氣相色譜同時(shí)測(cè)定紫蘇葉油中紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛含量

溫方方 張昊 姜鵬

摘 要 目的：建立紫蘇葉油中紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛含量的氣相色譜（GC）測(cè)定方法。方法：GC檢測(cè)采用HP-5毛細(xì)管柱及氫火焰離子化檢測(cè)器。結(jié)果：紫蘇烯、紫蘇酮、紫蘇醛分別在0.07～0.75、0.08～0.79、0.08～0.83 mg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系；紫蘇烯、紫蘇酮、紫蘇醛的平均加樣回收率分別為104.0%、101.4%、100.2%，其RSD分別為1.36%、2.83%、2.96%。 結(jié)論：采用氣相色譜法可同時(shí)測(cè)定紫蘇葉油中的紫蘇醛、紫蘇酮和紫蘇烯含量，方法簡便，快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可快速篩選不同產(chǎn)地紫蘇葉的化學(xué)型，為正氣片中紫蘇葉油的來源選擇提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞 紫蘇葉油 紫蘇烯 紫蘇酮 紫蘇醛

中圖分類號(hào)：O657.71； R286 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2022）11-0076-04

引用本文 溫方方， 張昊， 姜鵬. 氣相色譜同時(shí)測(cè)定紫蘇葉油中紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛含量[J]. 上海醫(yī)藥， 2022， 43（11）： 76-79.

Simultaneous determination of perillene， perillaketone and perillaldehyde in perilla oil by GC

WEN Fangfang， ZHANG Hao， JIANG Peng（Shanghai Hutchison Pharmaceuticals Limited， Shanghai Engineering Research Center for Innovation of Solid Preparation of TCM， Shanghai 201401， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the simultaneous determination of perillene， perillaketone and perillaldehyde in perilla leaf oil. Methods： An HP-5 capillary column and a hydrogen flame ionization detector were adopted for gas chromatography （GC）. Results： Perillene， perillaketone and perillaldehyde all showed a good linear relationship with the integral value of peak area in the concentration range of 0.07-0.75， 0.08-0.79， 0.08-0.83 mg/mL and their average recovery was 104.0%， 101.4% and 100.2% with RSD 1.36%， 2.83% and 2.96%， respectively. Conclusion： The content of perillene， perillaketone and perillaldehyde in perilla leaf oil can be simultaneously determined by GC. The method is simple， rapid， accurate and reproducible， can quickly screen the chemotypes of perilla leaves from different origins and provide the basis for the source selection of perilla leaf oil in Zhengqi tablets.

KEY WORDS perilla leaf oil； perillene； perillaketone； perillaldehyde

紫蘇葉為唇形科植物紫蘇Perilla frutescens （L.） Britt.的干燥葉（或帶嫩枝）。性溫，味辛，具有解表散寒，行氣和胃的功效。用于風(fēng)寒感冒，咳嗽嘔惡，妊娠嘔吐，魚蟹中毒等[1]。紫蘇葉油為紫蘇葉經(jīng)水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油。紫蘇葉油為正氣片處方中的藥物，收載于《中國藥典》2020版[1]788，功能主治為發(fā)散風(fēng)寒，化濕和中，用于傷風(fēng)感冒，頭痛胸悶，吐血腹脹。根據(jù)紫蘇葉油所含化學(xué)成分類型的不同可分為8個(gè)化學(xué)型：紫蘇酮（PK）型、D-檸檬烯（DLP）型、胡椒酮（PT）型、肉豆蔻素（MS）型、芹菜醇（AL）型、欖香素（EM）型、脫氫紫蘇酮（DEK）型及紫蘇醛（PA）型[2]，其代表成分有紫蘇醛、紫蘇烯、紫蘇酮、反檸檬醛等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，紫蘇葉油具有抑菌、提高免疫系統(tǒng)功能、中樞抑制作用、小腸推進(jìn)作用、抗氧化作用、抗腫瘤、解熱、抗炎等作用[3-4]。

根據(jù)實(shí)際檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地紫蘇葉提取的紫蘇葉油所含化學(xué)成分差異較大。有文獻(xiàn)報(bào)道了紫蘇葉油中的組分含量測(cè)定，如徐道情等[5]對(duì)紫蘇葉油中的紫蘇酮進(jìn)行了含量測(cè)定，耿榕徽等[6]對(duì)紫蘇葉中紫蘇醛進(jìn)行了含量測(cè)定，張琛武等[7]對(duì)PA型紫蘇中酚酸和黃酮類成分進(jìn)行了含量測(cè)定，余曉燕等[8]對(duì)紫蘇梗中迷迭酸的含量進(jìn)行了測(cè)定，閆鈺等[9]采用HPLC對(duì)紫蘇葉中紫蘇酮、咖啡酸等成分進(jìn)行了含量測(cè)定，但目前尚未發(fā)現(xiàn)采用氣相色譜（GC）對(duì)紫蘇葉油中紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛含量同時(shí)測(cè)定的方法。本研究采用GC對(duì)紫蘇葉油中的紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，為正氣片等含紫蘇葉油的制劑產(chǎn)品原料產(chǎn)地選擇提供參考。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

7890氣相色譜儀（美國Agilent公司）；XSR205 DU/A電子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）。

紫蘇醛（含量為95.1%）、紫蘇烯（含量為98.9%）對(duì)照品均購自中國食品藥品檢定研究院；紫蘇酮（含量為98.6%）對(duì)照品購自TLC Pharmachem公司；正己烷（分析純，上海豪申化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品

不同產(chǎn)地紫蘇葉油樣品由上海和黃藥業(yè)有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

采用以交聯(lián)5%苯基甲基聚硅氧烷為固定相的HP-5毛細(xì)管柱（柱長為30 m，內(nèi)徑為0.32 mm，膜厚度為0.25 mm）及氫火焰離子化檢測(cè)器；程序升溫：初始溫度為60 ℃，保持10 min，以每分鐘8 ℃的速率升溫至115℃，保持12 min，再以每分鐘20 ℃的速率升溫至230 ℃，保持5 min。分流比30∶1。

1.3.2 溶液制備

1）對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 取紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛對(duì)照品適量，加無水乙醇-正己烷（1∶1）制成每1 mL分別含紫蘇烯7.48 mg、紫蘇酮7.90 mg、紫蘇醛8.34 mg的溶液。

2）供試品溶液 取紫蘇葉油適量，加無水乙醇-正己烷（1∶1）制成每1 mL含紫蘇葉油10 mg的溶液。

1.4 系統(tǒng)適用性考察

1.4.1 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液各1 mL，進(jìn)樣測(cè)定。

1.4.2 線性關(guān)系考察

分別量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.8、1 mL于10 mL量瓶中，并分別加無水乙醇-正己烷（1∶1）定容至刻度，搖勻，制成對(duì)照品溶液。量取1 mL，注入氣相色譜儀檢測(cè)，以對(duì)照品峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）、對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸。

1.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于室溫存放0、2、4、6、8、12 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。

1.4.4 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次測(cè)定。

1.4.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的紫蘇葉油樣品平行制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。

1.4.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取同一批號(hào)的紫蘇葉油樣品9份，分別加入低、中、高三種濃度的對(duì)照品溶液，混勻后進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率和RSD值。

2 結(jié)果

2.1 專屬性試驗(yàn)

供試品與對(duì)照品保留時(shí)間一致，色譜峰分離度良好（圖1）。

2.2 線性關(guān)系考察

紫蘇烯、紫蘇酮、紫蘇醛分別在0.07～0.75、0.08～0.79、0.08～0.83 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，回歸方程分別為：Y=1.415 5+484.237 2X、Y=-3.234 1+431.844 6X、Y=-3.568 5+467.612 5X，其相關(guān)系數(shù)分別為r=0.999 8、r=0.999 9、r=0.999 9。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在室溫存放不同時(shí)間時(shí)測(cè)定的紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛峰面積積分值RSD分別為1.14%、1.51%、1.18%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛峰面積積分值RSD分別為1.12%、1.71%、1.35%，表明該方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛含量的RSD分別為2.75%、2.81%、3.00%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛的平均加樣回收率分別為104.1%、101.3%、100.2%，均在90%～108%范圍內(nèi)；其RSD分別為1.38%、2.83%、2.96%。這些均符合《中國藥典》2020年版四部指導(dǎo)原則9101的要求（表1）。

2.7 不同產(chǎn)地紫蘇葉油中紫蘇烯、紫蘇酮和紫蘇醛的含量測(cè)定

分別取不同產(chǎn)地12批紫蘇葉油進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明，江西吉水、山東煙臺(tái)、江蘇灌云、河南南陽等產(chǎn)地為紫蘇酮型紫蘇葉，主要化學(xué)成分為紫蘇酮，其中江西吉水紫蘇葉油中紫蘇酮含量最高（871.62 mg/g）；而吉林產(chǎn)地為典型的紫蘇醛型，紫蘇葉油中紫蘇醛含量高達(dá)541.68～721.65 mg/g（表2）。

3 討論

3.1 產(chǎn)地與揮發(fā)油化學(xué)型

紫蘇葉揮發(fā)油中的主要成分有紫蘇醛、紫蘇烯、紫蘇酮等，不同產(chǎn)地紫蘇葉化學(xué)成分類型差異較大，難以統(tǒng)一限度標(biāo)準(zhǔn)，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]。

3.2 色譜柱的選擇

本研究曾考察了DB-624、DB-5、HP-5等不同型號(hào)的毛細(xì)管柱對(duì)氣相色譜測(cè)定的影響，結(jié)果表明HP-5柱的分離效果較好，可以達(dá)到基線分離。

3.3 藥材存放時(shí)間

本研究還考察了紫蘇葉藥材的常溫存放時(shí)間和紫蘇葉油得率之間的關(guān)系，結(jié)果表明：存放6個(gè)月之后，吉林產(chǎn)地的紫蘇葉油提取得率明顯下降。提示為了保證紫蘇葉油的得率，應(yīng)注意紫蘇葉存放時(shí)間不宜過久，以免降低得油率。

本研究建立的方法可同時(shí)快速檢測(cè)紫蘇葉油中的化學(xué)成分類型，為正氣片等含有紫蘇葉油的制劑產(chǎn)品確定原料化學(xué)型和產(chǎn)地提供依據(jù)。至于不同化學(xué)型的紫蘇葉油所制成的制劑產(chǎn)品在功效上是否有差異，還需進(jìn)一步通過藥效對(duì)比研究來確定。

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