奧扎格雷鈉對(duì)癲癇小鼠應(yīng)激、神經(jīng)損傷程度和神經(jīng)功能重建相關(guān)因子及凝血指標(biāo)的影響

張亞瓊，姬冬林

(1.榆林市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，陜西 榆林 719051；2.榆林市第五醫(yī)院藥學(xué)部，陜西 榆林 719053)

癲癇是由于大腦內(nèi)興奮性及抑制性神經(jīng)元失衡引起的反復(fù)發(fā)作的神經(jīng)功能紊亂綜合征，具有發(fā)作性、短暫性、重復(fù)性、刻板性等特點(diǎn)[1]。我國(guó)約有900多萬(wàn)人患有癲癇[2]，可表現(xiàn)為全身肌肉強(qiáng)直收縮，頭部?jī)A斜，上肢屈直，下肢伸直，舌咬傷，頭暈、恐懼、胸悶、心悸、感覺(jué)異常、精神障礙、惡心及胃部不適等，也可出現(xiàn)不同程度的意識(shí)障礙、思維異常、精神運(yùn)動(dòng)障礙、情緒異常、腦電波形改變等[3]。流行病學(xué)觀察顯示，癲癇整體發(fā)病率約為0.12%～0.65%[4]，其中61.1%～95.5%的患者為全面性發(fā)作，發(fā)病年齡主要為20歲以下[5]。奧扎格雷鈉是一種高效選擇性血栓素合成酶抑制劑[6]，可顯著降低人體中血栓素A2的表達(dá)水平，促進(jìn)前列環(huán)素的合成，抑制血小板聚集，改善神經(jīng)遞質(zhì)異常引起的神經(jīng)功能損傷，促進(jìn)癲癇患者的神經(jīng)功能恢復(fù)，改善患者血液流變學(xué)指標(biāo)，降低血黏度，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的再生[7-8]。本研究就奧扎格雷鈉對(duì)癲癇小鼠應(yīng)激、神經(jīng)損傷程度和神經(jīng)功能重建相關(guān)因子及凝血指標(biāo)的影響進(jìn)行研究，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 60只健康成年雄性昆明小鼠，SPF級(jí)，購(gòu)于西安微元生物醫(yī)藥研究所有限公司，許可證號(hào)：SYXK(陜)2020-006。所有小鼠在濕度為40.60%，溫度為(24±1)℃、12 h晝/夜的條件下飼養(yǎng)，自由飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥物與試劑：奧扎格雷鈉(批號(hào)：H20059344)；鹽酸匹羅卡品(批號(hào)：290K1391)；硫酸阿托品注射液(批號(hào)：H42021498)；0.9%氯化鈉注射液(批號(hào)：H33020484)。

1.2.2 造模與分組：本研究共納入60只小鼠作為研究對(duì)象，采用隨機(jī)分配原則將其分為正常組、模型組、奧扎格雷鈉組，每組20只。將模型組及奧扎格雷鈉組注射藥物誘發(fā)癲癇。腹腔注射鹽酸阿托品(17 mg/kg)及鹽酸匹羅卡品(180 mg/kg)。采用Racine實(shí)驗(yàn)動(dòng)物癲癇發(fā)作標(biāo)準(zhǔn)對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行行為學(xué)觀察[9]。對(duì)于4級(jí)發(fā)作以下的小鼠進(jìn)行首劑1/3加注,每次間隔15 min，若連續(xù)追加注射2次仍未出現(xiàn)4級(jí)以上發(fā)作的小鼠，視為造模失敗。癲癇持續(xù)狀態(tài)30 min后給予地西泮以終止癲癇發(fā)作。研究小鼠的藥物用量參考《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》[10]。正常組：生理鹽水20 ml/kg灌胃2周；模型組：藥物致癇后生理鹽水20 ml/kg灌胃2周；奧扎格雷鈉組：奧扎格雷鈉20 mg/kg灌胃2周。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)：采集小鼠靜脈血5 ml，以r=8 cm，3000 r/min離心10 min，采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒測(cè)定應(yīng)激指標(biāo)：去甲腎上腺素(Norepinephrine,NE)、皮質(zhì)醇(Cortisol,Cor)；神經(jīng)損傷指標(biāo)：神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron specific eno1ase，NSE)、星形膠質(zhì)源性蛋白(S100B)、泛素羧基末端水解酶 L1(UCH-L1)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)；神經(jīng)功能重建指標(biāo)：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)水平；采用全自動(dòng)凝血儀檢測(cè)各項(xiàng)凝血功能指標(biāo)水平：活化部分凝血酶原時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)及纖維蛋白原(FIB)。

2 結(jié) 果

2.1 三組應(yīng)激激素表達(dá)水平比較 與正常組相比，模型組NE、Cor表達(dá)水平明顯升高(均P<0.05)；與模型組相比，奧扎格雷鈉組NE、Cor表達(dá)水平明顯降低(均P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組應(yīng)激激素表達(dá)水平比較

2.2 三組神經(jīng)功能損傷程度相關(guān)因子水平比較 與正常組比較，模型組NSE、S100B、UCH-L1及GFAP水平明顯升高(均P<0.05)；與模型組比較，奧扎格雷鈉組NSE、S100B、UCH-L1、GFAP水平明顯降低(均P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 三組神經(jīng)功能損傷程度相關(guān)因子水平比較

2.3 三組神經(jīng)功能重建相關(guān)因子水平比較 與正常組相比，模型組BDNF、NGF水平明顯降低(均P<0.05)；與模型組相比，奧扎格雷鈉組神經(jīng)功能重建的細(xì)胞因子BDNF、NGF的含量明顯升高(均P<0.05)，見(jiàn)表3。

2.4 三組凝血功能指標(biāo)水平比較 與正常組比較，模型組凝血指標(biāo)PT、TT、APTT明顯降低，F(xiàn)IB明顯升高(均P<0.05)，呈現(xiàn)相對(duì)高凝狀態(tài)。與模型組相比，奧扎格雷鈉組凝血指標(biāo)PT、TT、APTT明顯升高，F(xiàn)IB明顯降低(均P<0.05)，呈現(xiàn)相對(duì)低凝狀態(tài)，見(jiàn)表4。

表4 三組凝血功能指標(biāo)水平比較

3 討 論

癲癇是多種原因?qū)е碌哪X部神經(jīng)元異常放電的臨床綜合征，是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一[11]。癲癇的發(fā)病，不僅會(huì)引起患者身體的不適，也對(duì)其生活、情緒、工作等造成顯著影響[12]。癲癇的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，可能與中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性、抑制性神經(jīng)元的比例失衡有關(guān)[13]，也可能與細(xì)胞因子的激活、離子通道異常、遺傳、免疫、內(nèi)分泌等密切相關(guān)[14]。癲癇患者一旦發(fā)病，需長(zhǎng)期用藥，病程較長(zhǎng)，因此早期診斷、早期治療就顯得尤為重要[15]。癲癇發(fā)病期間，可表現(xiàn)為頭暈、頭痛、惡心、嘔吐、意識(shí)喪失、肢體抽動(dòng)、尿便失禁、舌咬傷等，長(zhǎng)期發(fā)作可引起不同程度的認(rèn)知功能障礙，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。

奧扎格雷鈉可抑制血栓素的生成，提高前列環(huán)素的表達(dá)，減少血小板的聚集，緩解血管痙攣，促進(jìn)腦組織微循環(huán)及能量代謝，挽救受損的大腦神經(jīng)元，提高紅細(xì)胞變形能力，降低全血黏度，改善組織耗氧能力。既往研究發(fā)現(xiàn)[16]，奧扎格雷鈉對(duì)于腦梗死神經(jīng)功能損傷及重建具有重要作用，而在癲癇患者中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。丁大鵬[17]研究發(fā)現(xiàn)奧扎格雷鈉有鈉可保護(hù)腦梗死患者的神經(jīng)功能，疏通腦血管，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)。陳開(kāi)民等[18]研究發(fā)現(xiàn)奧扎格雷鈉可有效改善急性腦梗死患者的神經(jīng)缺損癥狀，降低神經(jīng)元損傷標(biāo)志物的表達(dá)，減輕機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，改善預(yù)后。李琳峰等[19]研究發(fā)現(xiàn)奧扎格雷鈉可能通過(guò)調(diào)節(jié)Rho/Rho-kinase信號(hào)通路相關(guān)因子，促進(jìn)腦梗死大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)。

本研究中，模型組NE、Cor水平較對(duì)照組明顯升高，提示癲癇可引起機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，而奧扎格雷鈉組NE、Cor水平較模型組明顯降低，提示奧扎格雷鈉可能通過(guò)調(diào)節(jié)氧自由基平衡，抑制局部脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減少腦細(xì)胞損傷，緩解癲癇小鼠的應(yīng)激反應(yīng)[20]。模型組NSE、S100B、UCH-L1及GFAP水平較對(duì)照組明顯升高，提示癲癇小鼠神經(jīng)損傷相關(guān)指標(biāo)明顯升高，即癲癇可引起不同程度的神經(jīng)損傷；奧扎格雷鈉組NSE、S100B、UCH-L1、GFAP水平較模型組明顯降低，提示奧扎格雷鈉可明顯改善癲癇小鼠的神經(jīng)損傷；模型組BDNF、NGF水平較對(duì)照組明顯降低，提示癲癇可引起小鼠神經(jīng)功能重建能力降低，而奧扎格雷鈉組BDNF、NGF的含量較模型組明顯升高，提示奧扎格雷鈉可能通過(guò)抑制血栓素A1，促進(jìn)前列環(huán)素的生成，擴(kuò)張微血管，改善腦組織微循環(huán)，促進(jìn)癲癇發(fā)作引起的神經(jīng)元的損傷修復(fù)，從而改善神經(jīng)功能缺損癥狀；模型組較對(duì)照組呈現(xiàn)相對(duì)高凝狀態(tài)，提示癲癇可引起小鼠凝血功能亢進(jìn)，從而引起血栓等癥狀，而奧扎格雷鈉組較模型組凝血功能呈現(xiàn)相對(duì)低凝，提示奧扎格雷鈉可能通過(guò)抑制血小板聚集，有效改善癲癇小鼠的凝血功能，防止出凝血障礙等癥狀的出現(xiàn)。

當(dāng)然，本研究存在一定局限性：①本研究樣本量較小，所得結(jié)果可能存在一定的偏倚；②未對(duì)奧扎格雷鈉的有效劑量進(jìn)行梯度研究，未獲得奧扎格雷鈉的最佳有效劑量；③未進(jìn)行臨床試驗(yàn)，故暫且不能應(yīng)用于臨床的治療。未來(lái)期待臨床與基礎(chǔ)相結(jié)合，以及更加全面、詳細(xì)的研究，為癲癇患者的診治帶來(lái)新的參考。

綜上所述，奧扎格雷鈉可有效減輕癲癇小鼠應(yīng)激反應(yīng)、緩解神經(jīng)損傷癥狀，加強(qiáng)神經(jīng)功能重建， 改善凝血指標(biāo)。