覆盆子的化學(xué)成分研究

王靜宜，余俊東，陳 悅，杜 軍，巫小宏，李醫(yī)明，王 瑞，陳 亮*，吳迎春*

?化學(xué)成分 ?

覆盆子的化學(xué)成分研究

王靜宜1，余俊東1，陳 悅1，杜 軍2，巫小宏3，李醫(yī)明1，王 瑞1，陳 亮2*，吳迎春1*

1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，上海 201203 2. 安利（上海）科技發(fā)展有限公司，上海 201203 3. 安利（中國(guó)）植物研發(fā)中心有限公司，江蘇 無(wú)錫 214145

研究華東覆盆子果實(shí)的化學(xué)成分。采用加熱回流提取、溶劑萃取，硅膠柱色譜、ODS柱色譜、Sephadex LH-20凝膠、半制備液相色譜等多種色譜方法進(jìn)行分離純化，并運(yùn)用NMR、MS等現(xiàn)代譜學(xué)技術(shù)進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定。從華東覆盆子中共分離得到16個(gè)化合物，分別鑒定為2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3-羥基丙酸丁酯（1）、1β,2α,19α-三羥基-3-羰基-12烯-烏蘇烷-28-酸（2）、3β,19α-二羥基-1-羰基-齊墩果烷-12-烯-28-酸（3）、麥珠子酸（4）、negundonorin A（5）、山柰酚-3--刺槐二糖苷（6）、椴樹(shù)苷（7）、槲皮素（8）、根皮苷（9）、5,6,7,4′-四羥基-黃酮醇（10）、香橙素（11）、2,2′,3,3′,4,4′-六羥基-6,6′-聯(lián)苯二甲酸二乙酯（12）、沒(méi)食子酸乙酯（13）、沒(méi)食子酸（14）、(＋)-兒茶素（15）、對(duì)羥基苯甲酸（16）?；衔?為新的酚類(lèi)化合物，命名為覆盆子酚酸丁酯，化合物2～5、10為首次從該植物中分離得到。

覆盆子；華東覆盆子；外消旋體；覆盆子酚酸丁酯；1β,2α,19α-三羥基-3-羰基-12烯-烏蘇烷-28-酸；麥珠子酸；5,6,7,4′-四羥基-黃酮醇

覆盆子為薔薇科懸鉤子屬植物華東覆盆子Hu的干燥近成熟果實(shí)，別名掌葉覆盆子，主要分布于江浙、安徽、江西、福建和廣西等地區(qū)[1]。覆盆子性溫，味酸、甘，歸肝、腎、膀胱經(jīng)，具有益腎固精縮尿、養(yǎng)肝明目的作用，可用于遺精滑精、遺尿尿頻、陽(yáng)痿早泄、目暗昏花[2]。現(xiàn)有研究表明，覆盆子果實(shí)主要含有二萜、三萜、黃酮、生物堿、苯丙素、酚酸等多種成分，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗真菌和降血糖等藥理活性[3]。為完善覆盆子的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)一步探究其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本課題從覆盆子提取液二氯甲烷和正丁醇萃取部位分離并鑒定出16個(gè)化合物，其中1個(gè)簡(jiǎn)單酚類(lèi)化合物2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3-羥基丙酸丁酯[butyl-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)- 3-hydroxypropanoate，1]；4個(gè)三萜類(lèi)化合物：1β,2α,19α-三羥基-3-羰基-12烯-烏蘇烷-28-酸（1β,2α,19α-trihydroxy-3-oxo-12-ursen-28-oic acid，2）、3β,19α-二羥基-1-羰基-齊墩果烷-12-烯-28-酸（3β,19α-dihydroxy-1-oxo-olean-12-en-28-oic acid，3）、麥珠子酸（alphitolic acid，4）、negundonorin A（5）；6個(gè)黃酮類(lèi)化合物：山柰酚-3--刺槐二糖苷（kaempferol-3--robinobioside，6）、椴樹(shù)苷（tiliroside，7）、槲皮素（quercetin，8）、根皮苷（phlorizin，9）、5,6,7,4′-四羥基-黃酮醇（5,6,7,4′- tetrahydroxy-flavonol，10）、香橙素（aromadendrin，11）；5個(gè)酚酸類(lèi)化合物：2,2′,3,3′,4,4′-六羥基-6,6′-聯(lián)苯二甲酸二乙酯（diethyl-2,2′,3,3′,4,4′-hexahydroxy- biphenyl-6,6′-dicarboxylate，12）、沒(méi)食子酸乙酯（ethyl gallate，13）、沒(méi)食子酸（gallic acid，14）、(＋)-兒茶素[(+)-catechin，15]、對(duì)羥基苯甲酸（4-hydroxybenzoic acid，16）。其中，化合物1為新化合物，命名為覆盆子酚酸丁酯，化合物2～5、10為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker Avance 600核磁共振儀、Bruker Avance 400核磁共振儀（德國(guó)布魯克公司）；Q-TOF-Ultima質(zhì)譜儀（Milford，MA，美國(guó)）；BT 125D型分析天平（德國(guó)塞多利斯有限公司）；BSZ-100自動(dòng)部分收集器（上海滬西分析儀器廠有限公司）；1260 Infinity分析型高效液相色譜儀；1260 Infinity II半制備液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；ZORBAX SB-C18（250 mm×9.4 mm，5 μm）；Sephadex LH-20凝膠（Pharmacia公司）；硅膠G（100～200、200～300、300～400目，上海泰坦科技股份有限公司）；MCI gel CHP-20P（日本Mitsubishi公司）；ODS-AQ-HG（50 μm）反相硅膠（日本YMC公司）；HSGF254薄層色譜硅膠板、厚制備板（煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司）；石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、正丁醇、醋酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，AR）；乙腈、甲醇（阿達(dá)瑪斯試劑有限公司，HPLC純）；純凈水（杭州哇哈哈集團(tuán)有限公司）。

實(shí)驗(yàn)藥材覆盆子于2020年9月采購(gòu)于宣城廣德縣，由上海中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室倪梁紅副教授鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物華東覆盆子Hu的干燥果實(shí)，標(biāo)本（FPZ20200901）保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室。

2 提取與分離

干燥的覆盆子果實(shí)（50 kg）用80%乙醇加熱回流提取，每次2 h，重復(fù)2次，合并提取液并濾過(guò)，減壓濃縮得浸膏11.9 kg。將浸膏分散在適量水中，依次用石油醚、二氯甲烷及正丁醇萃取，濃縮得到石油醚部位、二氯甲烷部位、正丁醇部位和萃取后水層部位。

二氯甲烷部位（119 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（30∶1→1∶1）和甲醇梯度洗脫，通過(guò)薄層色譜（TLC）檢測(cè)合并相同組分得到18個(gè)組分（F1～F18）。F13（1 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（15∶1→1∶1）梯度洗脫得到13個(gè)組分（F13.1～F13.13）。F14（3 g）經(jīng)MCI柱色譜，以甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脫，TLC檢測(cè)合并相同組分后得到8個(gè)組分（F14.1～F14.8）。F14.7經(jīng)Saphadex LH-20柱色譜（70%甲醇）等度洗脫后，得到6個(gè)組分（F14.7.1～F14.7.6）。F14.7.5經(jīng)半制備液相色譜（乙腈-水60∶40）等度洗脫得到化合物2（1.8 mg）、3（0.2 mg）。F14.7.6經(jīng)反復(fù)半制備液相色譜（乙腈-水85∶15）純化得到化合物4（9.8 mg）、5（3.4 mg）。

正丁醇部位（1300 g）采用D-101型大孔吸附樹(shù)脂初步分離，依次以純水、20%、40%、60%、80%、95%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，按不同乙醇體積分?jǐn)?shù)洗脫部位濃縮合并得到6個(gè)組分（FB1～FB6）。FB1（122 g）經(jīng)C18A31柱色譜，以甲醇-水（0∶100→20∶80）梯度洗脫，得到8個(gè)組分（FB1.1～FB1.8）。FB1.1經(jīng)硅膠柱色譜，先后以石油醚-醋酸乙酯（6∶1→1∶1）和醋酸乙酯-甲醇（50∶1→1∶1）梯度洗脫以及重結(jié)晶得到化合物14（15 mg）。FB1.3經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（40∶1→1∶1）梯度洗脫以及重結(jié)晶得到化合物16（11 mg）。FB3（458 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以醋酸乙酯-甲醇-水（60∶1∶1→1∶1∶1）梯度洗脫，得到15個(gè)組分（FB3.1～FB3.15）。FB3.1經(jīng)ODS柱色譜，以甲醇-水（5∶95→100∶0）梯度洗脫，得到33個(gè)組分（FB3.1.1～FB3.1.33）。FB3.1.2經(jīng)半制備液相色譜（乙腈-水20∶80）純化得到化合物15（8 mg），F(xiàn)B3.1.3通過(guò)同樣方法同樣條件得到化合物12（3 mg）和13（64 mg）；FB3.1.10經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜[甲醇-水（1∶1）等度洗脫] 得到11個(gè)組分（FB3.1.10A～FB3.1.10K），F(xiàn)B3.1.10H經(jīng)重結(jié)晶得到化合物11（12 mg）；FB3.1.12經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-醋酸乙酯（10∶1→1∶1）和二氯甲烷-甲醇（50∶1→1∶1）梯度洗脫，以及半制備液相色譜（乙腈-水30∶70）的不斷分離純化，得到化合物1（1 mg）、10（0.2 mg）；FB3.1.16經(jīng)重結(jié)晶得到化合物8（5 mg）。FB3.2經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以100%甲醇等度洗脫后得到8個(gè)組分（FB3.2.1～Fr.B3.2.8）。FB3.2.4經(jīng)半制備液相色譜[乙腈-水（22∶78→25∶75）]純化和重結(jié)晶得到化合物7（90 mg）、9（1 mg）。FB3.8經(jīng)半制備液相色譜（乙腈-水20∶80）制備得到化合物6（48 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道的ficusol核磁數(shù)據(jù)和化合物1的HMQC譜，推測(cè)C-2為C55.5，H-2為H3.68。在HMBC譜（圖1）中，H-2與C65.2、112.6、121.8、128.7相關(guān)，而與116.3不相關(guān)，因此推斷C65.2為C-3信號(hào)，C128.7為C-1′信號(hào)，C116.3為C-5′信號(hào)。而C-2′、C-6′的確認(rèn)需結(jié)合1H-1H COSY譜：H-5′與H6.72相關(guān)，而與H6.87不相關(guān)，推測(cè)H6.72為H-6′信號(hào)，H6.87為H-2′信號(hào)，則C121.8為C-6′信號(hào)，C112.6為C-2′信號(hào)，這一位置的確定可以通過(guò)NOESY譜證實(shí)。H3.83 (H-3′) 與C149.1具有明顯BC相關(guān)，推斷C149.1為C-3′信號(hào)。丁基片段的HMBC譜顯示C174.8 (C-1) 與H4.11相關(guān)，推測(cè)H4.11為H-1′′信號(hào)，而H-1′′又與C20.1、C31.8相關(guān)，結(jié)合1H-1H COSY中H4.11與H1.55相關(guān)，可以推斷C20.1為C-3′′信號(hào)，C31.8為C-2′′信號(hào)。通過(guò)對(duì)1D和2D NMR譜的解析，完成了對(duì)化合物1碳?xì)湫盘?hào)的歸屬（表1）及一維平面結(jié)構(gòu)的確認(rèn)。

在NOESY譜（圖2）中可以看到，H-3′-OMe與H-2′有NOE相關(guān)，H-2與H-2′、H-6′有NOE相關(guān)，這與上述相關(guān)位置的推斷吻合。運(yùn)用Gaussian 09軟件，對(duì)化合物1可能存在的2種絕對(duì)構(gòu)型結(jié)構(gòu)（2和2）的理論CD譜進(jìn)行了計(jì)算，并分別與其實(shí)測(cè)的CD圖譜進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果顯示，化合物1的計(jì)算CD譜與其實(shí)測(cè)CD譜均不吻合（圖3），且實(shí)測(cè)CD圖譜在200～400 nm的Cotton效應(yīng)幾乎為0，因此推測(cè)化合物1是一對(duì)外消旋體，兩個(gè)對(duì)映異構(gòu)體分別為2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3-羥基丙酸丁酯和2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3-羥基丙酸丁酯。故最終確定化合物1為(±)-2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3-羥基丙酸丁酯。基于上述分析及Sci-Finder檢索，確定化合物1為1個(gè)新化合物，命名為覆盆子酚酸丁酯。

表1 化合物1的1H- 和13C-NMR數(shù)據(jù) (400/100 MHz, CD3OD)

Table 1 1H- and 13C-NMR data of compound 1 (400/100 MHz, CD3OD)

碳位δCδH 1174.8 255.53.68 (overlapped) 365.23.67 (overlapped), 4.06 (m) 1′128.7 2′112.66.87 (d, J = 1.6 Hz) 3′149.1 4′147.2 5′116.36.73 (overlapped) 6′121.86.72 (overlapped) 1′′65.64.11 (m) 2′′31.81.55 (m), 1.60 (m) 3′′20.10.88 (m), 1.33 (m) 4′′14.00.89 (m) 3′-OMe56.43.83 (s)

HC HMBC 1H-1H COSY

圖2 化合物1的NOESY關(guān)鍵相關(guān)信號(hào)

圖3 化合物1的計(jì)算和實(shí)驗(yàn)CD光譜

化合物2：白色粉末；ESI-MS/: 501 [M－H]?，分子式C30H46O6；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.30 (1H, m, H-12), 4.39 (1H, d,= 9.8 Hz, H-2), 3.20 (1H, d,= 9.8 Hz, H-1), 2.65 (1H, m, H-11a), 2.52 (1H, s, H-16a), 2.50 (1H, s, H-18), 2.19 (1H, m, H-11b), 1.93 (1H, dd,= 11.0, 6.6 Hz, H-9), 1.71 (1H, m, H-15a), 1.63 (2H, m, H-22), 1.54 (1H, m, H-16b), 1.52 (1H, m, H-21a), 1.39 (2H, m, H-6), 1.33 (2H, m, H-7a, H-20), 1.32 (3H, s, H-27), 1.29 (1H, s, H-7b), 1.281 (3H, s, H-30), 1.19 (3H, s, H-25), 1.18 (2H, s, H-15b, 21b), 1.12 (3H, s, H-23), 1.11 (3H, s, H-26), 0.98 (1H, s, H-5), 0.92 (3H, d,= 6.7 Hz, H-29), 0.87 (3H, s, H-24)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 214.3 (C-3), 182.9 (C-28), 139.0 (C-13), 130.5 (C-12), 87.3 (C-1), 76.2 (C-2), 73.6 (C-19), 55.1 (C-18), 54.6 (C-5), 48.9 (C-9), 48.8 (C-17), 48.5 (C-4), 44.3 (C-10), 43.1 (C-20), 42.6 (C-14), 41.8 (C-8), 39.1 (C-22), 34.0 (C-7), 29.8 (C-15), 28.3 (C-11), 27.4 (C-21), 27.1 (C-30), 26.7 (C-16), 25.5 (C-23), 24.9 (C-27), 21.9 (C-24), 19.9 (C-6), 18.0 (C-26), 16.6 (C-29), 12.9 (C-25)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[5]，故鑒定化合物2為1β,2α,19α-三羥基-3-羰基-12烯-烏蘇烷-28-酸。

化合物3：白色粉末；ESI-MS/: 485 [M－H]?，分子式C30H46O5；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.29 (1H, brs, H-12), 3.34 (1H, s, H-3), 3.27 (1H, d,= 3.7 Hz, H-2a), 3.11 (1H, d,= 12.0 Hz, H-19), 3.06 (1H, m, H-18), 2.37 (2H, dd,= 10.7, 6.4 Hz, H-11a, 16a), 2.24 (2H, m, H-2b, 9), 1.87 (2H, m, H-16b, 22a), 1.68 (4H, m, H-11b, 15a, 21a, 22b), 1.46 (2H, m, H-6), 1.32 (3H, s, H-27), 1.31 (3H, s, H-25), 1.29 (2H, s, H-7), 1.03 (3H, s, H-29), 1.00 (3H, s, H-23), 0.99 (1H, overlapped, H-5), 0.96 (3H, s, H-24), 0.94 (3H, s, H-26), 0.90 (2H, m, H-15b, 21b), 0.84 (3H, s, H-30)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 215.4 (C-1), 183.4 (C-28), 144.0 (C-13), 125.4 (C-12), 82.5 (C-19), 79.8 (C-3), 55.9 (C-5), 54.1 (C-10), 47.4 (C-17), 45.2 (C-18), 44.9 (C-2), 42.8 (C-14), 40.9 (C-8), 40.6 (C-9), 40.5 (C-4), 36.1 (C-20), 33.9 (C-22), 33.9 (C-7), 29.6 (C-16), 29.0 (C-23, 29), 28.8 (C-21), 28.7 (C-15), 26.6 (C-11), 25.3 (C-30), 25.1 (C-27), 19.1 (C-6), 18.3 (C-26), 16.6 (C-24), 15.3 (C-25)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[6]，故鑒定化合物3為3β,19α-二羥基-1-羰基-齊墩果烷- 12-烯-28-酸。

化合物4：白色粉末；ESI-MS/: 471 [M－H]?，分子式C30H48O4；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 4.73 (1H, s, H-29a), 4.62 (1H, s, H-29b), 3.63 (1H, td,= 18.0, 6.0 Hz, H-2), 3.05 (1H, td,= 12.0, 6.0 Hz, H-19), 2.91 (1H, d,= 18.0 Hz, H-3), 2.34 (1H, td,= 12.6, 3.6 Hz, H-13), 1.72 (3H, s, H-30), 1.64 (1H, t,= 11.3 Hz, H-18), 1.03 (3H, s, H-27), 1.01 (3H, s, H-23), 0.99 (3H, s, H-26), 0.94 (3H, s, H-25), 0.80 (3H, s, H-24)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 180.2 (C-28), 152.0 (C-20), 110.2 (C-29), 84.4 (C-3), 69.7 (C-2), 57.5 (C-17), 56.8 (C-5), 52.0 (C-9), 50.4 (C-18), 48.2 (C-19), 48.1 (C-1), 43.6 (C-14), 42.0 (C-8), 40.5 (C-4), 39.6 (C-10), 39.5 (C-13), 38.2 (C-22), 35.5 (C-7), 33.4 (C-16), 31.7 (C-21), 30.8 (C-15), 29.1 (C-23), 26.8 (C-12), 22.2 (C-11), 19.5 (C-30), 19.5 (C-6), 17.9 (C-25), 17.2 (C-24), 16.7 (C-26), 15.1 (C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[7]，故鑒定化合物4為麥珠子酸。

化合物5：白色粉末；ESI-MS/: 469 [M＋H]+，分子式C29H40O5；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.27 (1H, s, H-1), 5.37 (1H, s, H-12), 2.78 (1H, m, H-6a), 2.55 (1H, s, H-18), 2.54 (1H, overlapped, H-16a), 2.33 (1H, m, H-6b), 2.26 (1H, m, H-11a), 1.96 (3H, s, H-23), 1.93 (1H, m, H-9), 1.86 (1H, m, H-22a), 1.74 (2H, overlapped, H-15a, 22b), 1.70 (1H, m, H-11b), 1.63 (3H, overlapped, H-7, 16b), 1.41 (1H, m, H-20), 1.33 (2H, m, H-21), 1.29 (3H, s, H-25), 1.20 (3H, s, H-30), 1.18 (3H, s, H-27), 1.10 (3H, s, H-26), 1.02 (1H, brs, H-15b), 0.92 (3H, d,= 6.0 Hz, H-29)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 183.3 (C-28), 182.3 (C-3), 168.2 (C-5), 146.4 (C-2), 140.5 (C-13), 129.1 (C-12), 127.7 (C-4), 127.6 (C-1), 73.4 (C-19), 55.4 (C-18), 49.6 (C-17), 46.4 (C-9), 44.9 (C-10), 43.6 (C-14), 43.1 (C-20), 41.3 (C-8), 38.8 (C-22), 36.1 (C-7), 30.0 (C-15), 27.2 (C-30), 27.0 (C-21), 26.8 (C-11), 26.6 (C-16), 26.1 (C-6), 24.3 (C-27), 21.7 (C-25), 17.3 (C-26), 16.5 (C-29), 10.7 (C-23)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[8]，故鑒定化合物5為negundonorin A。

化合物6：黃色無(wú)定形粉末；ESI-MS/: 595 [M＋H]+，分子式C27H30O15；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 8.09 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.88 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3′, 5′), 6.41 (1H, d,= 1.8 Hz, H-8), 6.21 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 5.04 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′′), 4.52 (1H, d,= 1.3 Hz, H-1′′′), 3.72 (1H, dd,= 10.3, 5.7 Hz, H-6a′′), 3.39 (1H, dd,= 10.3, 6.8 Hz, H-6b′′), 3.80～3.27 (8H, m, sugar-H), 1.18 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 179.5 (C-4), 166.0 (C-7), 162.9 (C-5), 161.5 (C-4′), 159.2 (C-2), 158.4 (C-9), 135.6 (C-3), 132.3 (C-2′，C-6′), 122.5 (C-1′), 116.0 (C-3′，C-5′), 105.5 (C-10), 105.4 (C-1′′), 101.8 (C-1′′′), 99.9 (C-6), 94.8 (C-8), 75.2 (C-5′′), 74.9 (C-3′′), 73.7 (C-4′′′), 72.9 (C-2′′), 72.2 (C-3′′′), 72.0 (C-2′′′), 70.0 (C-4′′), 69.6 (C-5′′′), 67.3 (C-6′′), 17.8 (C-6′′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9]，故鑒定化合物6為山柰酚-3--刺槐二糖苷。

化合物7：黃色無(wú)定形粉末；ESI-MS/: 595 [M＋H]+，分子式C30H26O13；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.98 (2H, d,= 8.9 Hz, H-2′, 6′), 7.39 (1H, d,=16.0 Hz, H-3′′′), 7.29 (2H, d,= 8.6 Hz, H-5′′′, 9′′′), 6.79 (4H, m, H-3′, 5′, 6′′′, 8′′′), 6.29 (1H, brs, H-8), 6.12 (1H, brs, H-6), 6.07 (1H, d,= 16.0 Hz, H-2′′′), 5.25 (1H, t,= 3.8 Hz, H-1′′), 4.31 (1H, dd,= 2.2, 12.0 Hz, H-6a′′), 4.19 (1H, dd,= 6.6, 12.0 Hz, H-6b′′), 3.48 (4H, m, H-2′′～5′′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 179.3 (C-4), 168.7 (C-1′′′), 165.7 (C-7), 162.8 (C-5), 161.4 (C-4′), 161.0 (C-7′′′), 159.2 (C-2), 158.2 (C-9), 146.4 (C-3′′′), 135.1 (C-3), 132.1 (C-2′, 6′), 131.0 (C-5′′′, 9′′′), 126.9 (C-4′′′), 122.6 (C-1′), 116.6 (C-6′′′, 8′′′), 115.9 (C-3′, 5′), 114.6 (C-2′′′), 105.5 (C-10), 103.8 (C-1′′), 99.8 (C-6), 94.7 (C-8), 77.9 (C-2′′), 75.7 (C-5′′), 75.6 (C-3′′), 71.6 (C-4′′), 64.2 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[10]，故鑒定化合物7為椴樹(shù)苷。

化合物8：黃色無(wú)定形粉末；ESI-MS/: 303 [M＋H]+，分子式C15H10O7；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 7.67 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2′), 7.54 (1H, dd,= 8.5, 2.2 Hz, H-6′), 6.90 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5′), 6.43 (1H, d,= 1.9 Hz, H-8), 6.20 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 176.2 (C-4), 164.2 (C-7), 160.9 (C-9), 156.6 (C-5), 148.0 (C-4′), 147.2 (C-2), 145.3 (C-3′), 136.1 (C-3), 122.4 (C-1′), 120.5 (C-6′), 116.0 (C-5′), 115.4 (C-2′), 103.4 (C-10), 98.5 (C-6), 93.8 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11]，故鑒定化合物8為槲皮素。

化合物9：淡黃色無(wú)定形粉末；ESI-MS/: 435 [M－H]?，分子式C21H24O10；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.06 (2H, d,= 1.8 Hz, H-2, 6), 6.68 (2H, d,= 2.0, 8.4 Hz, H-3, 5), 6.18 (1H, d,= 8.5 Hz, H-3′), 5.95 (1H, d,= 2.0 Hz, H-5′), 5.03 (1H, d,= 7.7 Hz, H-1′′), 3.90 (1H, dd,= 2.2, 12.1 Hz, H-6a′′), 3.71 (1H, dd,= 5.5, 12.1 Hz, H-6b′′), 3.45 (4H, m, H-2′′～5′′), 3.37 (2H, m, H-α), 2.88 (2H, m, H-β)；13C- NMR (150 MHz, CD3OD): 206.6 (C=O), 167.6 (C-4′), 166.0 (C-6′), 162.4 (C-2′), 156.4 (C-4), 133.9 (C-1), 130.4 (C-2, 6), 116.1 (C-3, 5), 106.8 (C-1′), 102.1 (C-1′′), 98.4 (C-5′), 95.5 (C-3′), 78.5 (C-3′′), 78.5 (C-5′′), 74.8 (C-2′′), 71.1 (C-4′′), 62.5 (C-6′′), 47.0 (C-α), 30.9 (C-β)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[12]，故鑒定化合物9為根皮苷。

化合物10：黃色無(wú)定形粉末；ESI-MS/: 305 [M＋H]+，分子式C15H12O7；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.35 (2H, d,= 12.0 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (2H, d,= 12.0 Hz, H-3′, 5′), 5.85 (1H, s, H-8), 4.96 (1H, d,= 11.6 Hz, H-2), 4.52 (1H, d,= 6.0 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 198.1 (C-4), 165.3 (C-5), 164.5 (C-9), 159.2 (C-4′), 130.4 (C-2′, 6′), 129.4 (C-1′), 116.1 (C-3′, 5′), 101.5 (C-10), 96.6 (C-8), 84.9 (C-2), 73.6 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13]，故鑒定化合物10為5,6,7,4′-四羥基- 黃酮醇。

化合物11：黃色針狀結(jié)晶（甲醇）；mp 237～241 ℃；ESI-MS/: 289 [M＋H]+，分子式C15H12O6；1H NMR (600 MHz, CD3OD): 7.35 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.83 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′, H-5′), 5.92 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 5.88 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 4.97 (1H, d,= 11.5 Hz, H-2), 4.54 (1H, d,= 11.5 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 198.5 (C-4), 168.7 (C-7), 165.3 (C-5), 164.5 (C-9), 159.2 (C-4′), 130.4 (C-2′, 6′), 129.3 (C-1′), 116.1 (C-3′, 5′), 101.9 (C-10), 97.3 (C-6), 96.3 (C-8), 85.0 (C-2), 73.6 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[14]，故鑒定化合物11為香橙素。

化合物12：白色粉末；ESI-MS/: 395 [M＋H]+，分子式C18H18O10；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.09 (2H, s, H-5, 5′), 3.91 (4H, m, 2×-OCH2-), 0.94 (6H, t,= 7.1 Hz, CH3×2)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 168.3 (C=O), 143.9 (C-4, 4′), 143.5 (C-2, 2′), 137.2 (C-3, 3′), 121.5 (C-6, 6′), 118.4 (C-1, 1′), 109.3 (C-5, 5′), 59.8 (-OCH2-), 12.6 (C-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[15]，故鑒定化合物12為2,2′,3,3′,4,4′-六羥基-6,6′-聯(lián)苯二甲酸二乙酯。

化合物13：無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇）；mp 151～154 ℃；ESI-MS/: 197 [M－H]?，分子式C9H10O5；1H NMR (600 MHz, DMSO-6): 6.96 (2H, s, H-2, 6), 4.21 (2H, q,= 7.1 Hz, CH2), 1.27 (3H, t,= 7.2 Hz, CH3)；13C NMR (150 MHz, DMSO-6): 166.3 (C=O), 145.8 (C-3, 5), 138.6 (C-4), 120.1 (C-1), 108.9 (C-2, 6), 60.5 (C-CH2), 14.7 (C-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，故鑒定化合物13為沒(méi)食子酸乙酯。

化合物14：白色針狀結(jié)晶（甲醇）；mp 251～252 ℃；ESI-MS/: 171 [M＋H]+，分子式C7H6O5；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.06 (2H, s, H-2, 6)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 170.4 (C-7), 146.4 (C-3, 5), 139.6 (C-4), 122.0 (C-1), 110.3 (C-2, 6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，故鑒定化合物14為沒(méi)食子酸。

化合物15：白色針狀結(jié)晶（甲醇）；mp 175～177 ℃；＋17° (0.1, MeOH)；ESI-MS/: 289 [M－H]?，分子式C15H14O6；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.83 (1H, d,= 1.6 Hz, H-2′), 6.76 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.72 (1H, dd,= 8.0, 1.6 Hz, H-6′), 5.92 (1H, d,= 2.2Hz, H-8), 5.85 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 4.56 (1H, d,= 7.5 Hz, H-2), 3.97 (1H, m, H-3), 2.84 (1H, dd,= 16.0, 5.4 Hz, H-4a), 2.50 (1H, dd,= 16.0, 8.2 Hz, H-4b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 158.0 (C-7), 157.7 (C-9), 157.1 (C-4′), 146.4 (C-5), 146.4 (C-3′), 132.4 (C-1′), 120.2 (C-5′), 116.2 (C-2′), 115.4 (C-6′), 101.0 (C-10), 96.4 (C-8), 95.6 (C-6), 83.0 (C-2), 69.0 (C-3), 28.7 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17-18]，故鑒定化合物15為 (＋)-兒茶素。

化合物16：白色針狀結(jié)晶（甲醇）；mp 214 ℃；ESI-MS/: 137 [M－H]?，分子式C7H6O3；1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.81 (2H, d,= 8.8 Hz, H-2, 6), 6.85 (2H, d,= 8.8 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 167.6 (C-7), 161.9 (C-4), 132.0 (C-2, 6), 121.7 (C-1), 115.5 (C-3, 5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[11]，故鑒定化合物16為對(duì)羥基苯甲酸。

4 討論

覆盆子是一味傳統(tǒng)補(bǔ)腎中藥，以其補(bǔ)腎益精的功效而備受青睞，歷代醫(yī)家多用其治療腎虛遺尿、陽(yáng)痿早泄、遺精滑精、肝氣不足等疾病。中醫(yī)認(rèn)為機(jī)體五臟之間關(guān)系密切，腎為先天之本，腎精充盛，肝、脾、肺才能運(yùn)作正常?；诟才枳拥膫鹘y(tǒng)功效，以現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)研究其化學(xué)成分和藥理活性，有助于從中篩選出更多生物活性成分。本研究主要報(bào)道了覆盆子中的三萜類(lèi)、黃酮類(lèi)和酚酸類(lèi)化合物，它們都是覆盆子的重要組成成分。其中三萜類(lèi)化合物是懸鉤子屬植物的特征性成分，它們結(jié)構(gòu)相近，主要為烏蘇烷型和齊墩果烷型骨架，多在C-19位有羥基取代，更深入的構(gòu)效關(guān)系研究將有助于闡釋三萜類(lèi)化合物是覆盆子最具特色的功能性成分這一論點(diǎn)?，F(xiàn)代研究表明，氧化應(yīng)激與多種生理和病理過(guò)程緊密相關(guān)，包括衰老、炎癥、癌癥和免疫反應(yīng)等。抗氧化物質(zhì)能夠清除自由基，同時(shí)也能夠減弱炎癥反應(yīng)，而黃酮類(lèi)和酚酸類(lèi)化合物則具有良好的抗氧化活性，這為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用覆盆子藥用資源提供了科學(xué)依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents from

WANG Jing-yi1, YU Jun-dong1, CHEN Yue1, DU Jun2, WU Xiao-hong3, LI Yi-ming1, WANG Rui1, CHEN Liang2, WU Ying-chun1

1. School of Pharmacy, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 2. Amway (Shanghai) Technology Development Co., Ltd., Shanghai 201203, China 3. Amway (China) Botanical R&D Center, Wuxi 214145, China

To study the chemical constituents from.The chemical constituents of fruits ofwere isolated and purified by reflux-extraction, solvent extraction and column chromatography such as silica gel column chromatography, ODS column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography and semi-preparative RP-HPLC. The structures of all compounds were identified by modern spectrum technology (ESI-MS,1H-NMR,13C-NMR).Sixteen compounds were isolated from the fruits ofand identified as butyl-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-hydroxypropanoate (1), 1β,2α,19α-trihydroxy-3-oxo-12-ursen-28-oic acid (2), 3β,19α-dihydroxy-1-oxo-olean-12-en-28-oic acid (3), alphitolic acid (4), negundonorin A (5), kaempferol-3--robinobioside (6), tiliroside (7), quercetin (8), phlorizin (9), 5,6,7,4′-tetrahydroxy-flavonol (10), aromadendrin (11), diethyl-2,2′,3,3′,4,4′-hexahydroxybiphenyl-6,6′-dicarboxylate (12), ethyl gallate (13), gallic acid (14), (+)-catechin (15), and 4-hydroxybenzoic acid (16).Among them, compound 1 is a new simple phenol named (±)- butylchinphenolate, compounds 2—5, 10 are isolated from this plant for the first time.

;Hu; racemate; (±)-butylchinphenolate; 1β,2α,19α-trihydroxy-3-oxo-12-ursen-28-oic acid; alphitolic acid; negundonorin A; 5,6,7,4′-tetrahydroxy-flavonol

R284.1

A

0253 - 2670(2022)13 - 3897 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.13.002

2021-11-23

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81973458）；上海市科委科技創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃（18401931100）

王靜宜（1997—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)。E-mail: 13764809054@163.com

吳迎春，男，講師。E-mail: wuyingchun2013@163.com

陳 亮，男，博士，高級(jí)營(yíng)養(yǎng)研究科學(xué)家。E-mail: clark.chen@amway.com

[責(zé)任編輯 王文倩]