防風(fēng)藥材HPLC特征圖譜的研究

楊 穎，于翠霞

（1.吉林省吉測(cè)檢測(cè)技術(shù)有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.國(guó)藥控股吉林有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130012）

防風(fēng)藥材HPLC特征圖譜的研究

楊 穎1，于翠霞2

（1.吉林省吉測(cè)檢測(cè)技術(shù)有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.國(guó)藥控股吉林有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130012）

目的建立防風(fēng)藥材HPLC特征圖譜的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。方法色譜柱：Agilent HC C18（250×4.6mm，5μ）；甲醇-水（45：55）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；柱溫35℃。結(jié)果所建立的特征圖譜信息豐富，4種色原酮類成分重復(fù)性和穩(wěn)定性都較好。結(jié)論本研究建立的防風(fēng)藥材的特征圖譜特征性和專屬性強(qiáng)，且方法快速、簡(jiǎn)便、可靠，可用于全面控制市場(chǎng)流通防風(fēng)藥材的質(zhì)量。

防風(fēng)藥材；HPLC；特征圖譜

中藥特征圖譜技術(shù)方便可靠，是一種科學(xué)、新型、理想的中藥鑒定方法。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)防風(fēng)藥材進(jìn)行特征圖譜研究，為更好地對(duì)防風(fēng)藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

LC-2010AHT高效液相色譜儀；試劑：水為超純水，甲醇（德國(guó)默克，色譜級(jí)）；對(duì)照品：5-O-甲基維斯阿米醇苷（111523-200405）、亥矛酚苷（111714-200501）、升麻素（111710-200602）、升麻素苷（111522-200406），均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。防風(fēng)藥材樣品產(chǎn)地：遼寧。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

固定相：Agilent HC C18色譜柱（5μ，250×4.6mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（45：55）；流速：1.0mL/min

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液.

取5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品、亥茅酚苷對(duì)照品、升麻素對(duì)照品、升麻素苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1mL約含5-O-甲基維斯阿米醇苷90μg、亥茅酚90μg升麻素70μg、升麻素苷50μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液

取防風(fēng)藥材5g進(jìn)行粉碎，取混勻的細(xì)粉約0.25g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，帶瓶稱定并記錄重量，水浴加熱回流提取2小時(shí)，放冷至室溫，瓶外壁擦拭干凈，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm濾頭濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液及甲醇（陰性空白）各5μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明其它成分無(wú)干擾，本方法專屬性較好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算供試品中與4個(gè)對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰的保留時(shí)間，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD（%）小于1.0%，結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，設(shè)置儀器分別在0、4、8、16、24小時(shí)自動(dòng)采樣，照正文方法測(cè)定，按保留時(shí)間計(jì)算，結(jié)果未發(fā)生明顯變化，穩(wěn)定性良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一供試品6份，依法獨(dú)立測(cè)定，計(jì)算供試品中與4個(gè)對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰的保留時(shí)間，各特征峰保留時(shí)間的RSD（%）均小于1%，結(jié)果表明，本法的重現(xiàn)性良好。

3 討 論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取供試品溶液2μL，注入液相色譜儀，分別在254nm、270nm、280nm、300nm、320nm進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果在254nm波長(zhǎng)下，給出信息最多，各色譜峰信號(hào)最強(qiáng)，故選取254nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇

參照中國(guó)藥典2010年版一部“防風(fēng)”含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，以甲醇：水（40：60）為流動(dòng)相，流速0.8mL/min，亥矛酚苷色譜峰保留時(shí)間太長(zhǎng)，故將流動(dòng)相比例調(diào)整為甲醇：水（45：55），流速0.8mL/min，對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間適當(dāng)，供試品色譜峰分離度良好。等度洗脫，采集時(shí)間100min，40min以后未出現(xiàn)其它特征峰。故采用甲醇-水（45：55）為本法的流動(dòng)相。

3.3 色譜柱的選擇

本文比較了Agilent HC C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）、Luna C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）和Shiseido色譜柱（4.6×250mm，5μm），三種色譜柱均滿足本方法系統(tǒng)適用性的要求。表明本實(shí)驗(yàn)?zāi)陀眯暂^好。

[1] 中國(guó)藥典2010年版一部.

[2] 不同產(chǎn)地防風(fēng)中4種色原酮成分比較研究中草藥第38卷第5期2007年5月.

[3] 防風(fēng)的研究進(jìn)展中國(guó)藥業(yè) 2006第15卷第10期.

R931.5

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ISSN.2095-8242.2017.050.9877.01

本文編輯：趙小龍