B族鏈球菌基因cpsG抑制人類宮頸癌細(xì)胞增殖的研究

李艷娜， 支 恒， 王莘童， 蘇順海， 徐 磊

(同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院，上海 200092)

宮頸癌是世界上女性第二大常見惡性腫瘤，也是導(dǎo)致女性癌癥死亡的主要原因之一[1]。宮頸癌及其相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究尚待進(jìn)一步深入。近年來，靶向治療宮頸癌顯示出前所未有的優(yōu)勢。為了改善宮頸癌患者的預(yù)后，仍然迫切需要開發(fā)更有前景的治療靶點(diǎn)[2]。B族鏈球菌(Group B streptococcus, GBS)是嚴(yán)重的新生兒感染的主要原因。GBS是一種人體內(nèi)的機(jī)會(huì)致病菌，是腸道和陰道正常菌群的一部分，母體定植是GBS傳播的主要途徑。目前，已確認(rèn)的血清型多達(dá)10種(Ⅰa、Ⅰb和Ⅱ～Ⅸ)[3]。GBS經(jīng)常寄生于孕婦，并可在嬰幼兒中引起敗血癥和腦膜炎。如果通過母親免疫來預(yù)防定植，可能會(huì)減少圍產(chǎn)期GBS引起的相關(guān)疾病。B族鏈球菌莢膜多糖(capsular polysaccharide, CPS)是一種重要的毒力因子，也用于GBS分型。所有合成CPS所需的基因都在B族鏈球菌CPS操縱子上，其中包含一個(gè)高度可變的cps決定區(qū)域(cpsG-cpsK)。研究表明，GBS能釋放毒素導(dǎo)致宮頸炎癥發(fā)生等，但是GBS中每個(gè)基因如何對宮頸細(xì)胞發(fā)揮確切作用尚不清楚。GBS感染細(xì)胞后，GBS的基因組暴露在細(xì)胞中，并利用細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄翻譯機(jī)器觸發(fā)GBS相關(guān)基因的表達(dá)并發(fā)揮獨(dú)立的作用[4]。然而目前尚未有B族鏈球菌相關(guān)基因cpsG與人類癌癥發(fā)生相關(guān)的報(bào)道。本研究將GBS的關(guān)鍵基因cpsG的表達(dá)序列構(gòu)建到慢病毒中，將慢病毒感染人類宮頸癌細(xì)胞，使得cpsG在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)，通過體外生長以及高通量RNA測序探索cpsG影響人類宮頸癌細(xì)胞某些轉(zhuǎn)錄組功能的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞

人類宮頸癌細(xì)胞(HPV18+)購自中科院上海細(xì)胞所。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清(FBS)、DMEM液體培養(yǎng)基、PBS、胰酶購自上海欲立生物科技有限公司；rLV-cpsG-HA-ZsGreen慢病毒和rLV-ZsGreen對照慢病毒購自武漢維諾賽生物技術(shù)有限公司；嘌呤霉素、增強(qiáng)型CCK-8試劑盒；抗HA抗體(51064-2-AP)購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；RNA測序由北京諾禾致源科技股份有限公司完成；引物由蘇州金唯智生物科技有限公司合成；PAGE凝膠快速制備試劑盒購自上海雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司；通用型ECL發(fā)光底物試劑盒購自上海圣爾生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 人類宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng) 將HPV18+培養(yǎng)于含10%FBS的DMEM完全培養(yǎng)基中，且在飽和濕度以及含5%CO2和37 ℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。每隔3 d進(jìn)行1次換液。

1.3.2 慢病毒感染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建 胰酶消化處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照要求進(jìn)行慢病毒感染，48 h后更換培養(yǎng)液。1周后采用嘌呤霉素(3 mg/L)持續(xù)篩選，最后用進(jìn)行qRT-PCR和Western印跡法檢測感染效率。

1.3.3 提取細(xì)胞總RNA進(jìn)行RT-PCR 提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行PCR反應(yīng)，以β-actin為內(nèi)參基因，反應(yīng)條件: 94 ℃ 3 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，72 ℃ 10 min，39個(gè)循環(huán)。引物序列如下。cpsG P1: 5′-GGACACATGAACAGCAGTTC-3′；cpsG P2: 5′-TTTCAACGCTTCCGCAAGTC-3′。

1.3.4 Western印跡法檢測 取離心后的細(xì)胞，加入RIPA裂解液冰上放置30 min，待細(xì)胞完全裂解后，12 000 r/min，離心半徑650 mm，4 ℃離心20 min。將提取的蛋白質(zhì)溶液加入蛋白上樣緩沖液100 ℃加熱10 min進(jìn)行變性。12%SDS-PAGE電泳1.5 h，使用PVDF膜轉(zhuǎn)膜20 min，用含10%脫脂奶粉的TBST 37 ℃封閉2 h，一抗HA 1∶1 500，β-actin 1∶2 000，4 ℃ 孵育過夜，TBST洗滌3次，每次5 min，二抗1∶3 000，37 ℃ 2 h，TBST洗滌3次，每次5 min，用ECL進(jìn)行發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行拍照。

1.3.5 CCK8檢測 分別取對照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞，接種于96孔板中，每孔接種3×103個(gè)細(xì)胞，設(shè)置4行平行復(fù)孔，分別于第0、1、2、3天每孔加入CCK8溶液10 μL；5%CO2，37 ℃孵育4 h后，在多功能酶標(biāo)儀檢測450 nm波長處的光密度(D450)數(shù)值。

1.3.6 集落形成實(shí)驗(yàn) 分別取對照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞，接種于6孔板中，每孔300個(gè)細(xì)胞，設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)2周后，棄培養(yǎng)液，用PBS沖洗1次，棄上清液，最后每孔加用0.5%結(jié)晶紫染色，在搖床上放置，50～60 r/min，2～3 h后棄上清液，水洗，晾干后拍照計(jì)數(shù)。

1.3.7 RNA測序 提取細(xì)胞總RNA，通過電泳鑒定RNA的完整性，由北京諾禾致源科技股份有限公司進(jìn)行RNA測序，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 過表達(dá)cpsG基因的穩(wěn)定細(xì)胞系的篩選

為了研究cpsG對人類宮頸癌細(xì)胞的影響，通過人工合成的方法將cpsG的讀碼框序列(ORF)融合HA標(biāo)簽連接到質(zhì)粒pLVX-mCMV-ZsGreen的限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和BamHⅠ之間。將質(zhì)粒進(jìn)行酶切和瓊脂糖電泳鑒定，證明質(zhì)粒中插入了cpsG-HA。最后通過測序證明質(zhì)粒中插入了正確的cpsG-HA，提示成功構(gòu)建了pLVX-cpsG-HA-mCMV-ZsGreen質(zhì)粒。將pLVX-cpsG-HA-mCMV-ZsGreen質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，24 h后HEK293細(xì)胞能成功表達(dá)綠色熒光蛋白。進(jìn)一步利用HEK293細(xì)胞制備慢病毒rLV-cpsG-HA-ZsGreen： 將1 μL rLV-cpsG-HA-ZsGreen慢病毒感染HEK293細(xì)胞72 h 后能表達(dá)綠色熒光蛋白。提示成功制備了過表達(dá)cpsG的慢病毒。將慢病毒rLV-cpsG-HA-ZsGreen感染人類宮頸癌細(xì)胞，用嘌呤霉素篩選，并在熒光顯微鏡下挑取表達(dá)GFP的單克隆細(xì)胞，并擴(kuò)大培養(yǎng)(圖1A)。然后提取細(xì)胞的總RNA，RT-PCR結(jié)果顯示: 與rLV對照組相比，rLV-cpsG組產(chǎn)生了過量的cpsG-HA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(圖1B)。提取2組細(xì)胞的總蛋白，進(jìn)行Western印跡法檢測，結(jié)果顯示與rLV對照組相比，rLV-cpsG組產(chǎn)生了過量的cpsG-HA融合蛋白(圖1C)。上述結(jié)果提示，成功構(gòu)建了過表達(dá)cpsG的穩(wěn)定細(xì)胞系。

圖1 過表達(dá)cpsG的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選Fig.1 Screening of stable cell lines overexpressing cpsGA: rLV-cpsG-HA-ZsGreen慢病毒感染人類宮頸癌細(xì)胞(×100)；B: RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果；C: Western印跡法結(jié)果

2.2 cpsG基因抑制人類宮頸癌細(xì)胞體外生長

為了探討cpsG基因?qū)θ祟悓m頸癌細(xì)胞體外生長的影響，對上述的穩(wěn)定細(xì)胞系進(jìn)行生長曲線和集落形成能力分析。首先，利用CCK8的方法對細(xì)胞增殖能力進(jìn)行測定，2組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，顯示cpsG能夠抑制細(xì)胞的體外增殖能力，見圖2。細(xì)胞平板集落形成能力測定，將每組的300個(gè)細(xì)胞分別接種到六孔板，每組3個(gè)復(fù)孔，10 d后用結(jié)晶紫染色，并進(jìn)行計(jì)數(shù)分析。結(jié)果顯示: rLV組的平板集落形成率為(41.1±3.57)%，rLV-cpsG組的平板集落形成率為(15.77±2.157)%，2組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(41.1±3.57)%vs(15.77±2.157)%，P=0.001 2]，顯示cpsG抑制了細(xì)胞的集落形成能力。上述結(jié)果提示cpsG基因抑制人類宮頸癌細(xì)胞體外生長。

圖2 cpsG基因抑制人類宮頸癌細(xì)胞體外生長分析Fig.2 Inhibition of human cervical cancer cell growth by cpsG gene in vitro*P<0.05，**P<0.01

2.3 cpsG改變了人類宮頸癌細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)錄能力

為了研究cpsG對人類宮頸癌細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄能力的影響，本研究提取2組細(xì)胞的總RNA進(jìn)行電泳分析和Agilent5400峰圖分析，顯示完整的28 S、18 S、5 S。然后進(jìn)行了高通量RNA測序分析。對兩個(gè)樣本分別進(jìn)行基因表達(dá)水平的定量分析，包括基因表達(dá)分布，計(jì)算各樣本所有基因的表達(dá)值(FPKM)后，通過盒形圖展示不同樣本基因表達(dá)水平的分布情況，見圖3A。樣本間的相關(guān)性分析顯示皮爾遜相關(guān)系數(shù)的平方(R2)為0.854(R2>0.8)，見圖3B?；虻拿芏确植挤治鲲@示2組的基因分布密度是有差異的，見圖3C、3D。在rLV組和rLV-cpsG組中，差異基因韋恩圖顯示1 276個(gè)基因僅出現(xiàn)在rLV組，931個(gè)基因僅出現(xiàn)在rLV-cpsG組，11 596個(gè)基因在2組中都出現(xiàn)(圖4A)。差異基因數(shù)目統(tǒng)計(jì)分析(圖4B)、火山圖分析(圖4C)顯示2組中上調(diào)基因有490個(gè)，下調(diào)基因有1 195個(gè)，22 257個(gè)基因無顯著變化。上述結(jié)果提示cpsG改變了人類宮頸癌細(xì)胞中部分基因的轉(zhuǎn)錄水平。

圖3 基因表達(dá)水平的定量分析Fig.3 Quantitative analysis of gene expression levelA: 樣本基因表達(dá)量分布盒形圖；B: 樣本間相關(guān)性熱圖；C: FPKM密度分布；D: FPKM分布violin圖

圖4 基因差異分析Fig.4 Analysis of gene differencesA: 差異基因韋恩圖，韋恩圖中圈內(nèi)所有數(shù)字之和代表該比較組合差異基因總數(shù)，重疊區(qū)域表示組合間共有的差異基因個(gè)數(shù)，不同的顏色表示不同的比較組合；B: 差異基因數(shù)目統(tǒng)計(jì)柱狀圖；藍(lán)色和灰色分別表示上調(diào)和下調(diào)的差異基因，柱子上的數(shù)字表示差異基因數(shù)目；C: 差異基因的火山圖

2.4 cpsG改變了人類宮頸癌細(xì)胞的基因功能

既然cpsG改變了人類宮頸癌細(xì)胞部分基因轉(zhuǎn)錄能力，將進(jìn)一步分析cpsG對人類宮頸癌細(xì)胞中相關(guān)基因功能的影響，包括基因本體論(GO)分析、京都基因和基因組百科全書(KEGG)分析。GO富集分析結(jié)果顯示: 與rLV對照組相比，rLV-cpsG組中重要的下調(diào)GO、BP、CC和MF；重要的上調(diào)的GO、BP、CC和MF見圖5。提示cpsG基因影響了人類宮頸癌細(xì)胞中基因的GO功能。

KEGG分析顯示: 與rLV對照組相比，rLV-cpsG組中有顯著意義的下調(diào)的KEGG通路見圖5A；有顯著意義的重要的上調(diào)的KEGG通路見圖6。結(jié)果提示cpsG影響了人類宮頸癌細(xì)胞中一些基因的KEGG通路。

圖5 基因功能富集分析Fig.5 Enrichment analysis of gene functionA: GO富集分析散點(diǎn)圖，橫坐標(biāo)為注釋到GO Term上的差異基因數(shù)與差異基因總數(shù)的比值，縱坐標(biāo)為GO Term，點(diǎn)的大小代表注釋到GO Term上的基因數(shù)，顏色從紅到紫代表富集的顯著性大小，a: 下調(diào)，b: 上調(diào)。B: GO富集分析柱狀圖。橫坐標(biāo)為GO Term，縱坐標(biāo)為GO Term富集的顯著性平，用-log10(padj)表示，BP: 生物過程；CC: 細(xì)胞組分；MF: 分子功能；a: 下調(diào)，b: 上調(diào)

圖6 KEGG富集分析柱狀圖Fig.6 KEGG analysis橫坐標(biāo)為KEGG通路，縱坐標(biāo)為通路富集的顯著性水平；A: 下調(diào)，B: 上調(diào)

2.5 cpsG調(diào)控了人類宮頸癌細(xì)胞基因的融合

融合基因分析顯示，rLV組中融合基因包括MT-ATP6-MT-ATP8、B3GAT3-MT-ATP8、KANSLI-ARL17B、GALNTI-CCBE1、GNB1-NADK，見圖7A。rLV-cpsG組中融合基因包括MT-ATP6-MT-ATP8、GALNT1-CCBE1、GNB1-NADK、B3GAT3-GANAB、LEPROT-LEPR，見圖7B。其中MT-ATP6-MT-ATP8、GALNT1-CCBE1、GNB1-NADK、SREBF2-MEI1、HN-RNPUL2-C11orf49既出現(xiàn)在rLV對照組中，又出現(xiàn)在rLV-cpsG組中；結(jié)果提示cpsG改變了人類宮頸癌細(xì)胞的部分基因的功能。

圖7 融合基因circos圖分析Fig.7 Circos plot analysis of fusion geneA: 對照組；B: rLV-cpsG組

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)B族鏈球菌相關(guān)基因cpsG能夠抑制人類宮頸癌細(xì)胞的增殖能力，揭示cpsG可能與細(xì)胞中部分基因的轉(zhuǎn)錄組學(xué)改變有關(guān)。

3.1 cpsG基因與人類宮頸癌發(fā)生呈負(fù)相關(guān)

本研究結(jié)果提示cpsG基因能夠顯著抑制人類宮頸癌細(xì)胞體外生長能力，細(xì)胞生長曲線的測定和細(xì)胞集落形成能力測定證實(shí)這一結(jié)論。cps是一種重要的毒力因子，也可用于GBS分型[4]。盡管cpsG主要與一些侵襲性疾病有關(guān)[3]，然而目前尚未有關(guān)于B族鏈球菌相關(guān)基因cpsG與人類癌癥相關(guān)的報(bào)道，本研究證實(shí)了cpsG能夠抑制宮頸癌細(xì)胞增殖能力，推測cpsG可能通過改變一些腫瘤相關(guān)基因的功能和信號通路，從而抑制人類宮頸癌細(xì)胞的進(jìn)展。

3.2 cpsG改變了人類宮頸癌細(xì)胞中基因的轉(zhuǎn)錄能力

本研究通過高通量RNA測序技術(shù)，發(fā)現(xiàn)cpsG能夠調(diào)控人類宮頸癌細(xì)胞部分基因的轉(zhuǎn)錄能力。研究表明，上述cpsG上調(diào)的基因中DSC3、STXBP5L、IGFBP4、FAM107A與腫瘤的發(fā)生有關(guān)[5-8]。DSC3在乳腺癌、前列腺癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞中下調(diào)表達(dá)，特別是DSC3基因的DNA甲基化狀態(tài)是結(jié)直腸癌的預(yù)后標(biāo)志之一[5]，提示在一些腫瘤中DSC3可能是一個(gè)抑癌基因，推測cpsG能夠增強(qiáng)DSC3的表達(dá)而發(fā)揮抑癌作用。研究發(fā)現(xiàn)STXBP5L能形成環(huán)狀的circ-STXBP5L，并且其在小細(xì)胞肺癌中上調(diào)表達(dá)和促進(jìn)小細(xì)胞肺癌的發(fā)生[6]。本研究中cpsG能促進(jìn)STXBP5L的轉(zhuǎn)錄能力，提示STXBP5L可能在cpsG的作用下在宮頸癌細(xì)胞中發(fā)揮相反的作用。研究表明IGFBP4缺失會(huì)加速肺癌和肝癌的發(fā)生[7]，提示IGFBP4是一個(gè)抑癌基因，本研究中cpsG能促進(jìn)IGFBP4的轉(zhuǎn)錄能力，推測cpsG能夠增強(qiáng)IGFBP4的表達(dá)而發(fā)揮抑癌作用。研究發(fā)現(xiàn)FAM107A在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)降低，F(xiàn)AM107A在喉癌細(xì)胞系和原發(fā)腫瘤中完全下調(diào)[8]。本研究中cpsG能夠促進(jìn)FAM107A轉(zhuǎn)錄能力，提示FAM107A在cpsG的作用下抑制宮頸癌細(xì)胞生長。上述推測均有待實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

本研究中發(fā)現(xiàn)的在人類宮頸癌細(xì)胞中能被cpsG下調(diào)的基因KRT6A、KRT17、WFDC2與腫瘤的發(fā)生有關(guān)[9-11]。研究顯示KRT6A促進(jìn)肺癌的增殖和轉(zhuǎn)移[9]。本研究中cpsG能抑制KRT6A在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，提示cpsG可能通過抑制KRT6A的轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮抑癌作用。研究發(fā)現(xiàn)KRT17在宮頸癌細(xì)胞中過表達(dá)[10]。而cpsG能抑制KRT17的轉(zhuǎn)錄能力，提示cpsG可能通過抑制KRT17的轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮抑制宮頸癌細(xì)胞生長的作用。研究發(fā)現(xiàn)WFDC2在卵巢癌中促進(jìn)增殖和轉(zhuǎn)移[11]。本研究中cpsG能抑制WFDC2的轉(zhuǎn)錄能力，提示cpsG可能通過抑制WFDC2的轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮抑癌作用。上述推測均有待實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

3.3 cpsG調(diào)節(jié)了人類宮頸癌細(xì)胞中的一些基因的功能和信號通路

本研究中通過基因本體論(GO)分析和京都基因和基因組百科全書(KEGG)分析清楚地發(fā)現(xiàn)cpsG調(diào)節(jié)了人類宮頸癌細(xì)胞中的一些基因的功能和信號通路。(1) 被cpsG下調(diào)的GO，主要包括G蛋白偶聯(lián)受體活性、上皮細(xì)胞分化、受體配體活性。(2) 被cpsG上調(diào)的GO，主要包括蛋白活化級聯(lián)調(diào)控、Seh1相關(guān)復(fù)合物。(3) 被cpsG下調(diào)的KEGG通路，主要包括PI3K-Akt信號通路、TNF信號通路、NF-kappa B信號通路、RAS信號通路。(4) 被cpsG上調(diào)的KEGG通路，主要包括脂肪酸降解通路、p53信號通路。研究發(fā)現(xiàn)PI3K-Akt信號通路有著廣泛的促癌作用，其在前列腺癌、胃腸道腫瘤、乳腺癌和宮頸癌中調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲,宮頸癌組織中PI3k基因及蛋白水平隨腫瘤惡性程度的增加而升高[12-13]。本研究中發(fā)現(xiàn)cpsG能顯著抑制PI3K-Akt信號通路，提示cpsG可能通過阻礙該通路而起到抑制宮頸癌的發(fā)生。研究表明TNF是一種主要的炎性細(xì)胞因子，具有誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性癌癥快速出血性壞死的能力，TNF-α是乳腺癌患者腫瘤微環(huán)境中發(fā)現(xiàn)的重要促炎細(xì)胞因子之一，在乳腺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中的致瘤作用[14]。而cpsG抑制了TNF通路的活性，提示cpsG可能通過抑制其活性起到抑癌的作用。研究發(fā)現(xiàn)NF-κB信號通路與許多類型的腫瘤有關(guān)，NF-κB是許多基因的轉(zhuǎn)錄因子，也成為各種人類癌癥的主要罪魁禍?zhǔn)?，主要是因?yàn)樗斜Ｗo(hù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞逃逸凋亡的能力[15]。本研究中cpsG抑制了該通路的活性，提示cpsG可能通過抑制其活性起到抑癌作用。研究發(fā)現(xiàn)P53信號通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起抑制作用，p53發(fā)生突變導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和腫瘤進(jìn)展，并加劇癌細(xì)胞的惡性特性[16]。而cpsG上調(diào)該通路，提示cpsG可能通過影響該通路活性起到抑癌作用。cpsG可能通過影響了人類宮頸癌細(xì)胞中一些基因的功能和信號通路而抑制宮頸癌細(xì)胞的生長。待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。

3.4 cpsG通過調(diào)控基因的融合抑制人類宮頸癌細(xì)胞的生長

本研究中融合基因分析提示: (1) 只出現(xiàn)在rLV組中融合基因，包括B3GAT3-ATP8、SLC39A10-SESTD1、TMEM132A-TMEM109。(2) 只出現(xiàn)在rLV-cpsG組中融合基因，包括B3GAT3-GANA、MRPS6-SON、SLC5A3-SON。研究表明融合基因可以導(dǎo)致原來基因功能的喪失，或者增強(qiáng)了原來基因的功能，或者產(chǎn)生了新的基因功能。B3GAT3高表達(dá)與肝癌預(yù)后不良有關(guān)，ATP8突變與乳腺癌發(fā)生相關(guān)[17]，B3GAT3和ATP8形成融合基因后其功能可能被抑制或加強(qiáng)。而cpsG能夠抑制B3GAT3-ATP8融合基因的形成，推測cpsG可能導(dǎo)致B3GAT3-ATP8功能的喪失而抑制宮頸癌細(xì)胞的生長。研究發(fā)現(xiàn)MRPS6蛋白在乳腺癌中過表達(dá)，SON在胰腺癌中過表達(dá)[18]。而cpsG能夠促進(jìn)MRPS6-SON融合基因的形成，推測cpsG可能導(dǎo)致MRPS6-SON原來基因功能的喪失，產(chǎn)生新的功能而抑制宮頸癌細(xì)胞的生長。研究提示cpsG通過調(diào)控基因的融合抑制人類宮頸癌細(xì)胞的生長。

總之，本研究提示cpsG抑制了人類宮頸癌細(xì)胞生長，主要通過上調(diào)DSC3、IGFBP4、PLCL1和下調(diào)KRT6A、KRT17、WFDC2基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制了G蛋白偶聯(lián)受體活性、PI3K-Akt信號通路、TNF信號通路、NF-κB信號通路和激活了脂肪酸降解、p53信號通路。有趣的是，cpsG能影響B(tài)3GAT3-ATP8、LEPROT-LEPR、MRPS6-SON融合基因的形成。本研究為人類宮頸癌的臨床診斷和治療提供了理論依據(jù)。