胃癌組織中LINC00152、UBE2Q1 的表達(dá)及意義

葉雅麗，阮榮華，蔡莎莎，段達(dá)榮，符竣惠

（臺(tái)州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科1，普外科2，浙江 臺(tái)州 318020）

胃癌（gastric cancer）是最常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和致死率較高，嚴(yán)重影響患者生命安全。目前胃癌診斷主要依據(jù)臨床癥狀、胃鏡、病理切片、影像學(xué)診斷以及CA199 等腫瘤標(biāo)志物，但胃癌發(fā)病初期，并無明顯癥狀，且已知的腫瘤標(biāo)志物敏感度和特異度均不能滿足臨床需求，容易漏診和誤診。胃鏡為侵入性操作，病理取材為有創(chuàng)性操作，患者難以接受，同時(shí)患者出現(xiàn)影像學(xué)改變時(shí)往往已發(fā)展為中晚期階段[1，2]，而中晚期胃癌手術(shù)難度高，放化療等治療手段療效有限，且治療費(fèi)用高，患者耐受性差。因此早期診斷、及時(shí)治療是延長患者生存時(shí)間、降低治療費(fèi)用、提高生存質(zhì)量的關(guān)鍵。但目前尚無有效、無創(chuàng)的胃癌早期篩查診斷方法。本研究主要探討長鏈非編碼RNA LINC00152、泛素接合酶E2Q1（ubiqutin-conjugating enzyme E2Q1，UBE2Q1）在胃癌組織中的表達(dá)及意義，以期為胃癌腫瘤標(biāo)志物的挖掘提供基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017 年1 月-2021 年3 月臺(tái)州市第一人民醫(yī)院收治的79 例首次診斷為胃癌患者的癌組織和遠(yuǎn)端癌旁組織，所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療等任何治療，已排除合并其他腫瘤、術(shù)后病理確認(rèn)為原發(fā)性胃癌者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所獲得的樣本均經(jīng)過患者及家屬知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 組織標(biāo)本取材與保存 手術(shù)切除胃癌組織，取胃癌組織和距離癌組織距離大于5 cm 的遠(yuǎn)端癌旁組織，切成小塊,置于無氮樣品保存液中，-80 ℃凍存。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測LINC00152、UBE2Q1表達(dá) 取出-80 ℃保存的組織標(biāo)本，解凍后裝入無RNA 酶的EP 管，加入1 ml Trizol 試劑，勻漿，提取總RNA。8 μl 總RNA，加2 μl 逆轉(zhuǎn)錄酶，配成10 μl體系，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，逆轉(zhuǎn)錄條件為：37 ℃15 min（逆轉(zhuǎn)錄），98 ℃5 min（酶失活），12 ℃0.5 min（保溫）。以逆轉(zhuǎn)錄所得的cDNA 為模板，設(shè)計(jì)引物（表1），以GAPDH 為內(nèi)參，在美國ABI Step One Plus Real Time PCR System 上檢測各樣本中LINC00152、UBE2Q1 的水平，相對(duì)表達(dá)水平用2-△△Ct表示，△Ct=（Ct目的基因-CtGAPDH）。Trizol 試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green 熒光定量PCR 試劑盒均購自日本TaKaRa 公司。

表1 引物序列

1.3 觀察指標(biāo) 比較胃癌組織和癌旁組織中LINC00152、UBE2Q1 表達(dá)，并分析LINC00152、UBE2Q1 表達(dá)與胃癌患者臨床病理因素間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，非正態(tài)分布的計(jì)量資料以[M（P25，P75）]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，多組比較采用Kruskal-Wallis 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以（n）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織和癌旁組織中LINC00152、UBE2Q1 表達(dá)比較 胃癌組織中LINC00152、UBE2Q1 表達(dá)高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 胃癌組織和癌旁組織中LINC00152、UBE2Q1 表達(dá)比較[M（P25，P75）]

2.2 LINC00152、UBE2Q1 的表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理因素間的關(guān)系 LINC00152 表達(dá)與分化程度有關(guān)，UBE2Q1 表達(dá)與TNM 分期、轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），見表3。

表3 LINC00152、UBE2Q1 的表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理因素間的關(guān)系[M（P25，P75）]

3 討論

LINC00152 位于染色體2p11.2 上，是一種含有828 個(gè)核苷酸分子的長鏈非編碼RNA，在多種人類腫瘤中，特別是消化系統(tǒng)惡性腫瘤中高度表達(dá)[3]。研究表明[4-6]，LINC00152 通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和凋亡，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。此外，LINC00152 可通過影響PI3K/AKT、mTOR、NOTCH1等各種信號(hào)通路參與多種癌癥的發(fā)生，包括肝癌、膽囊癌、結(jié)腸癌等[7]。

何美玲等[8]的研究發(fā)現(xiàn)，LINC00152 可通過調(diào)控vimentin 和N-cadherin 蛋白的表達(dá)，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞（MIAPaCa-2）的侵襲和遷移能力。唐世磊等[9]研究表明，LINC00152 在肝癌中異常高表達(dá)，高表達(dá)與腫瘤TNM 分期呈正相關(guān)（P＜0.05），且高表達(dá)患者的無病生存時(shí)間、總生存期均明顯低于低表達(dá)者（P＜0.05）。高希春等[10]通過RT-qPCR 方法檢測了24 例胃癌患者癌組織和癌旁組織中LINC00152 的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌組織中LINC00152 的表達(dá)水平與癌旁組織相比呈顯著高表達(dá)（P＜0.01），且LINC00152的表達(dá)水平與胃癌臨床病理分期呈正相關(guān)（P＜0.05）。Huang Y 等[11]從組織水平、細(xì)胞水平和動(dòng)物模型方面研究了LINC00152 對(duì)胃癌增殖的影響，結(jié)果表明LINC00152 在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯高于鄰近正常組織；LINC00152 下調(diào)后，胃癌細(xì)胞的增殖明顯受到抑制；構(gòu)建裸鼠異種移植模型，進(jìn)一步證實(shí)了LINC00152 促腫瘤增殖作用。本研究采用RTqPCR 方法檢測了79 例胃癌患者癌組織和癌旁組織中LINC00152 的差異表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌組織中LINC00152表達(dá)高于癌旁組織（P＜0.05），且LINC00152 的表達(dá)水平與分化程度有關(guān)（P＜0.05），與既往研究結(jié)果相符[12-14]，提示LINC00152 在胃癌早期篩查診斷中具有一定臨床價(jià)值。

UBE2Q1 是一種泛素接合酶，定位于人1 號(hào)染色體長臂21 位點(diǎn)，編碼泛素接合酶E2蛋白，E2能促進(jìn)活化泛素從泛素失活酶（E1）轉(zhuǎn)移到泛素連接酶（E3），從而影響下游基因，調(diào)節(jié)細(xì)胞生物學(xué)行為，在腫瘤中發(fā)揮作用[15，16]。UBE2Q1 已被證實(shí)在各種類型的癌癥中過度表達(dá)，參與肝癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的發(fā)展和進(jìn)展，有望成為臨床上潛在的生物標(biāo)志物和分子治療靶點(diǎn)[17，18]。常仁安[19]研究發(fā)現(xiàn)，UBE2Q1 在肝癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織，且其高表達(dá)與肝癌組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（P＜0.001）；UBE2Q1在肝癌中的高表達(dá)與患者總生存率的降低呈明顯正相關(guān)，是肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)；此外，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，抑制UBE2Q1 的表達(dá)可以引起肝癌細(xì)胞增殖水平下降以及細(xì)胞周期的停滯。Topno R 等[20]研究表明，UBE2Q1 是高級(jí)別漿液性卵巢癌患者的潛在的預(yù)后指標(biāo)，UBE2Q1 的高表達(dá)提示較低的無復(fù)發(fā)生存率和對(duì)鉑/紫杉烷治療的反應(yīng)結(jié)果較差。本研究采用RT-qPCR 方法檢測了79 例胃癌患者癌組織和癌旁組織中UBE2Q1 的差異表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌組織中UBE2Q1 表達(dá)高于癌旁組織（P＜0.05），且TNM分期Ⅲ/Ⅳ期患者的UBE2Q1 mRNA 表達(dá)水平高于Ⅰ/Ⅱ期，發(fā)生轉(zhuǎn)移患者的UBE2Q1 mRNA 表達(dá)水平高于未轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05），表明UBE2Q1 的表達(dá)水平與TNM 分期、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，LINC00152 和UBE2Q1 在胃癌組織中高表達(dá)，有望成為胃癌診斷的生物標(biāo)志物和腫瘤治療的靶點(diǎn)，但其作用于胃癌的分子機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步研究。