柏子仁中黃酮提取工藝研究

王琳榕，鐘 君，陳方山，郝成龍

（內(nèi)江師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，四川 內(nèi)江 641199）

柏子仁是柏科植物側(cè)柏的干燥成熟種仁，其中的黃酮抗氧化能力很強(qiáng)，可幫助人體清除自由基，還具有改善血液循環(huán)、降低膽固醇、抑制炎性生物酶滲出、促進(jìn)傷口愈合和止痛等作用。黃酮苷元一般難溶或不溶于水，但易溶于乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑。黃酮類化合物糖苷化后易溶于水、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等溶劑，難溶于乙醚、三氯甲烷、苯等有機(jī)溶劑。采用乙醇提取柏子仁中的黃酮，通過單因素試驗確定乙醇濃度、提取溫度、時間對黃酮含量的影響，再利用正交試驗確定取柏子仁中黃酮類化合物的最佳工藝條件，以期為其成分研究和應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。

1 試劑與方法

1.1 試驗原理

總黃酮類化合物可溶于乙醇，故用乙醇提取樣品中的黃酮類化合物。黃酮類化合物與鋁離子可生成有色絡(luò)合物，在510 nm波長附近有吸收峰且符合定量分析的比爾定律。

1.2 儀器與試劑

超聲波清洗機(jī)；JT1001N電子天平；L420離心機(jī)；紫外分光光度計。

無水乙醇、乙醇、5%NaNO2溶液、5%Al（NO3）3溶液、1 mol/L的NaOH溶液、2 g/L蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 試驗方法

1.3.1 柏子仁中黃酮提取工藝稱取柏子仁干粉1.000 0 g置于潔凈的100 mL錐形瓶中，加入40.0 mL乙醇（不同乙醇濃度重復(fù)實驗），超聲功率500 W，超聲溫度、超聲時間，4℃、12 000 rpm離心25 min，收集上清，得粗提液。

1.3.2 黃酮含量測定方法吸取2.0mL粗提液于50mL潔凈的試管中，分別加入0.28mL 5%NaNO2溶液，放置6 min后加入0.28mL 5%Al(NO3)3溶液，6 min后再加入4 mL 1mol/L的NaOH溶液，用30%乙醇稀釋至10 mL，15 min后于波長510 nm處測定吸光度，0.0 mL為空白對照，測得各粗提液的吸光度A1；另吸取1.0 mL粗提液于10 mL潔凈的離心管中，再加入4.0 mL30%乙醇，于波長510 nm處測定吸光度。計算出粗提液中的濃度C，g/L，再計算總黃酮含量。

式中：V為浸提液體積，mL；m為樣品質(zhì)量g。

1.3.3 單因素和正交試驗通過單因子試驗，分別探究不同溫度、時間、乙醇濃度對黃酮提取的影響，再進(jìn)行正交試驗，進(jìn)一步確定最佳提取溫度、時間和乙醇濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取溫度對提取效果的影響

不同提取溫度對提取效果的影響見圖1。

由圖1可知，隨著提取溫度升高，總黃酮的含量顯著提高，并在70℃時達(dá)到最高值，然后明顯降低。綜合考慮提取率和含量，選取60，70，80℃進(jìn)行正交試驗。

圖1 不同提取溫度對提取效果的影響Figure 1 Effects of different extraction temperatures on the extraction effect

2.2 不同提取時間對提取效果的影響

不同提取時間對提取效果的影響見圖2。

由圖2可知，隨著提取時間的延長，總黃酮的含量顯著提高，在提取時間為20 min時達(dá)到最高，而后明顯降低。提取時間20，25，30 min時的含量高于其它時間，因此選取此3個提取時間做正交試驗。

圖2 不同提取時間對提取效果的影響Figure 2 Effects of different extraction time on the extraction effect

2.3 不同乙醇濃度對提取效果的影響

不同乙醇濃度對提取效果的影響見圖3。

圖3 不同乙醇濃度對提取效果的影響Figure 3 Effects of different ethanol concentration on the extraction effect

試驗結(jié)果表明，隨著乙醇濃度的增高，總黃酮含量顯著提高，在乙醇濃度為75%時達(dá)到最高。選取70%，75%，80%的乙醇濃度進(jìn)行正交試驗。

2.4 正交試驗

正交試驗因素及結(jié)果見表1。

表1 正交試驗因素及結(jié)果Table 1 The orthogonal test factors and the results are shown in Table 1

通過正交試驗結(jié)果得知，柏子仁中黃酮提取的最佳條件為A2B2C3，即提取溫度70℃，提取時間25 min，乙醇濃度為80%，此時總黃酮含量為0.213%。

3 結(jié)論

提取柏子仁中的黃酮含量，不僅可以了解黃酮的可利用率，也可為后續(xù)產(chǎn)物的研發(fā)提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。通過單因素試驗和正交試驗確定的提取最佳條件為：提取溫度70℃，提取時間25 min，乙醇濃度80%。