一種蔬菜中農(nóng)藥殘留快速檢測方法的 分析與評價

◎ 杜 平

（1.陜西省果蔬及加工產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測中心，陜西 眉縣 722301；2.眉縣食品藥品安全檢驗檢測中心，陜西 眉縣 722301）

近年來，蔬菜中農(nóng)藥殘留超標問題已成為人們生活中關(guān)心的熱點話題，引起了政府、公眾和新聞媒介的高度關(guān)注[1]。目前，我國比較常見的農(nóng)藥殘留檢測方法主要有氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用以及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等檢測方法。這些檢測方法均需使用高端設(shè)備，且儀器設(shè)備操作人員必須為專業(yè)的檢驗人員，需要經(jīng)授權(quán)持證上崗。同時，儀器設(shè)備的后期維護和保養(yǎng)成本也較高。速測卡法能在較短的時間內(nèi)快速、準確地檢測蔬菜中的農(nóng)藥殘留含量[2]。本文綜合評價了蔬菜中農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)——速測卡法的靈敏度、特異性、準確度。

1 材料與方法

1.1 實驗樣品

從大型農(nóng)貿(mào)市場、超市和散戶菜地隨機抽取8類21種蔬菜，共75個樣品，蔬菜樣品種類及名稱見表1。

表1 蔬菜樣品種類及名稱表

1.2 儀器與試劑

WT-R01農(nóng)藥殘留速測儀，深圳市安鑫寶科技發(fā)展有限公司；HED-NC06農(nóng)殘快速檢測儀，山東霍爾德電子科技有限公司；Trace 1300氣相色譜儀，配備FPD檢測器，賽默飛世爾科技公司；Ultimate 3000液相色譜儀，配備FLD檢測器，賽默飛世爾科技公司。

甲醇，色譜純；乙腈、丙酮、二氯甲烷，均為分析純；標準品有敵敵畏、滅多威、敵百蟲、氧化樂果、對硫磷、甲胺磷、樂果，均購自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；標準溶液的配制：用磷酸鹽緩沖溶液（pH=7.5）配制成0.1～3.0 mg·kg-1不同濃度的標準系列溶液。

1.3 實驗方法

1.3.1 速測卡法與分光光度比色法靈敏度與特異性比較

（1）樣品的制備。根據(jù)蔬菜樣品，準備50份待檢樣品，20份陰性樣品，30份陽性樣品。根據(jù)各農(nóng)藥的檢出限值，分別對這30份陽性樣品進行加標，具體加標情況為：0.1 mg·kg-15份、0.2 mg·kg-15份、0.8 mg·kg-15 份、1.0 mg·kg-15 份 2.0 mg·kg-15 份 和3.0 mg·kg-15份，組成陽性樣品。

（2）速測卡法。①去除蔬菜表面的污垢，取5.0 g、1 cm大小的樣品放入50 mL燒杯中，之后向燒杯中加入5.0 mL緩沖液，均勻搖晃50次后靜置2 min。②取出速測卡，撕去表面薄膜，將靜置后的溶液滴入白色藥片，2～3滴即可。放入37 ℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，10 min后取出，保持藥片表面濕潤。③對折速測卡，顯色完成后，打開速測儀，將紅白藥片疊合，觀察，白藥片顏色不變?yōu)閺婈栃?、白藥片淺藍色為弱陽性，白藥片天藍色為陰性，每組設(shè)有一個空白實驗。

（3）分光光度比色法。①清除蔬菜樣品表面的泥土，剪成1 cm×1 cm左右大小碎片，稱取1 g樣品放入小燒杯中，加入5.0 mL緩沖液，振蕩2 min，倒出提取液，靜置3 min，備用。②對照溶液測試，于試管中先加入2.5 mL緩沖液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑，搖勻后于37 ℃放置15 min以上。加入0.1 mL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入比色皿中，使用分光光度計在412 nm波長下測定吸光度，記錄反應(yīng)3 min吸光度的變化值ΔA0。③樣品的測定，在試管中加入2.5 mL樣品提取液，其他操作與對照測定相同，記錄反應(yīng)3 min吸光度的變化值ΔAt。利用如下公式計算：

式中：ΔA0為空白溶液吸光度；ΔAt為樣品溶液吸光度；當結(jié)果大于50%時，為陽性，樣品中含有殘留農(nóng)藥；當結(jié)果小于50%時，為陰性，樣品中不含有殘留農(nóng)藥。

1.3.2 速測卡法準確性驗證

按照速測卡法檢測后，采用氣相色譜法與液相色譜法分別對以下參數(shù)進行驗證。將不得使用的甲胺磷、久效磷等和限制使用的特丁硫磷、涕滅威等共11個農(nóng)藥作為檢測項目，有機磷使用氣相色譜法進行驗證，氨基甲酸酯類使用液相色譜法進行驗證。

（1）依據(jù)NY/T 761—2008標準[3]。抽取1 kg蔬菜樣品選取可食部勻漿處理后備用。

（2）氣相色譜儀檢測。取樣品25.0 g，將其與50.0 mL乙腈共同放入離心管中，勻漿2 min后，過濾，將濾液置入100 mL離心管中，并向其中加入7 g NaCl，搖勻，靜置1 h左右。吸取10.00 mL乙腈提取液，氮吹濃縮。丙酮定容至5 mL，渦旋混勻后，過膜上機。依據(jù)NY/T 761—2008標準[3]第一部分方法二中儀器色譜條件，采用高效氣相-FPD檢測，外標法定量。

（3）液相色譜儀檢測。取樣品25.0 g，將其與5～7 g Nacl、50.0 mL乙腈共同置于離心管中，渦旋混勻后，高速勻漿2 min，靜置30 min，離心，使乙腈和水分層。取10.0 mL乙腈層于比色管中80 ℃水浴氮吹蒸至近干，用10 mL二氯甲烷∶甲醇（99∶1）溶液分3次洗滌比色管。采用固相萃取法，將液體轉(zhuǎn)移至活化后的固相萃取氨基柱，將濾出液體收集，氮吹至近干后加入1.0 mL甲醇渦旋后過膜上機。依據(jù)NY/T 761—2008標準[3]第三部分中儀器色譜條件，采用高效液相-熒光檢測，外標法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 速測卡法與分光光度比色法檢驗結(jié)果分析

通過兩種快速檢測方法（速測卡法與分光光度比色法）對同一批樣品進行檢測比較，得出檢驗結(jié)果，如表2所示。兩種方法的檢測結(jié)果與已知檢驗結(jié)果進行對比，相符合的有41個，不符合的9個，其中速測卡法3個，分光光度比色法6個。

表2 速測卡法與分光光度比色法檢測蔬菜中殘留農(nóng)藥結(jié)果表

由上述檢驗結(jié)果計算可知，速測卡法的靈敏度為96.7%，特異性為90%。分光光度比色法的靈敏度為86.7%，特異性為90%。兩種檢測方法對樣品的特異性都穩(wěn)定，但速測卡法的靈敏度要比分光光度比色法高一些。兩種檢測方法的比較如下。①取樣代表性。分光光度法取1 g，速測卡取5 g，在樣品取樣量上，速測卡取樣要比分光光度比色法更具有代表性。②測定時樣品液的濃度。速測卡是直接加入提取液進行檢測，分光光度法是將樣品加入緩沖液中，樣品溶液濃度稀釋了5倍。③樣品色素對結(jié)果干擾。分光光度比色法對樣品液要求必須澄清且盡量避免顏色的干擾，減少樣品中色素。但速測卡法對樣品中葉綠素的要求不高，適合各種蔬菜的檢測。④可操作性。速測卡法通過樣品溶液提取-培養(yǎng)-檢驗結(jié)果肉眼即可判斷，實驗過程簡單、可操作性強。而分光光度比色法對實驗過程時間的把控有嚴格要求，必須確保樣品與空白對照放置的時間相同，實驗結(jié)果才真實可靠并具有一定的可比性。待測樣品加入底物以及測定都要迅速，實驗過程復(fù)雜，且對操作人員有一定的要求。綜上所述，速測卡法在樣品代表性、檢驗結(jié)果的準確度、實驗過程的可操作性都要比分光光度比色法更具有適用性、實用性。

2.2 速測卡法準確性驗證

通過對21種蔬菜、75個樣品進行檢測發(fā)現(xiàn)，其中速測卡與色譜法（氣相和液相）檢測結(jié)果均為合格的農(nóng)產(chǎn)品樣本有63個，均為不合格的農(nóng)產(chǎn)品樣本為4個，還有8個樣品兩種檢測方法獲得結(jié)果存在沖突。這8個樣品中，速測卡檢測合格而色譜法檢測不合格的農(nóng)產(chǎn)品樣本有3個，速測卡檢測不合格而色譜法檢測合格的農(nóng)產(chǎn)品樣本有5個，如表3所示。

表3 速測卡與色譜法檢測結(jié)果的比較表

表3結(jié)果表明，經(jīng)氣相、液相色譜儀定性定量檢測比較后得出在68個樣品中，假陰性率為4.4%，假陽性率為7.4%，相對準確度為88.2%。速測卡法能夠基本滿足國家標準對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)殘快速檢測方法的要求。樣品農(nóng)藥殘留量濃度在1 mg·kg-1以上，檢測都呈陽性。

3 結(jié)論

（1）兩種方法（速測卡法和分光光度比色法）檢測原理相同。經(jīng)過對兩種快速檢測方法的靈敏度和特異性比較，得出速測卡法的靈敏度、準確度較高，特異性穩(wěn)定。

（2）速測卡法對蔥、姜、蒜及西紅柿等蔬菜有假陽性反應(yīng)。主要是因為這類蔬菜的汁液中有能夠破壞或者抑制膽堿酯酶的物質(zhì)。檢測這類蔬菜時可將取整株浸泡后的液體作為檢測樣本，避免蔬菜的汁液影響檢測效果。

（3）參照食品中農(nóng)藥最大殘留限量標準GB 2763—2021[4]，農(nóng)藥殘留限量為0.01～0.5 mg·kg-1，速測卡法檢出呈陽性的靈敏度約為0.1 mg·kg-1。

（4）速測卡法具有操作簡單、便于攜帶、準確快速、成本低等優(yōu)點，可以有效檢測農(nóng)藥殘留是否超標，預(yù)防食材中毒事件發(fā)生。隨著社會經(jīng)濟以及人們生活水平的不斷提高，健康對于人們的重要性已經(jīng)日益凸顯，人們對于農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的限量承受能力也在不斷降低，對農(nóng)藥殘留檢測要求越來越高[5]。因此，農(nóng)藥殘留檢測開始向著質(zhì)量更高、速度更快、方法更精確、靈敏度更高的方向發(fā)展。速測卡法能夠快速、準確地分析檢測出有機磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留總量。未來，隨著科學(xué)技術(shù)日新月異的發(fā)展，隨著各學(xué)科的不斷融合與發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)將更加成熟、高效。