新疆南疆地區(qū)部分集約化肉牛繁育場主要臨床病癥和生物安全調(diào)查

王 凡，馬雪連，孫亞偉，陳 卓，吾買爾江·牙合甫，陳玉珠，馮夢迪，吳 靜，易鵬飛，楊朝輝，夏利寧，鐘 旗，姚 剛

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，新疆烏魯木齊 830052；2.新疆畜牧科學院畜牧研究所，新疆烏魯木齊 830000）

畜禽養(yǎng)殖場生物安全是指為防止引起疾病的物質(zhì)進入畜群或限制疾病在牧場傳播而采取的一系列措施，包括保障外部生物安全（防止病原體進入）和內(nèi)部生物安全（在畜禽群體內(nèi)部傳播）的所有措施[1-3]。業(yè)已證明，畜禽養(yǎng)殖場生物安全計劃的制定與各項措施的貫徹實施是保障動物健康與福利，提高生產(chǎn)率，減少治療藥物使用，控制疫病發(fā)生與傳播的最重要系統(tǒng)工程[4-7]。然而，受環(huán)境、養(yǎng)殖技術(shù)水平等客觀因素影響，預期所需的勞動力、時間和經(jīng)費投入較高；受主客觀因素影響，采取的生物安全措施在不同畜群養(yǎng)殖場的實施水平與效果也大不相同[8]。因此，不同類型和不同功能的畜禽養(yǎng)殖場，基于較常流行或影響較大的疾病，制定針對性的，符合基本情況的生物安全計劃，可最大程度地防止疾病發(fā)生，降低疾病危害，顯著提高養(yǎng)殖效益，保障養(yǎng)殖健康和可持續(xù)發(fā)展[9-12]。近幾年新疆南疆地區(qū)安格斯肉牛養(yǎng)殖發(fā)展迅速，已成為當?shù)剞r(nóng)牧民脫貧致富、鄉(xiāng)村振興的重要產(chǎn)業(yè)之一。但由于養(yǎng)殖歷史較短，安格斯肉牛養(yǎng)殖技術(shù)水平有限，動物疾病問題日益凸顯，嚴重制約了安格斯肉牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。因此，本研究針對新疆南疆地區(qū)部分集約化安格斯肉牛繁育場常見疾病發(fā)生現(xiàn)狀和主要生物安全問題開展調(diào)查，以期為該地區(qū)集約化肉牛養(yǎng)殖場制定科學合理的生物安全防控措施提供依據(jù)，從而保障養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。

1 調(diào)查時間、地點及對象

2021 年對新疆南疆喀什地區(qū)4 個集約化安格斯肉牛繁育場開展調(diào)查。

2 調(diào)查方法及內(nèi)容

2.1 調(diào)查

采用現(xiàn)場調(diào)查、問卷調(diào)查和牧場疾病診療記錄查閱相結(jié)合的方法，對牧場肉牛主要疾病臨床癥狀、防疫軟硬件建設、人流物流管控、獸醫(yī)技術(shù)力量，以及牧工家庭養(yǎng)殖背景、飼養(yǎng)管理、鼠害蠅害防控、無害化處理等進行調(diào)查。

2.2 實驗室檢測

2.2.1 樣品采集 分別于2021 年1、5、7 月，采集4 個牛場1 月齡患病犢牛肛拭子和鼻拭子，參考動物流行病學調(diào)查相關(guān)規(guī)程和方法[13-14]，按每場出現(xiàn)臨床癥狀犢牛5%以上的比例采樣進行實驗室診斷。

2.2.2 實驗室檢測 采用PCR 方法，對采集的296 份肛拭子樣品，檢測4 種腹瀉相關(guān)病毒——牛諾如病毒（bovine norovirus，BNoV）、牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛冠狀病毒（bovine coronavirus，BCV）和牛輪狀病毒（bovine rotavirus，BRV）；對采集的170 份鼻拭子樣品，檢測4 種肺炎相關(guān)病毒——牛傳染性鼻氣管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis，IBRV）、牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛腺病毒3 型（bovine adenovirus 3，BAV-3）和牛副流感病毒3 型（bovine parainfluenza virus type 3，BPIV-3）。病毒基因組DNA 快速提取試劑盒，購自Omega Bio-Tek 公司；DL 2000 DNA Marker、2×TaqPCR Master Mix 瓊脂糖，均購自天根生物有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（prime script RT reagent kit），購自大連寶生物工程有限公司；Trizol，購 自Invitrogen；Hifair?III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（gDNA digester plus），購自翌圣生物科技（上海）有限公司。

2.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

運用Excel 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，對主要疾病臨床癥狀、病原檢測以及牧工家庭養(yǎng)殖背景調(diào)查結(jié)果進行定量（百分比）統(tǒng)計分析，對其他調(diào)查結(jié)果進行定性描述。

3 調(diào)查結(jié)果

3.1 主要疾病臨床癥狀

從4 個牧場的疾病記錄來看，各場的總患病頭數(shù)分別為1 533、1 667、1 647 和970 頭，平均患病率分別為66.36%、74.39%、81.69%和30.68%；出現(xiàn)的癥狀主要有腹瀉、肺炎、眼疾、弱犢、營養(yǎng)不良、腹痛，其中前5 種癥狀占總臨床癥狀的95%以上（表1）。在有疾病臨床癥狀的犢牛群中，腹瀉癥狀在各繁育場占比均較高，其次是肺炎，其他癥狀占比均較低。

3.2 主要病原檢測

檢測結(jié)果（表2）顯示，BCV、BNoV、BVDV 和BRV 的陽性檢出率分別為19.93%、15.20%、0.03% 和0.01%，IBRV、BAV-3、BVDV和BPIV-3 的陽性檢出率分別為28.24%、14.12%、7.06%和5.88%。結(jié)果表明，BCV 和BNoV 是引起犢牛腹瀉的主要病原，IBRV 和BAV-3 是引起犢牛肺炎的主要病原。

3.3 生物安全調(diào)查

3.3.1 消毒防疫硬件建設 在消毒防疫硬件建設方面，各牧場均存在基礎設施設備不齊全，未嚴格區(qū)分凈道和污道，獸醫(yī)診療室配置不完整等問題。其中：4 個牧場的正門均缺少車輛消毒池和高壓水槍，車輛進出時只能進行噴霧消毒；部分場區(qū)缺乏消毒間及紫外線更衣室，人員消毒通道深度過淺，長度較短；消毒通道內(nèi)噴霧裝置運行不暢，冬季寒冷時易結(jié)冰；各牧場均未嚴格設定凈道和污道。各牧場消毒設施設備配備情況見表3。各牧場獸醫(yī)診療室基礎配置不完整，基本的疾病診療、消毒防疫設施設備匱乏，無法開展免疫效果檢測、藥物敏感性試驗等。缺乏高壓滅菌設備，無法對有害物、手術(shù)器械等實施高壓滅菌處理。圖1 為部分缺乏的設施設備。

表3 各牧場消毒設施設備配備情況

3.3.2 人流、物流消毒情況 牧場環(huán)境及圈舍的消毒程序不規(guī)范，缺乏相應的檢查制度，存在消毒隨意性大、消毒藥物單一和消毒前圈舍清潔不徹底等問題。生產(chǎn)區(qū)內(nèi)有飼養(yǎng)人員串圈舍行為，且進出圈舍未經(jīng)嚴格消毒。另外，門衛(wèi)的消毒程序流于形式，外來人員和返場牧工以及外來車輛進入場區(qū)時，未嚴格消毒，甚至未消毒就進入場區(qū)。

3.3.3 牧工家庭畜禽養(yǎng)殖背景 對牧場169 名牧工的家庭畜禽養(yǎng)殖背景以問卷形式進行調(diào)查。結(jié)果（表4）顯示：接近半數(shù)的牧工家庭中飼養(yǎng)畜禽，其中飼養(yǎng)牛、羊的接近90%，62.67%牧工對存在的動物疫病不了解，54.67%的牧工回家后直接接觸畜禽，還有部分牧工回家和返場后不嚴格消毒，不洗澡更換衣物。

表4 牧工家庭畜禽養(yǎng)殖背景調(diào)查結(jié)果

3.3.4 獸醫(yī)技術(shù)人員 牧場獸醫(yī)技術(shù)人員數(shù)量不足，各獸醫(yī)人員對應預防和治療的牛只數(shù)量較多，人均超過600 頭，且技術(shù)人員的獸醫(yī)專業(yè)知識水平參差不齊。各牧場獸醫(yī)人員配備情況見表5。

表5 各牧場獸醫(yī)技術(shù)人員配備情況

3.3.5 牧工生物安全意識 牧場牧工大多數(shù)為當?shù)剞r(nóng)民，文化程度較低，專業(yè)知識匱乏，對規(guī)?；B(yǎng)殖場的操作規(guī)范熟練程度較低，消毒防疫意識淡薄，很多牧工家中飼養(yǎng)畜禽或有飼養(yǎng)畜禽的經(jīng)歷，習慣于自家散養(yǎng)方式，主動嚴格執(zhí)行消毒程序的意識不高。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)牧工對消毒不重視，消毒程序不規(guī)范。場區(qū)工作人員進出生產(chǎn)區(qū)時，不執(zhí)行嚴格消毒程序，有些為了方便甚至繞過消毒通道直接進入生產(chǎn)區(qū)，部分牧工從生產(chǎn)區(qū)返回到生活區(qū)時不更換衣服、鞋帽。

3.3.6 飼養(yǎng)與管理情況 （1）規(guī)章制度建設。牧場的人員管理、車輛管理、消毒管理、飼養(yǎng)管理、防鼠防蟲管理、用藥管理、檔案管理等各項管理制度普遍不健全，并且存在制度措施落實不到位問題。（2）飼料及衛(wèi)生清理。部分青貯窖頂層存在約15 cm 厚的青貯飼料霉變現(xiàn)象（圖2-A），飼喂時不清理干凈，就與正常青貯飼料混合飼喂；圈舍清理不及時、不徹底，可見死亡、流產(chǎn)胎兒，胎衣隨意丟棄（圖2-B），圈舍水槽沒有定期清洗、換水。（3）犢牛初乳管理。對安格斯初產(chǎn)母牛初乳產(chǎn)量進行抽樣測定評估（n=20）發(fā)現(xiàn)，初產(chǎn)母牛初乳平均產(chǎn)量為731 mL，但個體差異變化范圍較大，為160～4 050 mL（圖3），提示部分安格斯母牛初乳產(chǎn)量不高，導致新生犢牛初乳攝入不足，而牧場又缺乏相應的犢牛初乳補飼管理技術(shù)措施。

3.3.7 鼠害蠅害情況 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場存在老鼠、蚊蠅以及鳥類等有害生物入侵現(xiàn)象。在生活區(qū)、精料庫和圈舍內(nèi)均有老鼠出沒的蹤跡，精料庫內(nèi)可見部分精料袋被老鼠咬破（圖4-A）。夏、秋季節(jié)，在生活區(qū)、圈舍、獸醫(yī)室等場所蚊蠅較多（圖4-B）。牧場缺少防鳥設施設備，鳥類可自由出入牧場，在生活區(qū)、生產(chǎn)區(qū)和牛舍運動區(qū)自由飛行。

3.3.8 糞污清理及無害化處理情況 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，場內(nèi)工作人員忽視對養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生的控制和改善，對圈舍及運動場清理不充分，對糞尿混合物清理不及時，導致圈舍、活動場內(nèi)的糞便堆積嚴重，衛(wèi)生環(huán)境較差，存在疫病傳播風險。各牧場的無害化處理方式均為直接深埋，處理方式單一；牧場對病死牛尸體處理不規(guī)范，病死牛隨意放置（圖5）；掩埋點距離場區(qū)較近且處理區(qū)域無標識；病死牛無害化處理過程中，操作人員未做好防護措施。

4 討論

4.1 引發(fā)腹瀉、肺炎的主要病毒流行情況

BCV、BNoV、BVDV 等是導致犢牛腹瀉的主要病毒，感染程度因國家、區(qū)域、牛種類（奶?；蛉馀＃┮约霸\斷技術(shù)不同而異。Lorenzetti 等[15]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，巴西肉牛BCV 牛群感染率達61.5%；劉蓉菁等[16]研究發(fā)現(xiàn)，我國新疆、青海、西藏等地區(qū)牛群BCV 感染率普遍較高，平均血清抗體陽性率達80%以上。2003 年以來，相繼被證實BNoV是美洲、非洲和亞洲地區(qū)導致犢牛腹瀉的重要病毒[17]。Guo 等[18]2018 年首次報道在我國牛群中檢測出BNoV。BVDV 在世界范圍內(nèi)均有分布，牛群感染風險較高，自20 世紀90 年代以來，歐洲許多國家的BVDV 陽性率平均在50%以上[19]。王新平等[20]對國內(nèi)不同地區(qū)的牛群糞樣進行BVDV 檢測，發(fā)現(xiàn)感染率為16.5%～89.0%，表明我國某些地區(qū)BVDV 感染率較高。BVDV 不僅引起犢牛腹瀉，還與牛呼吸道和生殖疾病相關(guān)[21]。引發(fā)牛呼吸道疾病綜合癥（bovine respiratory disease complex，BRDC）的病毒性病原包括IBRV、BAV-3 和BPIV-3 等[22-23]。BRDC 常導致奶牛產(chǎn)奶量降低，肉牛胴體品質(zhì)下降，犢牛肺炎發(fā)病率和死亡率上升，治療成本增加，給全球養(yǎng)牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失[24]。本研究所調(diào)查的喀什地區(qū)4 個牧場為2018年新建的安格斯肉牛繁育場，當年開始從澳大利亞引進安格斯牛，所有引進的肉牛均經(jīng)過嚴格的海關(guān)檢疫和隔離檢疫，為無疫牛群。而本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場均有腹瀉、肺炎等臨床癥狀的犢牛出現(xiàn)，且引起腹瀉的病毒以BCV 和BNoV 為主，引起肺炎的以IBRV 和BAV-3 為主。無疫牛群引入國內(nèi)后發(fā)生腹瀉和肺炎疾病，可能與國內(nèi)相關(guān)病原流行率較高，牧場基礎設施不完善，消毒防疫不到位，人員、物流管控不嚴等相關(guān)。

4.2 防控建議

4.2.1 完善牧場基礎設施 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，部分牧場缺少消毒池，消毒設備不完善，消毒更衣室配置不完整，缺少捕鼠、防鳥裝置等。由于當?shù)貤l件所限，牧場在建設時許多基礎設施尚未完善，這可能是導致牧場出現(xiàn)各種疾病的重要因素。建議牧場根據(jù)自身基礎設施建設情況，完善基礎設施配置。

4.2.2 加強管理和人員培訓，提高生物安全意識調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場的牧工多為當?shù)剞r(nóng)民，文化程度和專業(yè)知識水平較低，主動消毒防疫意識不高，同時牧場管理制度不健全，對牧工缺少培訓。牧工家庭畜禽養(yǎng)殖背景調(diào)查發(fā)現(xiàn)，近一半牧工家庭飼養(yǎng)牛、羊等家畜，其中一半以上牧工對自家飼養(yǎng)畜禽的健康狀況不了解，且在歸家后直接接觸畜禽，而且還存在部分牧工歸家返場不消毒、不更換衣物等行為。這些行為都可能是牧場疾病引入的原因。建議各牧場加強管理制度建設，定期進行人員培訓，嚴格落實安全防護措施，定期抽檢各牧場生物安全措施關(guān)鍵點的落實情況，查漏補缺，保護動物、環(huán)境和牧工自身的安全。

4.2.3 加強人流、物流管控與消毒 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牧場均存在人員、車輛、投入品進出消毒隱患。牧場正門的消毒流于形式，來訪人員及外來車輛未經(jīng)消毒即可出入牧場，牧工進出生產(chǎn)區(qū)不消毒或消毒不嚴格，在生產(chǎn)區(qū)內(nèi)頻繁串圈。這些行為都可能造成病原在牧場內(nèi)傳播。建議牧場加強牧工及外來人員管控，對人員、進出場車輛及投入品嚴格執(zhí)行消毒程序。

4.2.4 規(guī)范消毒和無害化處理程序 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，各牧場均缺乏規(guī)范的消毒程序，人員及車輛物流的消毒存在較大漏洞，這會對病原的引入或病原在牧場間的傳播帶來風險，也是導致犢牛腹瀉和肺炎等的重要因素。建議各牧場根據(jù)自身情況，制定適合本牧場的消毒程序和管理制度，確保牧場工作人員認真遵守并執(zhí)行到位。另外，各牧場存在處理方式單一、掩埋點距離場區(qū)較近、處理區(qū)域無標識等諸多無害化處理不規(guī)范問題，導致病原傳入風險較高。建議各牧場嚴格按照相關(guān)規(guī)程進行無害化處理。

4.2.5 建立合理的免疫方案 牧場在引入安格斯肉牛時，雖然進行了IBRV 免疫，但本次調(diào)查對有肺炎癥狀的犢牛進行病原檢測發(fā)現(xiàn)，IBRV 感染率較高，其他病原如BNoV、BCV、BAV-3 也存在較高的感染率。牧場未建立合理的免疫方案，可能是導致疫病發(fā)生的潛在原因。因此，各牧場應建立合理規(guī)范的免疫程序，加強疫病防控，降低疫病發(fā)生風險。

4.3 局限性

生物安全風險因子與動物患病或檢測結(jié)果之間存在一定關(guān)聯(lián)，但本研究未進行此方面的定量統(tǒng)計分析。下一步，需要對每個場的患病與健康動物群體進行單因素或多因素風險分析，找出生物安全的高風險環(huán)節(jié)和因素，“一場一策”制定對應的生物安全控制措施。同時，結(jié)合病原檢測結(jié)果，開展科學防治。

5 結(jié)論

新疆南疆地區(qū)安格斯肉牛繁育場的腹瀉和肺炎發(fā)病率較高，主要由BNoV、BCV、IBRV、BAV-3 等病原引發(fā)，其原因是牧場在防疫設施設備建設、消毒制度落實、人流物流管控、規(guī)章制度建設以及飼養(yǎng)管理、鼠害蠅害防控、無害化處理等生物安全控制方面存在隱患。因此，各牧場應針對病原流行情況和存在的生物安全問題，制定并實施合理的控制方案和確實可行的生物安全措施，控制腹瀉、肺炎等疾病的發(fā)生和流行，提高經(jīng)濟效益。