甘松和匙葉甘松的比較研究

李艷忙，胡峻，喬晶，劉爽，張瑜，秦振嫻，劉勇

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102)

·基礎(chǔ)研究·

甘松和匙葉甘松的比較研究

李艷忙，胡峻，喬晶，劉爽，張瑜，秦振嫻，劉勇*

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102)

目的：對(duì)甘松和匙葉甘松的性狀、顯微和含量方面進(jìn)行鑒別分析，比較甘松不同品種的差異。方法：利用顯微鏡對(duì)兩個(gè)品種的粉末進(jìn)行鑒別，HPLC對(duì)不同品種的甘松中甘松新酮的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：甘松和匙葉甘松在性狀上的區(qū)別在于甘松的基生葉細(xì)長(zhǎng)，花冠較長(zhǎng)，花序主軸和側(cè)軸多明顯伸長(zhǎng)，果實(shí)無(wú)毛。甘松藥材的根莖較短，彎曲，被有片狀葉鞘。粉末特征基本一致，主要區(qū)別在于甘松的石細(xì)胞呈類圓形，而匙葉甘松的石細(xì)胞為長(zhǎng)條形。甘松中甘松新酮的含量比匙葉甘松中甘松新酮的含量偏高。結(jié)論：甘松和匙葉甘松在性狀、顯微和成分的含量方面有一定的差異，研究為甘松資源的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

甘松；匙葉甘松；性狀鑒別；顯微鑒別；HPLC

甘松為敗醬科植物甘松NardostachysjatamansiDC.的干燥根及根莖，具有理氣止痛，開郁醒脾的功能[1]。現(xiàn)代藥理研究表明甘松具有抗心律失常、抗心肌缺血、鎮(zhèn)靜、解痙、抗癲癇、降壓、抗抑郁、抗菌等作用[2]。甘松首載于唐代《本草拾遺》，1963年被收入《中華人民共和國(guó)藥典》。甘松包括3個(gè)品種：甘松N.chinensisBet.、匙葉甘松N.jatamansiDC.和大花甘松[3-4]N.grandifloraDC.，其中大花甘松主要分布于尼泊爾、錫金及印度北部[5]。國(guó)內(nèi)主產(chǎn)甘松、匙葉甘松，主要分布在甘肅、青海、四川和云南等地，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上流通的主要是甘松和匙葉甘松，易混用，不易辨別。甘松新酮是甘松的特有成分，也是其主要活性成分。耿曉萍等[6]對(duì)甘松新酮的含量進(jìn)行測(cè)定，表明不同產(chǎn)區(qū)的藥材中甘松新酮含量差異較大，然而缺少對(duì)差異原因的研究。因此本實(shí)驗(yàn)收集不同產(chǎn)地的藥材，從藥材性狀、粉末鑒別和甘松新酮含量方面進(jìn)一步對(duì)甘松和匙葉甘松進(jìn)行比較，并對(duì)甘松新酮含量差異原因進(jìn)行分析，為甘松資源的充分利用提供依據(jù)。

1 儀器和藥材

1.1 儀器

酒精燈，鑷子，載玻片，蓋玻片，顯微鏡；Waters-500高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)；KQ5200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；Sartorius-BS110S 型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；水合氯醛、乙腈、甲醇(色譜純，美國(guó)Fisher公司)，娃哈哈純凈水，甘松新酮對(duì)照品自制(純度大于98%)。

1.2 藥材

甘松藥材于2013年7—8月在甘肅、四川、青海地區(qū)采集得到，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)石晉麗教授鑒定為甘松N.chinensisBet.和匙葉甘松N.jatamansi。甘松藥材來(lái)源信息見(jiàn)表1。

表1 甘松藥材來(lái)源信息

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別

2.1.1 甘松 原植物：根莖短，葉叢生，靠根處被有葉基纖維，稀疏，呈細(xì)線狀，淺棕色，基生葉葉片窄，呈倒披針形或倒長(zhǎng)披針形，尖端漸尖，頭狀聚散花序。花長(zhǎng)于苞片，花冠較長(zhǎng)，花后花序主軸和側(cè)軸明顯伸長(zhǎng)，果實(shí)較光禿。藥材：有氣味，根較短，上粗下細(xì)，為紅棕色，彎曲，多皺縮。根莖上附有多層葉殘基，暗棕色或更深，呈片狀。質(zhì)脆，易折斷。有側(cè)根和須根。見(jiàn)圖1。

2.1.2 匙葉甘松 原植物與甘松的主要區(qū)別在于匙葉甘松的根莖斜伸，葉基纖維較密集，莖部被毛，花冠管較寬短。花后花序主軸和側(cè)軸伸長(zhǎng)不明顯，果實(shí)被毛[7]。藥材主根黃棕色，較直立。根莖較長(zhǎng)，外被有多層葉鞘殘基，呈纖維狀，外層黃褐色，內(nèi)層顏色稍淺，較柔軟。有主根分支，少有須根。質(zhì)堅(jiān)硬，不易折斷。見(jiàn)圖1。

圖1 甘松和匙葉甘松藥材性狀特征

2.2 藥材粉末顯微鑒別

取甘松和匙葉甘松兩種藥材粉末少許，分別放置在載玻片上，滴2～3滴水合氯醛溶液，加熱透明后，放在顯微鏡下觀察，見(jiàn)圖2。

圖2 甘松和匙葉甘松粉末的顯微鑒別特征

甘松粉末為暗棕色，網(wǎng)紋或梯紋導(dǎo)管，多斷裂，成束排列，其旁有時(shí)可見(jiàn)細(xì)長(zhǎng)性的木纖維，木纖維壁薄，兩端較平整。木栓細(xì)胞為不規(guī)則多角形，壁薄，暗棕色，內(nèi)有黃棕色油滴?；~殘基碎片細(xì)胞呈長(zhǎng)方形，黃棕色，壁呈念珠狀增厚，可見(jiàn)波紋狀紋理，木纖維較細(xì)長(zhǎng)，常附著在導(dǎo)管旁邊。石細(xì)胞為類圓形或不規(guī)則多角形，壁較厚，單個(gè)居多。

匙葉甘松粉末為黃棕色，網(wǎng)紋導(dǎo)管較多，木栓細(xì)胞，基生葉殘基碎片和甘松特征基本一致。石細(xì)胞多為長(zhǎng)條形，壁較厚，單個(gè)或成群。

2.3 藥材中甘松新酮含量比較

2.3.1 色譜分析條件 色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：乙腈-水(V/V，65∶35)，流速：0.8 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm，柱溫：25 ℃，進(jìn)樣量為10 μL，在該色譜條件下，甘松新酮的保留時(shí)間是8.006 min，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)按甘松新酮計(jì)算不低于5000，分離效果較好。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的甘松新酮4.36 mg，置10 mL容量瓶中，加入色譜級(jí)甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.436 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取各產(chǎn)地甘松藥材粉末約0.4 g，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入色譜甲醇20 mL，稱定重量，在室溫下超聲提取45 min，靜置冷卻后稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，超聲2次，合并其濾液，取其續(xù)濾液經(jīng)微孔濾膜0.45 μm過(guò)濾，即得供試品溶液。

2.3.4 方法學(xué)考察

2.3.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取甘松新酮對(duì)照品溶液，用色譜甲醇逐漸稀釋成一系列濃度的對(duì)照品溶液，按照2.3.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得甘松新酮峰面積。以對(duì)照品濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程Y=1.848×104X-31.19，r=1.000，線性范圍為0.068～4.36 μg。

A.甘松新酮對(duì)照品；B.甘松樣品；1.甘松新酮。圖3 甘松新酮對(duì)照品與甘松樣品HPLC圖

2.3.4.2 精密度試驗(yàn) 取甘松新酮對(duì)照品，按2.3.1項(xiàng)色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，測(cè)定甘松新酮峰面積，結(jié)果甘松新酮峰面積RSD=0.42%，表明儀器精密度良好。

2.3.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取四川阿壩地區(qū)的甘松6份，按照2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在2.3.1項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算甘松新酮含量的RSD=2.57%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，室溫放置，按2.3.1項(xiàng)色譜條件分別于0、2、4、8、10、12、24 h進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積，計(jì)算甘松新酮峰面積的RSD=1.47%，表明甘松新酮在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的四川阿壩若可和牧場(chǎng)的甘松藥材粉末6份，每份約0.2 g，精密稱量后，加入0.227 mg甘松新酮對(duì)照品，按照2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.3.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 甘松中甘松新酮加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

注：甘松新酮對(duì)照品加入量均為0.227 mg

2.3.5 樣品含量測(cè)定 稱取不同產(chǎn)地的甘松藥材粉末，按2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在2.3.1項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣分析，測(cè)定甘松新酮的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算甘松藥材中甘松新酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 甘松和匙葉甘松中甘松新酮的測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

通過(guò)對(duì)兩種甘松的性狀和粉末顯微鑒別，可以看出匙葉甘松和甘松在性狀特征上差別明顯，匙葉甘松顏色較淺、根莖稍長(zhǎng)、莖葉殘基呈纖維狀、質(zhì)硬、不易折斷，這可能與生長(zhǎng)環(huán)境的氣候、溫濕度、光照等有關(guān)；而粉末顯微的特征可以通過(guò)石細(xì)胞的形狀來(lái)進(jìn)行區(qū)分。這些顯著特征可以用來(lái)解決市場(chǎng)流通中甘松藥材易混淆的問(wèn)題。

高效液相色譜法的測(cè)定結(jié)果表明，兩種甘松中甘松新酮的含量差別較大，甘松中甘松新酮的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.900%，其中甘肅產(chǎn)的甘松新酮含量均相對(duì)較高，最高可達(dá)1.844%；而匙葉甘松主要分布在四川，甘松新酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.114%～0.356%，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.219%。由此可以看出，甘松中甘松新酮的含量總體比匙葉甘松中的甘松新酮含量高。2009年對(duì)甘松資源進(jìn)行調(diào)查，研究發(fā)現(xiàn)，甘松和匙葉甘松的生長(zhǎng)環(huán)境不同[8]。本課題組在收集兩種甘松樣本時(shí)也對(duì)其生長(zhǎng)環(huán)境進(jìn)行了調(diào)查，發(fā)現(xiàn)甘松生長(zhǎng)環(huán)境的經(jīng)緯度相對(duì)較高，海拔在3400～3800 m，黑土壤，較松軟。而匙葉甘松所處的經(jīng)緯度相對(duì)較低，基本都在海拔4000 m以上，為沙質(zhì)土壤，多堅(jiān)硬。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)的含量比較發(fā)現(xiàn)，匙葉甘松雖生長(zhǎng)在海拔較高的環(huán)境中，但主要活性成分的含量并不高，說(shuō)明甘松新酮的含量可能與海拔高度、土壤、品種有關(guān)。2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定甘松和匙葉甘松均作為甘松藥材的來(lái)源，但近年來(lái)由于藥農(nóng)的不合理采挖，肆意破壞甘松資源，又因甘松的生長(zhǎng)環(huán)境所限、人工栽培難度較大，導(dǎo)致甘松現(xiàn)有資源日益貧乏。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甘松栽培時(shí)可以選擇甘松新酮含量較高的甘松和適當(dāng)?shù)暮０胃叨?，這有利于甘松的資源開發(fā)與保護(hù)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：79-80.

[2] 袁捷，韓祖成，王敏，等.中藥甘松研究概況[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，2012，21(16)：57-59.

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[4] 王宗玉，吳征鎰.被子植物幾個(gè)科的植物化學(xué)分類學(xué)——(七)敗醬科的植物化學(xué)分類學(xué)[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·藥學(xué)分冊(cè)，1984(1)：19-20.

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[8] 耿曉萍，劉云召，石晉麗.甘青川三省甘松藥用植物資源調(diào)查[C]//中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第十屆中藥鑒定學(xué)術(shù)會(huì)議暨WHO中藥材鑒定方法和技術(shù)研討會(huì)論文集.北京：中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥鑒定分會(huì)，2010：5.

ComparativeStudyofNardostachyschinensisandN.jatamansi

LIYanmang，HUJun，QIAOJing，LIUShuang，ZHANGYu，QINZhenxian，LIUYong*

(BeijingUniversityofChineseMedicine，SchoolofChinesePharmacy，Beijing100102，China)

Objective：To identifyNardostachyschinensisandN.jatamansifrom the aspect of morphological characteristics and content of nardosinone，and compare the differences between two varieties.Methods：The microscopic analytical method was applied to study the powder samples ofN.chinensisandN.jatamansi，and the content of nardosinone was determined by HPLC.Results：The morphological characteristics of the two varieties were different.The basal leaf ofN.chinensiswas narrow，the corolla was long，and after flowering most inflorescence main axis and lateral axis obvious elongated，the fruit bared.The rhizomes ofN.Chinensiswere short，curved and covered foliated old leaf sheath.The powder characteristics of both varieties were quite similar.The difference reflected in the shape of stone wall，the cell wall of stone cell ofN.chinensiswas circular quadrangle，while that ofN.jatamansiwas quadrangle.The content of nardosinone inN.chinensiswas higher than that ofN.jatamansiDC.Conclusion：There exists some differences in the morphological microscopic characteristics and content of nardosinone betweenN.chinensisandN.jatamansi.The results of the study provides reference for the development and utilization ofNardostachysresources.

Nardostachyschinensis；Nardostachysjatamansi；characters identification；microscopic identification；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.005

2015-03-19)

*

劉勇，教授，研究方向：藥用植物親緣學(xué)、中藥質(zhì)量與開發(fā)；Tel：(010)84738656，E-mail：yliu0126@aliyun.com