童玉鑫，吳卓秋，吳淑琴，李順路，郭娉婷，王長(zhǎng)康

（福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院（蜂學(xué)學(xué)院），福建福州 350002 ）

能量水平是影響肉雞生長(zhǎng)性能的關(guān)鍵因素之一，油脂作為肉雞日糧中的重要組成部分，是代謝能、必需脂肪酸和脂溶性維生素的重要來源。除此之外，在家禽飼糧中添加油脂還可減少粉度、增加飲食適口性和提高能量利用效率。由于近幾年大豆油的成本不斷上升，如何提高油脂的利用率，避免造成資源浪費(fèi)，從而提高飼料報(bào)酬備受關(guān)注。大豆溶血磷脂（SLPL）是精制大豆油時(shí)的副產(chǎn)品，作為天然乳化劑的一種，具有廉價(jià)易獲取的特點(diǎn)以及促進(jìn)油脂在動(dòng)物體內(nèi)消化吸收、提高畜禽的生產(chǎn)性能、減少脂肪在肝臟的堆積等功能，是增強(qiáng)家禽健康的一種優(yōu)質(zhì)飼料添加劑。目前，關(guān)于SLPL 在肉雞日糧中的研究主要集中在生產(chǎn)性能、養(yǎng)分利用率等方面。研究發(fā)現(xiàn)，在成年肉雞日糧中添加12.5 g/kg 大豆磷脂可有效提高動(dòng)物油中不飽和脂肪酸的利用率；在飼糧中添加SLPL 等量替代豆油不會(huì)改善肉雞胃腸道對(duì)油脂的消化利用，對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能無顯著影響。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加SLPL能夠改善白羽肉雞生長(zhǎng)性能并且提高肌肉含脂率。而SLPL 對(duì)白羽肉雞肌肉品質(zhì)和脂質(zhì)代謝的影響及作用機(jī)理還未進(jìn)行深入研究。因此，本試驗(yàn)旨在探討SLPL 對(duì)白羽肉雞肉品質(zhì)及脂質(zhì)代謝的影響，并為SLPL 在實(shí)際家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論參考和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 AA+白羽肉公雞由龍巖寶泰農(nóng)牧有限公司提供；SLPL（純度≥85%）由麥倫（廈門）生物科技公司提供，載體為脫脂米糠。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇228 只1 日齡體重相近、健康的AA+白羽肉公雞，隨機(jī)分成4 個(gè)組，每個(gè)組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12 只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加100、200、300 mg/kg SLPL（等量取代豆油），試驗(yàn)期為42 d。在第42 天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2 只雞，屠宰后迅速取腿肌、胸肌、十二指腸、空腸及肝臟樣品，用于測(cè)定肉品質(zhì)及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

1.3 試驗(yàn)飼糧 基礎(chǔ)飼糧根據(jù)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（2004）配制?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)在福建農(nóng)林大學(xué)家禽試驗(yàn)站進(jìn)行。試驗(yàn)開始前兩周雞舍采用福爾馬林熏蒸消毒，熏蒸后空置1 周，而后使用戊二醛獸用消毒劑噴淋消毒。采用籠養(yǎng)方式，每天光照23 h，自然通風(fēng)，自由采食以及飲水。開始雞舍溫度控制在32～34℃，此后每周溫度下降 1～2℃，降至25℃左右后溫度保持恒定。按照白羽肉雞常規(guī)免疫程序免疫。

1.5 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.5.1 肉品質(zhì) 采用pH 檢測(cè)儀（PH-STAR 型，德國(guó)MATTHAUS 公司）測(cè)定屠宰后45 min 和24 h 胸肌和腿肌pH；取大小約5 cm×3 cm×1 cm 的肉樣，采用懸掛法測(cè)定滴水損失，計(jì)算公式為滴水損失（%）=（m–m）/m×100%；并取大小約5 cm×2 cm×1 cm 的肉樣，在水浴鍋中煮至70℃瀝干水分稱重，計(jì)算蒸煮損失。

1.5.2 腸道和肝臟總RNA 的提取和cDNA 的制備 肉雞宰后迅速將其腸道和肝臟分離，取適量樣品到離心管中，保存于-80℃待測(cè)。總RNA 的提取按照RNAprep Pure Tissue Kit 總RNA 提取試劑盒（天根生化科技有限公司，北京）的說明書進(jìn)行，然后用NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA 濃度以及OD/OD。按照EastepRT Master Mix Kit（普洛麥格生物技術(shù)有限公司，北京）的說明書制備cDNA。

1.5.3 熒光定量PCR 以cDNA 為模板，按照Go Taq?qPCR Master Mix（普洛麥格生物技術(shù)有限公司，北京）的說明書進(jìn)行熒光定量PCR，采用2的方法計(jì)算出各基因的相對(duì)表達(dá)量。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5 min；95℃變性10 s，60℃退火10 s，72℃延伸10 s，共40個(gè)循環(huán)。利用Primer Premier6 軟件設(shè)計(jì)引物，引物由福州擎科生物科技有限公司合成。引物序列見表2。

表2 內(nèi)參基因和目的基因的引物序列

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0 進(jìn)行單因素方差分析，并采用Duncan's 進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，<0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 SLPL 對(duì)白羽肉雞肉品質(zhì)的影響 由表3 可知，200、300 mg/kg SLPL 組pH低于其他兩組（<0.05），300 mg/kg SLPL 組滴水損失率高于其他3 組（<0.05），200、300 mg/kg SLPL 組腿肌pH低于其 他兩組（<0.05），各組間胸肌和腿肌其他指標(biāo)沒有顯著差異。

表3 SLPL 對(duì)白羽肉雞肉品質(zhì)的影響

2.2 SLPL 對(duì)白羽肉雞十二指腸脂質(zhì)消化和吸收相關(guān)基因表達(dá)的影響 由表4 可知，試驗(yàn)組十二指腸的mRNA 相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組（<0.05），100、200 mg/kg SLPL 組十二指腸的mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于其他兩組（<0.05），但對(duì)十二指腸及的mRNA 相對(duì)表達(dá)量均無顯著影響。

表4 SLPL 對(duì)肉雞十二指腸脂質(zhì)消化和吸收相關(guān)基因表達(dá)的影響

2.3 SLPL 對(duì)白羽肉雞空腸脂質(zhì)消化和吸收相關(guān)基因表達(dá)的影響 由表5 可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加SPLP 對(duì)空腸及的mRNA 相對(duì)表達(dá)量均無顯著影響。

表5 SLPL 對(duì)肉雞空腸脂質(zhì)消化和吸收相關(guān)基因表達(dá)的影響

2.4 SLPL 對(duì)白羽肉雞肝臟脂質(zhì)合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)的影響 由表6 可知，試驗(yàn)組肝臟的mRNA 相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組（<0.05），但飼糧中添加SLPL 對(duì)肝臟的mRNA 相對(duì)表達(dá)量無顯著影響。

表6 大豆溶血磷脂對(duì)肉雞肝臟脂質(zhì)合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)的影響

3 討論

3.1 飼糧中添加SLPL 對(duì)白羽肉雞肉品質(zhì)的影響 肉品質(zhì)是影響消費(fèi)者接受度的主要因素，而衡量肉品質(zhì)的重要指標(biāo)主要包括肌肉的pH、滴水損失率和熟肉率。肉雞屠宰后pH 下降的速度和程度是影響肉品質(zhì)的重要因素，pH 快速下降可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，嫩度和多汁性降低等不良后果。滴水損失率可反映肌肉在貯藏過程中的重量損失，而熟肉率是指肌肉經(jīng)過加熱后，經(jīng)過物理變化后保留的重量。任晉東等研究表明，羥化卵磷脂對(duì)三黃雞肌肉pH、系水力無顯著影響，不能有效改善肌肉品質(zhì)。王惠林等研究表明，乳化劑組黃羽肉雞胸肌滴水損失均有不同程度下降，其中1 g/kg乳化劑組滴水損失較對(duì)照組下降20%。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中SLPL 添加量超過200 mg/kg 可顯著降低胸肌pH和腿肌pH，顯著提高胸肌滴水損失率，這可能由于細(xì)胞膜在平衡狀態(tài)下接觸過量的溶血磷脂時(shí)，這些外源脂質(zhì)被整合到磷脂雙分子層中，降低了脂質(zhì)膜的酰基鏈有序參數(shù)，促使膜的流動(dòng)性增加，進(jìn)而降低肌肉嫩度和多汁性，從而對(duì)肉品質(zhì)產(chǎn)生不良的影響。但黃進(jìn)研究發(fā)現(xiàn)，在白羽肉雞飼糧中添加5～20 g/kg大豆磷脂可顯著提高胸肌pH，降低滴水損失，同時(shí)提高熟肉率和雞肉不飽和脂肪酸含量，進(jìn)而改善肉品質(zhì)。上述研究結(jié)果不同可能與肉雞的遺傳背景、日齡、飼糧的組成以及乳化劑的種類等諸多因素有關(guān)。因此，SLPL 對(duì)肉品質(zhì)的影響還需進(jìn)一步研究。

3.2 飼糧中添加SLPL 對(duì)白羽肉雞小腸脂質(zhì)消化和吸收相關(guān)基因表達(dá)的影響 近期研究表明，肉雞日糧中添加SLPL 可提高肉雞腸道的脂肪消化率，從而提高家禽的生產(chǎn)性能。肉雞小腸對(duì)脂質(zhì)的消化吸收非常重要，十二指腸是脂類物質(zhì)水解消化的主要場(chǎng)所，而空腸和回腸主要起到對(duì)脂類物質(zhì)吸收的作用。脂類物質(zhì)在雞腸道中的消化吸收是一個(gè)復(fù)雜的過程，要通過一系列酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白共同協(xié)作完成。單酰甘油途徑是動(dòng)物通過小腸利用飼糧中脂類物質(zhì)合成甘油三酯（TG）的主要方式。脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族（FATPs）是細(xì)胞長(zhǎng)鏈脂肪酸攝取的關(guān)鍵介質(zhì)，其中是唯一能在小腸上皮細(xì)胞表達(dá)的基因。Gimeno 等研究發(fā)現(xiàn)，小鼠腸細(xì)胞中1 個(gè)等位基因的缺失，將導(dǎo)致FATP4 蛋白水平下降48%，同時(shí)攝取脂肪酸能力降低40%。單?；视王；D(zhuǎn)移酶（MGAT）可將小腸吸收的甘油一酯（MG）催化為甘油二酯（DG），之后再經(jīng)過二?；视王；D(zhuǎn)移酶（DGAT）的作用，最終生成TG，在脂質(zhì)代謝通路中發(fā)揮重要作用。而AGPAT 的主要作用是產(chǎn)生磷脂酸，磷脂酸作為脂質(zhì)合成中一個(gè)重要的分支點(diǎn)，它可作為DG 的前體，來參與后續(xù)TG 的合成。膽固醇作為脂溶性物質(zhì)，對(duì)于維持動(dòng)物機(jī)體正常生理功能具有重要作用。其主要來自食物攝取和生物合成，其中小腸的吸收合成占10%。膽固醇在動(dòng)物體內(nèi)70%以上以酯化的形式存在，ACAT2 是膽固醇酯化酶，在調(diào)控脂質(zhì)代謝中具有關(guān)鍵作用。而APOA、APOB作為脂蛋白亞型中的特殊蛋白質(zhì)，對(duì)膽固醇的平衡和轉(zhuǎn)運(yùn)密切相關(guān)。

本研究結(jié)果表明，在飼糧中添加SPLP 可顯著提高十二指腸和的mRNA 相對(duì)表達(dá)量，對(duì)空腸及的mRNA 相對(duì)表達(dá)量均無顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果可能是由于SLPL 作為一種乳化劑可幫助飼糧中脂類物質(zhì)的乳化分解，在小腸中形成穩(wěn)定的膠束結(jié)構(gòu)，從而提升了小腸前段（十二指腸）對(duì)小分子脂類的消化效率，進(jìn)而提高TG 合成途徑中十二指腸的mRNA 相對(duì)表達(dá)量以及膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的mRNA 相對(duì)表達(dá)量，起到增加肉雞脂肪的沉積、提高生產(chǎn)性能的作用。這驗(yàn)證了本課題組之前的研究結(jié)果，飼糧中添加SLPL 可顯著提高白羽肉雞平均日增重，并可提升胸肌和腿肌的含脂率。但也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加適量SLPL 不會(huì)改變回腸對(duì)總脂肪酸（TFA）、飽和脂肪酸（SFA）和單不飽和脂肪酸（MUFA）的消化吸收。這可能由于家禽小腸不同部位的消化酶、輔助消化液以及鹽類的含量不同，因而對(duì)脂類物質(zhì)的消化吸收能力也有所不同，進(jìn)而導(dǎo)致飼糧中添加SLPL 對(duì)肉雞小腸不同部位的影響也不盡一致。

3.3 飼糧中添加SLPL 對(duì)白羽肉雞肝臟脂質(zhì)合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)的影響 禽類脂肪來源的主要途徑是肝臟的合成以及腸道對(duì)脂類物質(zhì)的消化吸收。在動(dòng)物體內(nèi)，脂肪主要以TG 的形式存在，而TG 主要來自脂肪酸的從頭合成、酯化和分解等一系列過程。的主要功能是通過催化乙酰輔酶A 和丙二酸單酰輔酶A 合成脂肪酸影響脂肪沉積，是催化脂肪酸從頭合成的關(guān)鍵酶。是脂肪酸合成的限速酶，能催化乙酰輔酶A 合成丙二醛單酰輔酶A，從而控制脂肪酸的合成效率。擔(dān)任的主要功能是催化線粒體內(nèi)膜外側(cè)長(zhǎng)鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行氧化，其表達(dá)水平越高，說明組織中脂肪酸的氧化速度越快。劉梅等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加大豆磷脂可顯著提高肉雞肝臟和的mRNA 相對(duì)表達(dá)量，并隨添加量的增加呈線性升高趨勢(shì)，表明大豆磷脂可通過提高脂肪合成基因的表達(dá)，來提高飼糧脂類物質(zhì)的消化吸收。Huang 等研究也發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加大豆磷脂可顯著提高肉雞肝臟脂肪合成關(guān)鍵酶和的mRNA 相對(duì)表達(dá)量，從而提高肝臟脂肪酸的合成。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，飼糧中添加不同劑量SLPL 可顯著降低肝臟的mRNA相對(duì)表達(dá)量，對(duì)和的mRNA 相對(duì)表達(dá)量無顯著影響。這可能是由于SLPL 的乳化功能提高了肉雞小腸對(duì)脂類物質(zhì)的吸收，合成的乳糜微粒穿過基底膜直接進(jìn)入門靜脈血液，外源的脂類增多會(huì)負(fù)反饋調(diào)節(jié)肝臟脂肪酸的合成，進(jìn)而導(dǎo)致基因表達(dá)量的降低。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加SLPL 可通過提高十二指腸及降低肝臟的表達(dá)來促進(jìn)白羽肉雞的脂質(zhì)代謝平衡，且添加量超過200 mg/kg 會(huì)對(duì)肌肉品質(zhì)產(chǎn)生負(fù)面影響。