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    不育男性精漿硒與血清生殖激素、精漿生化及氧化應(yīng)激的相關(guān)性研究*

    2022-07-08 14:24:46鄧佩佩陳拽生王樹松
    中國男科學(xué)雜志 2022年2期
    關(guān)鍵詞:血清

    孫 博 馬 婧 鄧佩佩 陳拽生 王樹松,**

    1.河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院(石家莊 050017);2.河北省生殖健康科學(xué)技術(shù)研究院(國家衛(wèi)健委計劃生育與優(yōu)生重點實驗室/河北省生殖醫(yī)學(xué)重點實驗室)(石家莊 050051)

    硒是人體內(nèi)一種必需的微量元素,它以硒代半胱氨酸的形式結(jié)合到蛋白質(zhì)中形成硒蛋白,在維持人體新陳代謝中發(fā)揮必要的作用[1]。雖然在人體內(nèi)硒的含量很少,但它對于各種生物學(xué)功能至關(guān)重要,硒攝入量過多或過少都會不同程度地引起人體生理的異?;虬l(fā)生疾病。硒在男性生殖系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用,硒能促進睪酮合成并參與精子的發(fā)生及成熟等過程。硒可通過參與各種抗氧化酶的構(gòu)成和激活,增加體內(nèi)抗氧化能力,保護精子免受活性氧(ROS)的損傷,提高男性精液質(zhì)量[2]。男性不育癥一般認為夫婦未采用任何避孕措施同居生活1年以上,且因男方因素造成女方不孕者。目前男性不育患者精漿硒含量與精漿生化成分、抗氧化能力間關(guān)系的臨床研究未見報道。本研究分析了不育男性精漿中硒與血清生殖激素、精漿生化成分和氧化應(yīng)激等指標間的關(guān)系,以期探究硒在精漿微環(huán)境中的作用,為男性不育癥臨床診療提供參考。

    材料與方法

    一、病例選擇

    選擇2017年在本院門診就診的不育男性患者89例為研究對象。入組條件:年齡23~40歲,夫婦同居超過1年,未避孕,性生活正常,女方無不孕因素。排除條件:①有中度及重度精索靜脈曲張、無精子癥、性功能障礙、外生殖器異常、家族遺傳病史;②高溫或接觸有毒、有害物質(zhì)等有可能影響精子發(fā)生的職業(yè);③患有感染性疾病及其它全身性疾病;④長期服用微量元素藥物或保健食品者。研究對象兩次(及以上)留取精液檢測相關(guān)指標,根據(jù)患者精漿硒濃度三分位法分組:低硒組(<36.15μg/L)30例,中硒組(36.15-55.62μg/L)30例,高硒組(>55.62μg/L)29例。

    二、精液參數(shù)檢測

    所有研究對象禁欲2~7天行手淫法取精,留于無菌取精杯中,按照WHO《人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第5版)。所有精液標本經(jīng)離心10min,3000g離心后取精漿,將精漿分裝統(tǒng)一凍存于-80℃冰箱中以待檢測。

    三、精漿微量元素測定

    精漿硒濃度采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀(ICAP6000,Thermo公司)測定。

    四、血清生殖激素檢測

    研究對象空腹8~12h,清晨抽取外周靜脈血3~5mL置于采血管中,在室溫靜置凝固后離心分離血清,分裝統(tǒng)一凍存于-80℃冰箱中備用。用化學(xué)發(fā)光免疫法測定血清促卵泡生成素(FSH)、促黃體生成素(LH)、泌乳素(PRL)、雌二醇(E2)、睪酮(T)濃度。

    五、精漿左旋肉堿(LC)、堿性磷酸酶(AKP)、鋅(Zn)、果糖、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、端粒酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GSTs)、ROS含量檢測

    采用ELISA試劑盒(上海酶聯(lián)科技有限公司)進行測定,嚴格按照試劑盒說明書進行操作,反應(yīng)終止后,用酶標儀以450nm波長測量吸光度(OD值)。

    六、統(tǒng)計學(xué)方法

    使用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù),數(shù)據(jù)均為正態(tài)分布,用均數(shù)±標準差(±s)來表示。多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    一、精液質(zhì)量比較

    結(jié)果發(fā)現(xiàn),三組在禁欲時間、液化時間、精液量和精子濃度間無明顯差別(P>0.05),高硒組前向運動百分率(PR%)顯著高于中、低硒組(P<0.05),見表1。

    表1 三組研究對象精液參數(shù)比較

    二、血清生殖激素分析

    與低硒組相比,高硒組血清睪酮濃度明顯升高(P<0.05)。其它生殖激素間比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),見表2。

    表2 研究組研究對象血清生殖激素含量比較

    三、精漿生化指標分析

    與低硒、中硒組相比,高硒組精漿中LC、AKP濃度顯著增加(P<0.05);高、中硒組精漿中Zn含量明顯高于低硒組(P<0.05),高硒組精漿果糖明顯高于低硒組(P<0.05),見表3。

    表3 研究組精漿生化指標比較

    四、精漿抗氧化水平

    與低硒、中硒組相比,高硒組精漿中γ-GT、端粒酶和GSTs濃度均顯著增加(P<0.05)。三組精漿ROS間沒有明顯差異(P>0.05),見表4。

    表4 研究組精漿抗氧化水平比較

    五、相關(guān)性分析

    精漿中硒含量與血清T、精漿LC、精漿Zn、精漿AKP、精漿果糖、精漿γ-GT、精漿端粒酶和精漿GSTs含量呈顯著正相關(guān)(P<0.05),見表5。

    表5 精漿硒與檢測指標的相關(guān)性分析(相關(guān)系數(shù)R)

    討 論

    硒是維持人體正常生理功能所必需的一種微量元素,對男性生育力的維持起到非常重要的作用[3]。硒是精子正常發(fā)生的必需微量元素,硒主要是通過硒蛋白發(fā)揮生物學(xué)作用,谷胱甘肽過氧化酶4(GPX4)和硒蛋白P(SEPP11)是在精子發(fā)生過程中兩種主要的硒蛋白。GPX4具有很強的抗氧化作用,可清除脂質(zhì)過氧化物和氧自由基,保護精子免受氧化損傷。GPX4存在于生精細胞發(fā)育的各個階段,是精子發(fā)生過程中不可缺少的重要成分[3]。SEPP11主要是由肝臟合成的硒運輸?shù)鞍?,SEPP11與睪丸支持細胞上的相應(yīng)受體結(jié)合后將硒轉(zhuǎn)入,為精子發(fā)生所需的GPX4以及其他硒蛋白提供原料[4]。meta分析顯示,男性不育癥患者精漿硒含量降低,膳食補硒可以提高精漿硒含量[5]。有研究表明,當(dāng)機體攝入硒減少時,GPX4和SEPP11含量明顯降低,精子濃度和活力降低,精子畸形率升高,膳食中添加硒后可提高精液質(zhì)量,減輕精子損傷[6]。Morbat等[7]發(fā)現(xiàn)不育男性補充硒,可有效提高精子活力和精子濃度。本課題組前期的研究表明,隨著精漿硒濃度升高,精子活力增加,精漿抗氧化作用增強;精漿硒協(xié)同其它微量元素和生化物質(zhì)調(diào)控生殖微環(huán)境[8]。

    硒在調(diào)節(jié)男性睪酮合成中發(fā)揮著重要作用。睪酮是男性體內(nèi)最主要的雄激素,它主要由睪丸間質(zhì)細胞合成。硒在整個生殖系統(tǒng)都有分布,且睪丸硒含量最高。硒能夠有效地清除睪丸組織內(nèi)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激性物質(zhì),保護睪丸間質(zhì)細胞免受氧化損傷,調(diào)節(jié)細胞周期和凋亡相關(guān)基因的表達[9]。硒能夠激活Extracellular Signal-regulated protein Kinase,ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,提高類固醇合成急性調(diào)節(jié)蛋白、膽固醇側(cè)鏈裂解酶和17-羥基類固醇脫氫酶的表達,從而增強間質(zhì)細胞睪酮生成[10,11]。本研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)硒含量增加時,血清睪酮濃度升高;相關(guān)性分析表明精漿硒含量和血清睪酮水平呈顯著正相關(guān)。此外,張鳳鳳等[12]研究發(fā)現(xiàn),少弱精子癥患者血清硒、精漿硒含量均明顯低于精液質(zhì)量正常男性,兩組患者精漿硒與血清硒均呈顯著的正相關(guān)。說明臨床補硒可以促進睪酮的分泌,為不育男性患者補硒提供了依據(jù)。

    精液是由精子和精漿兩大部分組成,精漿為精子提供營養(yǎng)和能源以及適宜的生存環(huán)境。精漿是由前列腺液、精囊液、附睪液和尿道球腺分泌的少量液體組成,精漿中生化成分的變化能反映男性生殖系統(tǒng)中附屬性腺的功能。精漿左旋肉堿和果糖主要與能量代謝相關(guān),精漿左旋肉堿主要由附睪分泌,可轉(zhuǎn)運脂肪酸進入線粒體進行氧化分解,為精子代謝提供能量,當(dāng)附睪發(fā)生炎癥時,精漿中左旋肉堿含量會下降,可導(dǎo)致精子存活率和活力下降[13]。精漿果糖是精子的主要供能物質(zhì),其含量可用于判斷精囊腺功能,當(dāng)精囊發(fā)生炎癥或發(fā)育不全時,精漿果糖含量下降。精漿Zn主要來源于前列腺,是評估前列腺功能的最可靠的指標之一,當(dāng)前列腺發(fā)現(xiàn)炎癥或癌變時,精漿鋅中含量明顯降低[14]。精漿AKP主要來自附睪,主要在調(diào)節(jié)精子獲能方面發(fā)揮作用,精漿中AKP可防止精子在射精之前獲能,提高受精能力[15,16]。本研究中發(fā)現(xiàn),精漿中硒含量升高時,精漿LC、Zn、AKP和果糖的含量也同時升高,精漿中硒含量與精漿中LC、Zn、AKP和果糖含量具有相關(guān)性。結(jié)果表明,隨著精漿中硒含量增加,不育男性生殖系統(tǒng)中附屬性腺功能得到提高。

    精液中抗氧化作用與精子功能和受精能力有關(guān),精漿被認為是保護精子細胞免受氧化損傷的抗氧化劑的主要來源??寡趸到y(tǒng)通過酶法和非酶法消除ROS,以維持細胞中穩(wěn)定的過氧化物含量。本研究所檢測的γ-GT和GSTs均是GSH代謝過程中的關(guān)鍵酶,能反映精漿抗氧化水平。其中γ-GT為谷胱甘肽(GSH)代謝的關(guān)鍵酶,在保護精子免受氧化應(yīng)激損傷和對抗自由基中發(fā)揮重要作用[17,18]。Burnham等[19]發(fā)現(xiàn),補充硒可顯著提高γ-GT的含量,提高抗氧化水平。本研究發(fā)現(xiàn)高硒組患者精漿中γ-GT含量最高,硒與γ-GT含量呈正相關(guān)。GSTs是參與GSH結(jié)合反應(yīng)過程中關(guān)鍵酶[20],GSTs可通過催化細胞外的GSH消除親電子化合物,從而防止精子質(zhì)膜過氧化,提高精液質(zhì)量[21,22]。硒可直接增加GSTs的產(chǎn)生,提高機體抗氧化能力[23]。本研究發(fā)現(xiàn),男性不育患者精漿中硒含量與精漿γ-GT和GSTs含量呈正相關(guān)。因此,男性不育患者精漿中硒濃度增加,可提高精漿抗氧化能力,發(fā)揮對精子的保護作用。

    在男性生殖系統(tǒng)內(nèi),端粒酶主要表達在增殖分化能力很強的生精細胞中,端粒酶含量與精子數(shù)量間存在相關(guān)性[24]。硒通過抗氧化作用保護生精細胞中端粒免受氧化損傷,維持端粒酶的活性,促進生精細胞不斷分裂,從而促進精子發(fā)生[25]。本研究發(fā)現(xiàn),男性不育患者精漿中硒含量與精漿端粒酶含量呈正相關(guān)。提示硒可通過其抗氧化作用來促進端粒酶的表達,進而提高精液質(zhì)量。

    硒是人類的必需元素,人體含量與一些疾病的發(fā)生間存在著U型曲線,硒過高或過低都會造成損傷。Zhou等人[6]研究發(fā)現(xiàn),飲食中硒含量過高會導(dǎo)致大鼠睪丸中GPX4 mRNA表達水平降低,精液質(zhì)量下降。硒在人體內(nèi)從有益到有害的閾值較低,僅差1~2個數(shù)量級,因此對體液硒濃度的監(jiān)測尤為重要。根據(jù)現(xiàn)有資料,血液硒的適宜范圍應(yīng)為80~120μg/L,輕度低于上述值(60~80μg/L)和輕度高于上述值(120~140μg/L)為亞適狀態(tài),血硒含量嚴重低于上述值(>60μg/L)的低硒人群或者嚴重高于上述值(<140μg/L)的高硒人群都易導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生[26,27]。所以臨床補硒時,需要根據(jù)膳食中硒含量和人體內(nèi)的血硒水平,對補硒量及持續(xù)時間進行考慮,及時監(jiān)測血漿硒和精漿硒含量,防止補硒不當(dāng)造成的危害。

    綜上所述,男性不育患者精漿中硒含量與血清睪酮水平、精漿生化水平、氧化應(yīng)激水平存在明顯的相關(guān)性,硒含量與精漿微環(huán)境密切相關(guān),提高精漿硒含量改善不育男性精液質(zhì)量,為男性不育癥臨床補硒提供了依據(jù)。雖然臨床補充營養(yǎng)素有益于男性不育的治療,但男性不育的原因復(fù)雜,臨床補硒需要開展精準醫(yī)學(xué)研究,重點研究硒對男性生殖作用的臨床生物標志物,特別是臨床補硒的劑量、持續(xù)時間和療效評價等,需要多中心大樣本量的臨床觀察進行驗證。

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