基于化學(xué)特征和核心功效的經(jīng)典名方清胃散中地黃炮制品研究

王 敏，劉歡歡，張 婷，于銀萍，潘金火，季 德，蘇聯(lián)麟，陸兔林，李 林*，程曉莉

基于化學(xué)特征和核心功效的經(jīng)典名方清胃散中地黃炮制品研究

王 敏1，劉歡歡1，張 婷1，于銀萍1，潘金火1，季 德1，蘇聯(lián)麟1，陸兔林1，李 林1*，程曉莉2*

1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023 2. 江蘇連云港市中醫(yī)院 中藥房，江蘇 連云港 222000

辨析地黃不同炮制品（鮮地黃、生地黃、干地黃、酒地黃、熟地黃）的化學(xué)特征，結(jié)合經(jīng)典名方清胃散的核心功效，明確其地黃的炮制方法和炮制品種，為中藥新藥的開(kāi)發(fā)和中藥臨床的合理應(yīng)用提供參考。采用液質(zhì)聯(lián)用法和液相色譜法對(duì)地黃不同炮制品中的共有成分和特有成分進(jìn)行定性和定量分析。運(yùn)用現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選和分析地黃的成分作用靶點(diǎn)和通路，構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)一步預(yù)測(cè)地黃的化學(xué)成分和核心功效的相關(guān)性。在地黃的不同炮制品中共鑒定出55個(gè)成分，其中26個(gè)為5種地黃炮制品共有，鮮地黃經(jīng)炮制后，大部分化學(xué)成分的含量有不同程度的下降，其中干地黃的環(huán)烯醚萜類成分下降幅度最小。采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)焦地黃素D、桃葉珊瑚苷、益母草苷、梓醇、地黃苷A、地黃苷D、連翹酯苷、6---阿魏?；罟遣荽歼M(jìn)行機(jī)制預(yù)測(cè)，富集的通路中環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）信號(hào)通路、乙型肝炎、血清素突觸、缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxiainduciblefactor-1，HIF-1）信號(hào)通路等與清熱作用相關(guān)。干地黃的化學(xué)特征與鮮地黃最為相似，藥性和功效與清胃散中地黃的核心功效最為接近，故干地黃為清胃散中地黃的最適宜炮制品。

地黃；經(jīng)典名方；清胃散；炮制；清熱；化學(xué)特征；核心功效；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)；環(huán)烯醚萜類；焦地黃素D；桃葉珊瑚苷；益母草苷；梓醇；地黃苷A；地黃苷D；連翹酯苷；6---阿魏酰基筋骨草醇；cAMP信號(hào)通路；乙型肝炎；血清素突觸；HIF-1信號(hào)通路

國(guó)家中醫(yī)藥管理局頒布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中“清胃散”出自李東垣《蘭室秘藏》（卷中·口齒咽喉門(mén)）：“治因服補(bǔ)胃熱藥，致使上下牙疼痛不可忍，牽引頭腦，滿面發(fā)熱大痛……當(dāng)歸身，擇細(xì)黃連（如連不好，更加二分，夏月倍之），生地黃（酒制，以上各三分），牡丹皮（五分），升麻（一錢）”?，F(xiàn)代臨床主要用于治療胃火牙痛、口腔潰瘍、口臭、牙周炎等疾病，方中生地黃為臣藥，協(xié)助黃連清胃，其核心功效為清熱養(yǎng)陰、除血中伏火，酒制后，可引藥上行，清頭面部之熱。

地黃藥材為玄參科地黃屬植物地黃Libosch.的新鮮或干燥塊根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。地黃飲片的功效隨著炮制方法的不同而不同，傳統(tǒng)炮制大多采用黃酒、陳皮、砂仁等輔料，以蒸、煮、燉等水火共制為主。清胃散首載于金代李東垣《脾胃論》，是由升麻、黃連、當(dāng)歸、生地黃、牡丹皮組成，其中地黃記載為“真生地黃”，具有清胃涼血之功，主治胃中積熱、牙痛牽引頭痛、面頰發(fā)熱之效。鮮地黃始載于明代李中立的《本草原始》，明代以前生、鮮地黃名稱混淆嚴(yán)重，徐軍等[1]和王軍等[2]通過(guò)對(duì)歷代本草著作進(jìn)行梳理，認(rèn)為清胃散中的生地黃應(yīng)為鮮地黃。

經(jīng)典名方的開(kāi)發(fā)研究原則上需要“以古籍記載的制備方法為依據(jù)”，而歷代關(guān)于地黃炮制的方法和品種主要有3種，一是《雷公炮炙論》中短時(shí)間酒蒸法炮制的干地黃，二是《歷代中藥炮制法匯典》和部分地方炮制規(guī)范中酒炙法炮制的酒地黃，三是《中國(guó)藥典》中長(zhǎng)時(shí)間酒燉法炮制的熟地黃。地黃中主要含有環(huán)烯醚萜類、苯乙醇苷類、糖類其他類化合物等[3]，經(jīng)炮制后數(shù)量和含量發(fā)生變化[4-5]，其中環(huán)烯醚萜類成分具有清熱、抗菌、抗病毒以及抗癌作用[6-7]，苯乙醇苷類具有神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)和酶抑制作用[8-9]。地黃作為經(jīng)典名方清胃散中的臣藥，具體酒制的方法和飲片品種尚未明確，給產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究帶來(lái)了極大的阻礙。本實(shí)驗(yàn)在前期文獻(xiàn)研究和工藝研究的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)分析地黃不同炮制品的化學(xué)特征，并結(jié)合現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)，探索清胃散中地黃的核心功效關(guān)聯(lián)物質(zhì)，旨在為中藥經(jīng)典名方的開(kāi)發(fā)和中藥臨床的合理應(yīng)用提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AB Sciex Triple TOFTM 5600＋，美國(guó)AB Sciex公司；Waters Aquity UPLC，美國(guó)Waters公司；MS- 105D型電子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 材料

新鮮地黃采收于山西運(yùn)城、河南武陟、河南溫縣，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)劉訓(xùn)紅教授鑒定，為玄參科地黃屬植物地黃Libosch.的新鮮塊根；黃酒購(gòu)自紹興女兒紅釀酒有限公司；對(duì)照品梓醇（批號(hào)RFS-Z00511803015，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、地黃苷D（批號(hào)RFS-D08402007022，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、益母草苷（批號(hào)RFS-Y22002004018，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、毛蕊花糖苷（批號(hào)RFS-M01102002025，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）均購(gòu)自成都瑞芬思生物科技有限公司；甲酸、磷酸（分析純），甲醇（色譜純），乙腈（質(zhì)譜純），均購(gòu)自南京晚晴化玻儀器有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 地黃不同飲片的炮制和性狀

2.1.1 飲片的炮制

（1）鮮地黃：參照《中國(guó)藥典》2020年版地黃項(xiàng)下鮮地黃要求，取采收的新鮮地黃，除去蘆頭、須根及泥沙雜質(zhì)。

（2）干地黃：參照《雷公炮炙論》中地黃酒蒸的炮制方法，取鮮地黃，洗凈，去皮，置蒸籠中蒸至透心，放涼，加適量黃酒拌勻，悶潤(rùn)至黃酒被吸盡，置蒸籠中蒸制1 h，于70 ℃干燥，切厚片，取出放涼，干燥（每100 kg去皮鮮地黃用黃酒6 kg）。

（3）生地黃：參照《中國(guó)藥典》2020年版地黃項(xiàng)下生地黃要求，取鮮地黃，置烘箱50 ℃烘48 h后，升溫至70 ℃繼續(xù)烘至無(wú)硬心，再將溫度降至40 ℃烘至地黃表面發(fā)硬，取出，用麻袋蓋嚴(yán)發(fā)汗，使內(nèi)部水分往外滲出至表里干濕一致，40 ℃干燥至地黃全身發(fā)軟，手握表面發(fā)硬，取出，放涼，得生地黃藥材。切厚片，得生地黃飲片。

（4）酒地黃：參照《歷代中藥炮制法匯典》（現(xiàn)代部分）地黃項(xiàng)下酒炙的炮制方法，取生地黃飲片，加適量黃酒拌勻悶潤(rùn)至酒盡，置熱鍋內(nèi)用文火炒至微焦為度，取出，放涼（每100 kg生地黃飲片，用黃酒12 kg）。

（5）熟地黃：參照《中國(guó)藥典》2020年版酒燉法項(xiàng)下要求，取生地黃飲片，置適宜容器內(nèi)，加適量黃酒，密閉后燉至酒被吸盡，顯烏黑光澤，味轉(zhuǎn)甜，取出，晾至外皮的粘液稍干時(shí)，切厚片，60 ℃干燥，晾涼（每100 kg生地黃，用黃酒30 kg）。

2.1.2 飲片的性狀 鮮地黃（圖1-A）呈紡錘形或條狀，外皮薄，表面淺紅黃色，具彎曲的縱皺紋、芽痕、橫長(zhǎng)皮孔及不規(guī)則疤痕。肉質(zhì)，易折斷，切面淡黃白色，可見(jiàn)橘紅色油點(diǎn)，中部有放射狀紋理。氣微，味微甜、微苦。干地黃飲片（圖1-B）呈類圓形厚片。表面為黃棕色，質(zhì)硬，有光澤。不易折斷，斷面棕黃色，導(dǎo)管呈放射狀排列。氣微，味微甜、微苦，微有酒氣。生地黃飲片（圖1-C）呈類圓形厚片，表面棕黑色或?yàn)鹾谏泄鉂?，油?rùn)黏性，中心部隱現(xiàn)菊花心紋理。皺縮，質(zhì)硬。氣微，味微甜。酒地黃飲片（圖1-D）呈類圓形的厚片，表面棕黑色或?yàn)鹾谏?，有焦斑，有光澤，有光澤，中心部呈隱現(xiàn)菊花心紋理，有焦苦味。質(zhì)脆，味甜，微有酒氣。熟地黃飲片（圖1-E）呈類圓形的厚片，表面烏黑發(fā)亮，質(zhì)滋潤(rùn)而柔軟，易黏連。味甜，微有酒氣。

2.2 地黃不同飲片成分測(cè)定

2.2.1 液質(zhì)分析條件 UPLC-Q-TOF/MS液相色譜條件：色譜柱為Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脫：0～5 min，5%～15%乙腈；5～20 min，15%～20%乙腈；20～25 min，20%～100%乙腈；體積流量0.6 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣體積5 μL。掃描模式：正離子模式和負(fù)離子模式，毛細(xì)管溫度325 ℃，離子源電壓4500 V，噴霧氣壓379.21 kPa（55 psi），去簇電壓：?60 V，加熱氣壓379.21 kPa（55 psi），離子源溫度550 ℃，一級(jí)質(zhì)譜掃描范圍/100～1500，二級(jí)質(zhì)譜激活類型CID。

圖1 地黃不同飲片圖

2.2.2 色譜條件

（1）色譜條件1：Acquity UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相0.1%甲酸水溶液-乙腈；梯度洗脫程序：0～10 min，1%～1.2%乙腈；10～12 min，1.2%～3%乙腈；12～17 min，3%～5%乙腈；17～18 min，5%～8%乙腈；18～24 min，8%～12%乙腈；24～29 min，12%～13%乙腈；29～36 min，13%～15%乙腈；36～40 min，15%～20%乙腈；40～45 min，20%～22%乙腈；45～50 min，22%～100%乙腈；體積流量0.6 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為210、334 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量6 μL。

（2）色譜條件2：Acquity UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（5∶95）；體積流量0.6 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量2 μL。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取梓醇對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成含梓醇2.175 mg/mL的對(duì)照品溶液；取地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成分別含地黃苷D 2.020 mg/mL、益母草苷2.012 mg/mL、毛蕊花糖苷2.010 mg/mL的對(duì)照品溶液。取對(duì)照品（各對(duì)照品溶液制備相同）約1.0 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度處，搖勻后制備成0.1 mg/mL的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密稱取梓醇、地黃苷D、益母草苷和毛蕊花糖苷各單一對(duì)照品儲(chǔ)備液等量，混勻，加甲醇稀釋后制成混合對(duì)照品溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 同《中國(guó)藥典》2020年版地黃中含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定梓醇時(shí)樣品制備方法。

2.2.5 線性關(guān)系考察 依次取“2.2.3”項(xiàng)下梓醇、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷對(duì)照品溶液按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰峰面積，以對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到梓醇、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷的回歸方程及其線性范圍分別為梓醇＝6 071 646－113 505，2＝0.999 3，線性范圍為0.043 5～2.175 mg/mL；地黃苷D＝636 204＋20 609，2＝0.999 0，線性范圍為0.040 4～2.020 mg/mL；益母草苷＝607 711－4 663.8，2＝0.999 1，線性范圍為0.040 2～2.012 mg/mL；毛蕊花糖苷＝12 890 737－35 453，2＝0.999 7，線性范圍為0.040 2～2.010 mg/mL。

2.3 質(zhì)譜分析結(jié)果

取供試品溶液，按照UPLC-Q-TOF/MS液相色譜條件和質(zhì)譜條件進(jìn)行進(jìn)樣分析。根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜精確相對(duì)分子質(zhì)量信息，經(jīng)ChemSpider數(shù)據(jù)庫(kù)和本地化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行匹配，初步推測(cè)分子信息。Peakview1.2軟件與二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)匹配篩查，設(shè)置“匹配度≥80%、質(zhì)量誤差絕對(duì)值≤1.0×10?5”，并根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，共鑒定出55個(gè)化學(xué)成分，化合物詳細(xì)信息見(jiàn)表1，地黃不同飲片質(zhì)譜總離子流圖見(jiàn)圖2。

鮮地黃中鑒定出42個(gè)成分，其中包含16個(gè)環(huán)烯環(huán)烯醚萜類化合物，5個(gè)糖類化合物，17個(gè)苯乙醇苷類化合物，2個(gè)氮苷類化合物，1個(gè)氨基酸類化合物和1個(gè)黃酮類化合物；干地黃中鑒定出34個(gè)成分，其中包含17個(gè)環(huán)烯醚萜類化合物，4個(gè)糖類化合物，10個(gè)苯乙醇苷類化合物，2個(gè)氮苷類化合物和1個(gè)氨基酸類化合物；生地黃中鑒定出36個(gè)成分，其中包括11個(gè)環(huán)烯醚萜類化合物，7個(gè)糖類化合物，15個(gè)苯乙醇苷類化合物，2個(gè)氮苷類化合物和1個(gè)氨基酸類化合物；酒地黃中鑒定出42個(gè)成分，其中包括12個(gè)環(huán)烯醚萜類化合物，7個(gè)糖類化合物，16個(gè)苯乙醇苷類化合物，2個(gè)氮苷類化合物，2個(gè)氨基酸類化合物，1個(gè)呋喃醛衍生物，1個(gè)黃酮類化合物和1個(gè)非黃酮類多酚；熟地黃中鑒定出35個(gè)成分，其中包括13個(gè)環(huán)烯醚萜類化合物，7個(gè)糖類化合物，11個(gè)苯乙醇苷類化合物，2個(gè)氮苷類化合物，1個(gè)氨基酸類化合物和1個(gè)呋喃醛衍生物。其中有26個(gè)成分為5種飲片所共有，如梓醇、地黃苷D、益母草苷、毛蕊花糖苷、連翹酯苷等，非共有成分中，有11個(gè)為單種飲片所獨(dú)有，鮮地黃獨(dú)有成分為cistanoside F和京尼平，干地黃獨(dú)有成分為桃葉珊瑚苷和焦地黃素D，生地黃獨(dú)有成分為葡萄糖胺、二氫馬鞭草苷和焦地黃素E，酒地黃獨(dú)有成分為3′-- β--吡喃葡萄糖基-梓醇和白藜蘆醇，熟地黃獨(dú)有成分為龍膽酸?？傮w來(lái)說(shuō)，鮮地黃、干地黃、生地黃、酒地黃所含成分，相似度較大，而熟地黃與另外4種飲片差異較大。鮮地黃炮制成生地黃、酒地黃、熟地黃過(guò)程中，環(huán)烯醚萜類成分的數(shù)量明顯減少，而干地黃中此類成分的損失則較少。除了桃葉珊瑚苷、焦地黃素D 2個(gè)獨(dú)有的成分外，其他均為與鮮地黃共有的成分。

表1 地黃不同飲片所含化學(xué)成分信息

Table 1 Information table of chemical components contained in processed products of RR

編號(hào)tR/min模式準(zhǔn)分子離子理論值(m/z)實(shí)測(cè)值(m/z)誤差/(×10?6)碎片離子分子式名稱來(lái)源 鮮地黃干地黃生地黃酒地黃熟地黃 10.67 ?[M－H]?665.214 58665.214 53?0.1 485.150 8, 383.117 7, 341.107 9C24H42O21水蘇糖[10]√√√√√ 20.67 ?[M－H]?827.267 41827.268 140.9 545.173 2, 383.119 2, 179.055 1C30H52O26毛蕊花糖[11]√ √√ 30.68 ?[M－H]?665.208 71665.214 448.6 485.150 8, 383.117 1, 341.107 9C31H38O162′-acetylacteoside[12]√ √√ 40.68 ?[M－H]?503.161 76503.161 13?1.2 221.063 9, 179.054 5, 161.045 0, 89.024 5C18H32O16甘露三糖 √ √ 50.68 ?[M－H]?503.161 76503.161 760.0 383.117 0, 341.105 6, 323.098 6,281.085 8, 221.063 9C18H32O16棉籽糖[11]√√√√√ 60.71 ?[M－H]?179.056 11179.056 06?0.3 89.023 9, 71.016 0, 59.018 1C6H12O6D-果糖[13] √√ 70.73 ?[M－H]?341.108 94341.109 271.0 179.054 2, 161.043 4, 119.035 0C12H22O11蔗糖√√√√√ 80.74 ?[M－H]?341.108 94341.108 91?0.1 179.054 1, 161.041 6, 143.032 2C12H22O11蜜二糖√√√√√ 90.75 ?[M－H]?179.056 11179.056 06?0.3 89.023 9, 71.016 0, 59.018 1C6H12O6葡萄糖[13] √√ 100.98 ?[M－H]?361.114 02361.114 010.0 199.059 8, 169.049 0C15H22O10梓醇[13]√√√√√ 111.00 +[M＋H]+268.104 03268.104 491.7 136.063 6, 119.036 0C10H13N5O4腺苷√√√√√ 121.01 ?[M－H]?361.114 02361.114 010.0 199.058 9, 169.049 0, 151.038 1C15H22O10單密力特苷[14]√√ √√ 131.02 ?[M－H]?397.090 70397.090 64?0.2 361.108 4, 199.058 4C15H23O10Cl氯化梓醇[15]√√ √ 141.04 +/?[M－H]?282.084 39282.084 19?0.7 150.041 2, 133.014 6, 108.019 9C10H13N5O5鳥(niǎo)苷[16]√√√√√ 151.08 +/?[M－H]?130.087 35130.087 531.3 88.039 4C6H13NO2亮氨酸√√√√ 161.21 ?[M－H]?523.166 84523.166 41?0.8 505.156 7, 361.113 0, 343.100 6,323.096 8C21H32O153′-O-β-D-吡喃葡萄糖基-梓醇 √ 171.40 ?[M－HCOO]?445.170 44445.171 051.4 119.035 6, 89.026 4C21H30O13castanoside F[17-18]√ 181.43 +/?[M－H]?523.166 84524.166 41?0.8 505.156 7, 361.113 0, 343.100 6, 323.096 8C21H32O15地黃苷A[13]√√√√√ 191.44 +/?[M－H]?685.219 67685.220 351.0 505.157 4, 341.108 9, 221.065 7C27H42O20地黃苷D[19]√√√√√

續(xù)表1

編號(hào)tR/min模式準(zhǔn)分子離子理論值(m/z)實(shí)測(cè)值(m/z)誤差/(×10?6)碎片離子分子式名稱來(lái)源 鮮地黃干地黃生地黃酒地黃熟地黃 201.57 +[M＋H]+127.038 97127.039 060.7 109.026 7, 99.045 2, 81.033 1C6H6O35-HMF[20] √√ 212.02 +/?[M－HCOO]?166.049 87166.051 258.3 107.036 4C9H9NO5龍膽酸[21] √ 222.30 +/?[M－H]?509.187 59509.187 03?1.1 179.055 8, 167.071 4, 161.044 9C21H34O14地黃苷C[22]√√√√√ 232.48 +[M＋H]+349.149 31349.149 32?0.2 151.074 5C15H24O9益母草苷[13]√√√√√ 242.48 +[M＋HCOO]+224.076 48224.076 600.6 59.015 2C6H13NO5葡萄糖胺[23] √ 253.12 +/?[M－H]?461.166 45461.166 730.6 315.108 5, 135.045 2, 85.031 8C20H30O12連翹酯苷E[24]√√√√√ 263.12 +/?[M－H]?461.166 45461.166 730.6 315.108 5, 297.097 0, 161.045 1C20H30O12去咖啡酰毛蕊花糖苷[16]√√√√√ 273.16 +/?[M－H]?375.129 67375.129 970.8 213.075 7, 169.085 5, 151.075 6, 133.065 4C16H24O108-表番木鱉酸[16]√√ √ 283.31 ?[M－H]?345.119 11345.119 01?0.3 299.111 9, 255.097 4, 179.056 2C15H22O9桃葉珊瑚苷[14,16] √ 293.70 ?[M－H]?387.129 67387.127 32?6.1 341.108 0, 179.060 5, 161.044 7C17H24O10去羥梔子苷[23]√√√√√ 303.82 +[M＋HCOO]+226.071 00226.071 210.9 114.054 4, 71.016 8C9H11NO3酪氨酸 √ 315.61 +/?[M－H]?401.145 32401.145 12?0.5 269.099 8, 161.044 7, 149.055 7C18H26O10乙酰梓醇[24]√√ 325.61 ?[M－H]?345.155 49345.155 770.8 179.055 6, 165.091 9, 121.102 3C16H26O8地黃苦苷[13,16]√ √√√ 335.61 ?[M－HCOO]?345.154 39345.155 713.8 179.055 6, 165.091 9, 119.035 9C17H26O10二氫馬鞭草苷[25] √ 345.62 ?[M－H]?390.152 60389.145 32?0.8 389.104 4, 343.139 9, 179.054 4C17H26O10筋骨草苷[19]√√√√√ 356.25 ?[M－H]?785.250 97785.253 393.1 623.221 9, 161.023 9C35H46O20洋地黃葉苷C[26]√√√√√ 366.36 ?[M－H]?785.250 97785.251 951.2 623.220 9, 161.024 6, 133.030 3C35H46O20洋地黃葉苷B[27]√√√√√ 376.36 ?[M－H]?785.250 97785.251 951.2 623.220 9, 161.024 6C35H46O20松果菊苷[12,18]√ √√ 386.53 +/?[M－H]?389.143 30389.145 01?0.8 343.102 2, 183.096 8, 119.031 6C17H26O10馬錢素[28]√√√√√ 396.74 +/?[M－H]?225.076 85225.076 76?0.4 207.067 7, 147.041 5, 69.001 6C11H14O5京尼平[29]√ 406.91 ?[M－HCOO]?492.183 74492.182 77?2.0 289.103 4C22H33O15美利妥雙苷[23]√√ 417.48 ?[M－H]?799.266 62799.267 451.0 623.223 0, 175.038 7C36H48O20焦地黃苯乙醇苷A1[27]√√√√√ 428.66 ?[M－H]?799.266 62799.268 772.7 623.223 0C36H48O20肉蓯蓉苷A[12]√√√√√ 439.48 +/?[M－H]?623.198 14623.198 720.9 461.165 8, 315.107 5C29H36O15毛蕊花糖苷[30-31]√√√√√ 4410.69 ?[M－H]?497.166 45497.166 450.8 167.033 8, 123.045 0C23H30O126-O-香草酰基筋骨草醇[19]√√√√√ 4511.26 +/?[M－H]?623.198 14623.198 720.9 461.165 8, 315.107 5, 179.033 4, 161.023 5, 135.044 1C29H36O15連翹酯苷[30]√√√√√ 4612.21 +/?[M－H]?623.198 14623.198 720.9 461.165 8, 315.107 5, 179.033 4, 161.023 5, 135.044 1C29H36O15異麥角甾苷[18,31]√√√√√ 4713.95 +/?[M－H]?637.213 79637.214 651.3 461.168 3, 193.050 9, 161.024 1C30H38O15cis-leucosceptoside A[32]√ √√ 4815.33 +/?[M－H]?637.213 79637.214 090.5 161.023 8, 133.028 2C30H38O15焦地黃苯乙醇苷D[27]√ √ 4916.30 ?[M－H]?523.182 10523.182 370.5 193.050 4, 175.040 0C25H32O126-O-E-阿魏?；罟遣荽糩13,16]√√√√√ 5019.29 ?[M－HCOO]?201.112 14201.113 356.0 183.110 3, 139.112 1C11H18O6焦地黃素D[23,33] √ 5121.50 +/?[M－H]?651.229 44651.231 022.4 193.050 3, 175.039 9C31H40O15地黃苷[13]√√√√√ 5221.66 +/?[M－H]?591.208 32591.208 21?0.2 161.024 8C29H36O13osmanthuside B[34]√ √√ 5321.89 ?[M－H]?299.056 11299.056 280.6 255.028 5, 151.002 8C16H12O6香葉木素[21,23]√ √ 5422.34 ?[M－HCOO]?187.132 87187.133 965.8 141.132 2C11H20O5焦地黃素E[33] √ 5522.50 +[M＋H]?239.164 17239.164 190.1 193.158 0, 69.083 8C14H22O3白藜蘆醇[23] √

“√”表示含有此化合物

“√” means containing this compound

1-梓醇 2-地黃苷D 3-益母草苷 4-毛蕊花糖苷

2.4 液相分析結(jié)果

對(duì)于地黃5種飲片的共有成分中，梓醇、地黃苷D等14個(gè)成分為液相可測(cè)成分，見(jiàn)圖3。采用色譜條件1運(yùn)用外標(biāo)法測(cè)定地黃炮制品中梓醇、毛蕊花糖苷、地黃苷D、益母草苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（表2）。通過(guò)一測(cè)多評(píng)法對(duì)山西運(yùn)城、河南溫縣和河南武陟的5個(gè)炮制品中連翹酯苷、洋地黃葉苷B、焦地黃苯乙醇苷A1、異麥角甾苷、焦地黃苯乙醇苷D、連翹酯苷E、地黃苷、地黃苷A、6---阿魏?；罟遣荽?、5-HMF的測(cè)定相對(duì)含量。色譜條件1（334 nm）下以毛蕊花糖苷為內(nèi)參，焦地黃苯乙醇苷A1和色譜條件1（210 nm）下以益母草苷為內(nèi)參6--阿魏?；罟遣荽肌⒌攸S苷A、5-HMF各相對(duì)校正因子分別為0.854、0.682、0.321、0.508[35-40]。毛蕊花糖苷、連翹酯苷、異麥角甾苷、焦地黃苯乙醇苷D、地黃苷、連翹酯苷E為同系物，洋地黃葉苷B和焦地黃苯乙醇苷A1為同系物，相對(duì)校正因子相近為1。一測(cè)多評(píng)法測(cè)定連翹酯苷、洋地黃葉苷B、焦地黃苯乙醇苷A1、異麥角甾苷、焦地黃苯乙醇苷D、連翹酯苷E、地黃苷、6---阿魏酰基筋骨草醇、地黃苷A、5-HMF的相對(duì)含量（表3）。

A-色譜條件1液相色譜圖（334 nm）：a-地黃樣品，b-毛蕊花糖苷對(duì)照品 B-色譜條件2液相色譜圖（210 nm）：c-地黃樣品，d-梓醇對(duì)照品 C-色譜條件1液相色譜圖（210 nm）：e-地黃樣品，f-地黃苷D對(duì)照品，g-益母草苷對(duì)照品 1-5-HMF 2-連翹酯苷E 3-洋地黃苷葉B 4-焦地黃苯乙醇苷A1 5-毛蕊花糖苷 6-連翹酯苷 7-異麥角甾苷 8-焦地黃苯乙醇苷D 9-6-O-E-阿魏?；罟遣荽?10-地黃苷 11-梓醇 12-地黃苷A 13-地黃苷D 14-益母草苷

表2 地黃不同飲片化學(xué)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的比較(, n = 3)

Table 2 Comparison of chemical components contained in processed products of RR (, n = 3)

樣品產(chǎn)地質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%樣品產(chǎn)地質(zhì)量分?jǐn)?shù)/% 梓醇毛蕊花糖苷地黃苷D益母草苷梓醇毛蕊花糖苷地黃苷D益母草苷 鮮地黃山西運(yùn)城3.847±0.0061.057±0.0161.206±0.0121.553±0.066酒地黃山西運(yùn)城1.649±0.023**0.246±0.001**1.227±0.0010.692±0.006** 河南溫縣4.058±0.0760.960±0.0070.875±0.0252.421±0.058 河南溫縣1.394±0.117**0.303±0.009**0.731±0.016*1.229±0.013** 河南武陟4.556±0.0721.077±0.0351.309±0.1042.474±0.083 河南武陟1.566±0.203**0.436±0.002**1.205±0.1751.253±0.000** 干地黃山西運(yùn)城3.737±0.0730.099±0.003**1.554±0.098*1.154±0.019*熟地黃山西運(yùn)城0.753±0.042**0.177±0.001**1.345±0.0520.258±0.001** 河南溫縣3.595±0.1350.105±0.003**0.926±0.0171.644±0.139* 河南溫縣0.626±0.035**0.185±0.004**0.886±0.0000.686±0.003** 河南武陟4.195±0.1130.094±0.002**1.130±0.1701.980±0.009* 河南武陟0.850±0.059**0.199±0.005**0.950±0.0590.705±0.016** 生地黃山西運(yùn)城2.062±0.082**0.121±0.004**1.268±0.0210.849±0.010** 河南溫縣2.376±0.205**0.238±0.006**0.788±0.0181.261±0.005** 河南武陟2.789±0.063**0.477±0.010**0.954±0.004*1.291±0.017**

鮮地黃經(jīng)烘、蒸、炙等方法，炮制成干地黃、生地黃、酒地黃、熟地黃后，大部分化學(xué)成分的含量有不同程度的下降；其中屬于環(huán)烯醚萜苷類成分的益母草苷、梓醇、地黃苷A，雖然相較于鮮地黃，干地黃中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)有所下降，但下降程度無(wú)顯著性差異，另外3種飲片下降程度卻具有顯著性差異（＜0.01）；而毛蕊花糖苷、異麥角甾苷等苯乙醇苷類成分，除連翹酯苷外，其他成分含量相較于鮮地黃均有大幅度下降，甚至連翹酯苷E、毛蕊花糖苷、地黃苷3個(gè)成分在干地黃中的含量下降的幅度高于生地黃、酒地黃和熟地黃。相對(duì)來(lái)說(shuō)，成分含量變化比較特殊的有3個(gè)，一是環(huán)烯醚萜苷類成分地黃苷D，在各炮制品中質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化不大，甚至干地黃中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)還略高于鮮地黃；二是分子結(jié)構(gòu)中既有環(huán)烯醚萜基團(tuán)，又有苯乙醇基團(tuán)的6---阿魏酰基筋骨草醇，較鮮地黃，干地黃中的相對(duì)含量明顯高于其他4種飲片，具有顯著性差異（＜0.01）；三是地黃中5-HMF的相對(duì)含量則隨著炮制中加熱時(shí)間的增長(zhǎng)，加熱次數(shù)的增多，呈遞增的趨勢(shì)。

2.5 基于成分-靶點(diǎn)-通路的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

2.5.1 候選化合物靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，https://lsp.nwu.edu.cn/ tcmsp.php）和PubChem Compound化合物數(shù)據(jù)庫(kù)（http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）獲取干地黃中特有成分焦地黃素D、桃葉珊瑚苷，含量和鮮地黃基本一致成分益母草苷、梓醇、地黃苷A、地黃苷D、連翹酯苷，以及含量升高成分6---阿魏?；罟遣荽歼@8個(gè)化合物的Canonical SMILES編號(hào)，將得到的化合物SMILES 結(jié)構(gòu)輸入Swiss Target Prediction服務(wù)器（https://new.swisstargetprediction. ch/）進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，并結(jié)合Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/）進(jìn)行靶點(diǎn)蛋白和基因信息校正，篩選出物種為“homo sapiens”的靶點(diǎn)，得到上述8個(gè)化合物的作用靶點(diǎn)，篩去重復(fù)靶點(diǎn)，最終得到與其相關(guān)的作用靶點(diǎn)共88個(gè)。

表3 地黃不同飲片化學(xué)成分相對(duì)含量的比較(, n = 3)

Table 3 Comparison of chemical components relative contained in processed products of RR (, n = 3)

樣品產(chǎn)地相對(duì)含量/% 焦地黃苯乙醇苷A1連翹酯苷異麥角甾苷焦地黃苯乙醇苷D6-O-E-阿魏酰筋骨草醇地黃苷連翹酯苷E洋地黃葉苷B地黃苷A5-HMF 鮮地黃山西運(yùn)城0.076±0.0080.072±0.0010.077±0.0070.148±0.0131.824±0.0440.031±0.0010.069±0.0080.671±0.0863.519±0.1130.374±0.017 河南溫縣0.120±0.0160.086±0.0010.091±0.0110.165±0.0041.451±0.0320.057±0.0060.067±0.0080.729±0.1044.260±0.2450.365±0.011 河南武陟0.115±0.0160.069±0.0040.082±0.0010.110±0.0161.390±0.0460.042±0.0060.058±0.0110.822±0.1053.743±0.0520.203±0.006 干地黃山西運(yùn)城0.046±0.0080.068±0.0020.022±0.001**0.063±0.002*4.267±0.115**0.006±0.000**0.007±0.000**0.184±0.022*2.710±0.055*0.471±0.022* 河南溫縣0.035±0.001*0.055±0.008*0.012±0.003*0.051±0.004**3.578±0.104**0.004±0.000**0.005±0.001**0.173±0.013*2.629±0.314*0.422±0.011* 河南武陟0.028±0.001*0.038±0.001*0.012±0.001**0.045±0.002*4.432±0.179**0.006±0.000*0.005±0.001*0.132±0.008*2.361±0.201*0.474±0.013** 生地黃山西運(yùn)城0.017±0.001*0.017±0.001**0.021±0.000**0.034±0.001**1.883±0.0220.013±0.000**0.038±0.001*0.109±0.001*0.683±0.039**2.482±0.252** 河南溫縣0.014±0.001*0.025±0.001**0.018±0.001*0.046±0.002**1.461±0.0830.021±0.000*0.016±0.003*0.154±0.008*0.558±0.006**2.985±0.142** 河南武陟0.026±0.001*0.035±0.000**0.040±0.000**0.063±0.0000.843±0.042**0.024±0.0060.029±0.0010.227±0.001*0.960±0.005**2.486±0.148** 酒地黃山西運(yùn)城0.025±0.001*0.044±0.002**0.036±0.000*0.047±0.000**1.505±0.019*0.027±0.0010.035±0.006*0.206±0.002*0.206±0.001**2.596±0.061** 河南溫縣0.021±0.001*0.039±0.003**0.023±0.000*0.053±0.001**1.261±0.012*0.033±0.0050.026±0.002*0.183±0.002*0.819±0.011**2.643±0.006** 河南武陟0.024±0.001*0.053±0.0040.033±0.001**0.061±0.0011.539±0.0640.023±0.001*0.025±0.0000.273±0.001*0.704±0.037**2.370±0.154** 熟地黃山西運(yùn)城0.029±0.001*0.053±0.001**0.039±0.001*0.042±0.002**1.179±0.038**0.028±0.0010.041±0.001*0.150±0.007*0.019±0.000**5.730±0.187** 河南溫縣0.013±0.001*0.045±0.004**0.022±0.002*0.030±0.002**0.694±0.023**0.023±0.001*0.025±0.001*0.137±0.006*0.075±0.004**4.479±0.045** 河南武陟0.010±0.000*0.046±0.001*0.026±0.001**0.023±0.001*0.697±0.033**0.023±0.001*0.027±0.0010.182±0.009*0.076±0.004**4.647±0.205**

與鮮地黃組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01fresh RR

2.5.2 蛋白-蛋白相互作用（protein-protein interaction networks，PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將“2.5.1”項(xiàng)下靶點(diǎn)信息導(dǎo)入到STRING 11數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org/ cgi/input.pl）進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析，物種限定為“Homo sapiens”，獲得核心靶點(diǎn)間相互作用的信息。將PPI網(wǎng)絡(luò)結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件中Network Analyzer插件獲取靶點(diǎn)關(guān)系信息，依據(jù)度值（degree）、介度中心性（betweenness centrality）、接近中心性（closeness centrality）3個(gè)參數(shù)均大于中位數(shù)且度值大于等于5，篩選得10個(gè)核心靶點(diǎn)。分析發(fā)現(xiàn)5個(gè)靶點(diǎn)與焦地黃素D有關(guān)，4個(gè)與桃葉珊瑚苷有關(guān)，3個(gè)與梓醇有關(guān)，具體見(jiàn)表4。

2.5.3 基因本體（gene ontology，GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析 GO富集分析結(jié)果包括生物過(guò)程（biological process，BP）、細(xì)胞組成（cell component，CC）和分子功能（molecular function，MF），描述了基因產(chǎn)物行使的分子功能，所處的細(xì)胞環(huán)境，以及參與的生物過(guò)程進(jìn)而產(chǎn)生藥效。將88個(gè)干地黃相關(guān)作用靶點(diǎn)導(dǎo)入到DAVID6.8數(shù)據(jù)庫(kù)（https://david. ncifcrf.gov/），選取Homo sapiens物種項(xiàng)，得到GO生物功能分析結(jié)果，設(shè)置＜0.01，設(shè)置基因數(shù)（count）從大到小排序。KEGG通路富集分析得到干地黃靶點(diǎn)的信號(hào)通路，設(shè)置＜0.01。

表4 核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)鋵W(xué)性質(zhì)

Table 4 Topological properties of core targets network

靶點(diǎn)名稱介度中心性接近中心性度值 CASP3Caspase-30.361 210 930.357 142 8612 HSP90AA1heat shock protein HSP 90-alpha0.133 895 450.324 324 3211 IL-6interleukin-60.066 645 570.295 566 510 APPbeta amyloid A4 protein0.199 468 850.292 682 938 CDK1cyclin-dependent kinase 10.242 068 320.326 086 968 VEGFAvascular endothelial growth factor A0.054 633 330.291 262 148 HK1hexokinase type I0.124 516 230.288 461 546 HK2hexokinase type II0.124 516 230.288 461 546 PTGS2prostaglandin G/H synthase 20.064 404 450.291 262 146 TK1thymidine kinase, cytosolic0.229 293 790.292 682 935

GO富集分析結(jié)果共有142個(gè)項(xiàng)目，包含112個(gè)BP、8個(gè)CC和22個(gè)MF，設(shè)置＜0.01，按照基因數(shù)目選取前15個(gè)項(xiàng)目，見(jiàn)圖4。結(jié)果表明靶點(diǎn)參與的細(xì)胞組成中，細(xì)胞質(zhì)、質(zhì)膜、胞質(zhì)溶膠、細(xì)胞外分泌體、細(xì)胞外間隙、質(zhì)膜的組成部分占比較大；分子功能以蛋白質(zhì)同二聚化活性、相同的蛋白質(zhì)結(jié)合、蛋白質(zhì)異二聚化活性最為顯著；生物功能涉及細(xì)胞增殖的正調(diào)控，RNA聚合酶II啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控，凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控，ERK1、ERK2的正調(diào)控，氧化還原反應(yīng)，藥物反應(yīng)。

圖4 GO富集分析(前15條)

KEGG富集分析篩選出24條通路，選取具有顯著性的前15的通路，如圖5，主要包括藥物代謝、cAMP信號(hào)通路、碳水化合物消化與吸收、HIF-1信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、間隙連接通路、肌萎縮側(cè)索硬化、乙型肝炎、癌癥通路、氮代謝、半乳糖代謝、血清素突觸、淀粉和蔗糖代謝、神經(jīng)活性配體-受體相互作用通路。

2.5.4 成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 根據(jù)篩選到的地黃的8個(gè)成分、88個(gè)靶點(diǎn)和15條關(guān)鍵通路，利用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖6。根據(jù)Cytoscape 3.7.2軟件對(duì)網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行分析，以成分、靶點(diǎn)信號(hào)通路的度值（degree）為參考，發(fā)現(xiàn)焦地黃素D、桃葉珊瑚苷、梓醇連接度較高，可能是干地黃發(fā)揮涼血滋陰功效的成分，腺苷A2a受體（adenosine A2a receptor）、碳酸酐酶II（carbonic anhydrase II）、II型己糖激酶（hexokinase type II）、I型己糖激酶（hexokinase type I）、細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子Bcl-2（apoptosis regulator Bcl-2）、腺苷A1受體（adenosine A1 receptor）、轉(zhuǎn)錄因子p65（transcription factor p65）、Caspase-3、蛋白激酶Cα（protein kinase Cα）靶點(diǎn)連接度較高（degree＞5），可能是清胃散中地黃發(fā)揮藥效的關(guān)鍵靶點(diǎn)，代謝通路（metabolic pathways）、神經(jīng)活性配體-受體相互作用（neuroactive ligand-receptor interaction）、癌癥通路（pathways in cancer）、血清素突觸（serotonergic synapse）、乙型肝炎（hepatitis B）、cAMP信號(hào)通路（cAMP signaling pathway）連接度較大（degree＞8），均可能是干地黃發(fā)揮作用的關(guān)鍵信號(hào)通路。網(wǎng)絡(luò)中既存在一個(gè)分子與多個(gè)靶點(diǎn)蛋白的相互作用，也存在同一個(gè)靶點(diǎn)蛋白與不同分子作用的現(xiàn)象，表明了干地黃的多成分與多靶點(diǎn)之間共同作用的機(jī)制，符合中藥的多靶點(diǎn)，多作用，多角度的特點(diǎn)。

2.5.5 整合分析 經(jīng)典名方清胃散中地黃具有清熱、涼血、滋陰之效。研究通過(guò)質(zhì)譜和液相對(duì)地黃化學(xué)成分和液相共有成分分析，獲取干地黃中特有成分焦地黃素D、桃葉珊瑚苷，含量和鮮地黃基本一致成分益母草苷、梓醇、地黃苷A、地黃苷D、連翹酯苷，以及含量升高成分6---阿魏?；罟遣荽歼@8個(gè)化合物進(jìn)行現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，并對(duì)作用機(jī)制進(jìn)行探討分析。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果表明，篩選的干地黃8個(gè)化合物，共獲得88個(gè)靶點(diǎn)，通過(guò)構(gòu)建PPI信息網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)度值、接近中心性、介數(shù)中心性的拓?fù)鋮?shù)進(jìn)行分析，得到10個(gè)核心靶點(diǎn)，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析篩選得到清胃散中干地黃的核心靶點(diǎn)和信號(hào)通路。應(yīng)用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建成分-靶 點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)信息，根據(jù)度值分析得出焦地黃素D、桃葉珊瑚苷和梓醇這3個(gè)成分可能是清胃散中地黃發(fā)揮清熱涼血功效的成分。

圖5 KEGG富集分析

圖6 成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖

3 討論

縱觀地黃的幾個(gè)炮制品，鮮地黃寒性最強(qiáng)，清熱作用亦最強(qiáng)，干地黃經(jīng)過(guò)短時(shí)間蒸制后，寒性略有下降，生地黃由于經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間烘烤，寒性進(jìn)一步下降，而以生地黃為原料，經(jīng)過(guò)酒炙而成的酒地黃和經(jīng)過(guò)酒蒸而成的熟地黃，藥性亦轉(zhuǎn)為溫性，藥效也轉(zhuǎn)為滋補(bǔ)。從地黃的幾個(gè)炮制品性狀的變化，也可以看出此趨勢(shì)。因此，從藥性的角度看，清胃散中最適宜使用鮮地黃，但鮮地黃含水量高，不耐貯存，且經(jīng)過(guò)酒蒸后，可以引藥上行和引藥入血分，達(dá)到清頭面部之熱和血中之熱的目的，結(jié)合清胃散中地黃的核心功效，最適宜選擇的品種，應(yīng)為用酒短時(shí)間蒸制的干地黃。

針對(duì)地黃的幾個(gè)炮制品的化學(xué)特征研究，亦支持此推論。就液質(zhì)鑒定的化合物種類和數(shù)目而言，生地黃、酒地黃和熟地黃的環(huán)烯醚萜類化合物較鮮地黃和干地黃均有大幅度減少，而生地黃、酒地黃和熟地黃的糖類化合物較鮮地黃和干地黃均有大幅度增加，含有環(huán)烯醚萜類化合物中藥藥性多為寒涼，而糖類物質(zhì)具有溫補(bǔ)作用。干地黃和鮮地黃不但有大量的共有成分，如美利妥雙苷、乙酰梓醇等，且所含的環(huán)烯醚萜類成分的含量，如益母草苷、梓醇、地黃苷A等，相較于生地黃、酒地黃、熟地黃，亦更接近于鮮地黃，可以說(shuō)干地黃較好的保留了鮮地黃中環(huán)烯醚萜類化合物，其中梓醇、地黃苷A和益母草苷具有抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)痛和解熱作用[41-43]，這些都和地黃的清熱療效密切相關(guān)。同時(shí)，也應(yīng)注意到，干地黃中也有其特有的成分，如桃葉珊瑚苷、焦地黃素D，以及含量明顯高于其它飲片的6---阿魏?；罟遣荽?，研究發(fā)現(xiàn)[44-45]桃葉珊瑚苷具有抗炎、抗氧化作用，對(duì)乙醇誘導(dǎo)的急性胃粘膜損傷具有保護(hù)作用，這給干地黃具有自己獨(dú)特的療效帶來(lái)了可能，而焦地黃素D和6---阿魏?；罟遣荽荚谒幚硭幮Х矫嫜芯枯^少，后續(xù)值得進(jìn)一步研究。

現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)[46]研究清胃散發(fā)現(xiàn)，IL-6、VEGFA、EGF、TNF靶點(diǎn)蛋白與其他蛋白相互作用較多，功能和通路富集主要涉及氧化應(yīng)激反應(yīng)、ERK1和ERK2調(diào)控、對(duì)活性氧的反應(yīng)等生物過(guò)程，以及HIF-1信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡等通路。而對(duì)鮮地黃和干地黃典型共有成分和特有成分靶點(diǎn)分析，發(fā)現(xiàn)干地黃中焦地黃素D、桃葉珊瑚苷、益母草苷、梓醇、地黃苷A、地黃苷D、連翹酯苷、6---阿魏?；罟遣荽汲煞滞ㄟ^(guò)調(diào)控Caspase-3、熱休克蛋白HSP 90-α（heat shock protein HSP 90-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、β淀粉樣A4蛋白（β amyloid A4 protein）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶1（cyclin-dependent kinase 1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（vascular endothelial growth factor A）、I型己糖激酶（hexokinase type I）、II型己糖激酶（hexokinase type II）等關(guān)鍵靶點(diǎn)，涉及細(xì)胞增殖的正調(diào)控、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控、ERK1和ERK2的正調(diào)控、氧化還原反應(yīng)等生物功能，作用于cAMP信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路等信號(hào)通路發(fā)揮干地黃清熱作用。

10個(gè)核心靶點(diǎn)中，CASP3又稱胱天蛋白酶3，是一種蛋白酶，能夠特異性的剪切多聚ADP核糖聚合酶（PARP1）和乙?；?DEVD-7-氨基-4-甲基香豆素（Ac-DEVD-AMC），從而導(dǎo)致DNA裂解促進(jìn)細(xì)胞凋亡。HSP90AA1具有同源二聚體的功能，編碼的蛋白質(zhì)通過(guò)協(xié)同伴侶調(diào)節(jié)的ATP酶活性有助于特定靶蛋白的正確折疊。APP是一種跨膜蛋白，經(jīng)代謝途徑產(chǎn)生的αAPPs等物質(zhì)能營(yíng)養(yǎng)和修復(fù)神經(jīng)元。研究發(fā)現(xiàn)上調(diào)CASP3、下調(diào)HSP90AA1和抑制APP水解途徑均能抑制胃癌的發(fā)生和侵襲[47-49]。IL-6為一類促炎細(xì)胞因子，多是由淋巴細(xì)胞分泌的，具有參與骨吸收，阻滯成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，已有研究發(fā)現(xiàn)地黃會(huì)影響IL-6的表達(dá)從而改善牙周組織炎癥[50]。因此，清胃散中地黃可能是通過(guò)這些靶點(diǎn)起到抑制胃部病癥，緩解牙周炎癥。

地黃可能通過(guò)調(diào)節(jié)cAMP信號(hào)通路起到解熱的作用[51]。周晴等[52]研究發(fā)現(xiàn)地黃通過(guò)乙型肝炎通路治療慢性乙型肝炎引起的熱毒。Sun等[53]發(fā)現(xiàn)梓醇通過(guò)細(xì)胞凋亡通路抑制胃癌細(xì)胞增殖。血清素突觸通路血清素主要由胃腸道的腸嗜鉻細(xì)胞產(chǎn)生，血清素通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞上2C受體和激活HTR2B，促進(jìn)抗炎細(xì)胞極化，與炎癥性腸胃病相關(guān)[54]，Chen等[55]通過(guò)HIF通路調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化抑制牙周炎，這些與炎癥反應(yīng)相關(guān)，故推測(cè)清胃散中地黃治療胃火牙痛的機(jī)制，可能是通過(guò)相關(guān)靶點(diǎn)作用于這些信號(hào)通路。

地黃是極具特色的一味中藥，其炮制后藥性發(fā)生轉(zhuǎn)變，帶來(lái)了功效的變化，但由于其不同飲片名稱的混淆錯(cuò)亂，帶來(lái)了臨床使用的混亂，“清胃散”中所用地黃為“生地黃（酒制，三分）”，按常規(guī)理解，生地黃酒制，即為熟地黃，而本方的主治功用為通過(guò)清胃涼血，達(dá)到治療胃熱牙痛的目的，使用地黃取其清熱的作用，使用酒制法取其引藥上行，引藥入血分的作用，而非熟地黃酒蒸的增強(qiáng)補(bǔ)益作用，降低滋膩之性的目的。現(xiàn)代清胃散組方研制中，其中地黃采用鮮地黃，制成清胃膠囊，具有一定的鎮(zhèn)痛、抗炎等作用[56]。故此方中的生地黃應(yīng)指的鮮地黃，而采用的酒制法，正是《雷公炮炙論》中拌酒短時(shí)間蒸的方法，最終使用的飲片應(yīng)為本文的研究對(duì)象-干地黃，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用和現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)干地黃的成分研究，均支持此推論。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Research onprocessed products in classical prescription Qingwei Powder based on chemical characteristics and core functions

WANG Min1, LIU Huan-huan1, ZHANG Ting1, YU Yin-ping1, PAN Jin-huo1, JI De1, SU Lian-lin1, LU Tu-lin1, LI Lin1, CHENG Xiao-li2

1. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China 2. Jiangsu Lianyungang Hospital of Traditional Chinese Medicine, Lianyungang 222000, China

Distinguish the chemical characteristics of different processed products of(RR), combine the core functions of the classical prescription Qingwei Powder (QP), and clarify the processing methods and types of processed products of RR. This provides references for the development of new Chinese medicine and the rational application of Chinese medicine in clinical practice.The common and unique components in different processed products of RR were qualitatively analyzed by UPLC and UPLC-Q-TOF/MS. Using modern network pharmacology to screen and analyze the targets and pathways of dried RR, construct a component-target-pathway network to further predict the correlation between the chemical components and core functions of RR.A total of 55 components were identified in different processed species of RR, 24 of which are shared by 5 kinds of processed products. Aucubin and jioglutin D are the unique components of dried RR. After being processed, the content of most chemical components decreased in different degrees, and the iridoids of dried RR decreased the least. Using network pharmacology to predict the mechanism of jioglutin D, aucubin, ajugol, catalpol, rehmannioside A, rehmannioside D, forsythoside A, and 6---feruloyl ajugol in dried RR. Among the enriched pathways, cAMP signaling pathway, hepatitis B, serotonergic synapse, HIF-1 signaling pathway, etc. have antipyretic effects related.The chemical characteristics of dried RR are most similar to those of fresh RR, and its medicinal properties and efficacy are closest to the core functions of RR in QP. Therefore, dried RR is the most suitable processed product of RR in QP.

; classic prescription; Qingwei San; processed; antipyretic; chemical characteristics; core functions; modern network pharmacology; component-target-pathway network; iridoids; jioglutin D; aucubin; ajugol; catalpol; rehmannioside A; rehmannioside D; forsythoside A; 6---feruloyl ajugol; cAMP signaling pathway; hepatitis B; serotonergic synapse; HIF-1 signaling pathway

R283.6

A

0253 - 2670(2022)13 - 3940 - 13

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.13.007

2022-01-06

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2017YFC1701902）；國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2018YFC1707000）

王 敏，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥茖W(xué)。Tel: 17802528205 E-mail: njucm20200853@163.com

李 林，副教授，主要從事中藥炮制機(jī)制及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。Tel: 13913842209 E-mail: lilin@njucm.edu.cn

程曉莉，副主任中藥師，主要從事中藥房管理。E-mail: 1670704480@qq.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]