)合豬場實際采取相應(yīng)措施，防止仔豬因豬流行性腹瀉而產(chǎn)生大規(guī)模死亡，造成巨大的經(jīng)濟損失。