羅堆多吉顆粒提取與純化工藝優(yōu)化研究*

澤仁拉姆 央卓瑪 袁瑞瑛 卓瑪東智 王聚樂 周毛措

西藏大學(xué) 西藏拉薩 850000

羅堆多吉顆粒由羅堆多吉（藏黨參）、甘松、木香、寬筋藤、齒苞黃堇（陸額）、藏荊芥等藏藥組成，是藏醫(yī)治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的經(jīng)驗(yàn)方[1]，其可明顯改善癥狀，具有標(biāo)本兼治的特點(diǎn)[2，3]。為了提高本復(fù)方使用的有效性和便利性，本文根據(jù)復(fù)方有效成分性質(zhì)，采用正交試驗(yàn)法對其醇提水沉工藝進(jìn)行研究，為后期生產(chǎn)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

JT1003D分析天平（上海力辰邦西儀器有限公司）；SXKW 調(diào)溫型電熱套（北京永光明醫(yī)療儀器有限公司）；RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；Agilent 1220 Infinity液相色譜系統(tǒng)（安捷倫科技，美國）。

1.2 材料

木犀草素、甘松新酮對照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-20102418、MUST-20110606）；甲醇、乙腈為色譜純，超純水，其余試劑均為分析純；實(shí)驗(yàn)所用藥材均購自西藏凌云生物科技開發(fā)有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 木犀草素與甘松新酮的含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備

精密稱取木犀草素5.80mg、甘松新酮5.10mg，溶于甲醇中，使木犀草素濃度為0.58mg/mL，甘松新酮濃度為0.51mg/mL，混合即得對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

稱取復(fù)方藥材適量，加入10 倍70%乙醇回流提取兩次，每次2h，過濾，濃縮即得。

2.1.3 色譜條件

HPLC 條件：流速：0.8ml/min；檢測波長250nm；進(jìn)樣量：20μl；Thermo Hypersil GOLD C18 液相色譜柱(250x4.6mm，5μm)；流動相=乙腈(B)：水(A)，0～10min，5-15%(B)，10～15min 15～30%(B)15～25min，30～65%(B)，25～35min，65-75%(B)。

2.1.4 方法學(xué)考察

2.1.4.1 線性關(guān)系考察

以對照品濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以對照品峰面積為縱坐標(biāo)，可得木犀草素在18.125～580μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：y=17.087x+1.5087，R2=0.9997。甘松新酮在15.94～510μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：y=16.145x+6.014，R2=0.9996。

2.1.4.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對照品溶液適量，重復(fù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積。結(jié)果顯示木犀草素RSD 為 0.73%，甘松新酮RSD 為 0.86%，表明儀器精密度良好。

2.1.4.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試液連續(xù)測定6 次，記錄木犀草素和甘松新酮峰面積的RSD 值分別為1.90%和1.10%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別于0、2、4、8、12、24 h 吸取適量供試液，進(jìn)樣，測得木犀草素和甘松新酮峰面積的RSD 值分別為0.94%和0.22%。表明供試液在24h 內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.1.4.5 加樣回收試驗(yàn)

木犀草素和甘松新酮的平均加樣回收率為98.06%和100.41%，RSD 值分別為0.98%和1.05%。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化醇提工藝

2.2.1 醇提工藝設(shè)計[4-7]

考察乙醇濃度(%)、料液比、時間(h)對木犀草素、甘松新酮含有量及浸膏率的影響，設(shè)計如表1 所示。

表1 醇提工藝因素水平

2.2.2 醇提工藝正交試驗(yàn)結(jié)果分析

見圖1，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3。

圖1 羅堆多吉顆粒醇提工藝HPLC 色譜圖

表2 醇提工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 醇提工藝方差分析

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)化水沉工藝

2.3.1 水沉工藝設(shè)計[8-10]見 表4

表4 水沉工藝因素水平

2.3.2 水沉工藝正交試驗(yàn)結(jié)果及統(tǒng)計分析

HPLC 色譜圖見圖2，正交試驗(yàn)結(jié)果見表5，方差分析見表6

圖2 羅堆多吉顆粒醇提水沉工藝HPLC 色譜圖

表5 水沉工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表6 水沉工藝方差分析

2.4 醇提水沉工藝驗(yàn)證見表7

表7 提取工藝驗(yàn)證結(jié)果

3 結(jié)論

本文在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交設(shè)計對羅堆多吉顆粒的提取純化工藝進(jìn)行優(yōu)化。以主要有效成分木犀草素、甘松新酮以及浸膏得率為指標(biāo)，篩選了羅堆多吉顆粒最佳醇提工藝為8 倍量80%乙醇，提取2 次，每次2h；最佳水沉工藝為加水量40 倍，藥液相對密度1.1，靜置時間16h。