頭腹針結(jié)合頸通康對(duì)頸動(dòng)脈狹窄腦血流低灌注模型大鼠干預(yù)機(jī)制研究

周海純，韓曉慶，宋志強(qiáng)，趙 娜，劉一瀟，王東巖，邢學(xué)良△

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040; 3.黑龍江省雞西礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院,黑龍江 雞西 158199)

隨著人口老齡化的到來及人們生活環(huán)境的改變,頸動(dòng)脈狹窄(Carotidarterystenosis，CAS)成為一種臨床常見疾病。通過流行病學(xué)調(diào)查顯示，無臨床癥狀的重度頸動(dòng)脈狹窄在人群中有較高的發(fā)病率，已達(dá)到0 %～3.1 %，當(dāng)男性年齡≥80歲時(shí)，患有中重度頸動(dòng)脈狹窄者則達(dá)到10.6 %[1]。

頸動(dòng)脈狹窄與低灌注腦血管疾病密切相關(guān)，當(dāng)頸動(dòng)脈狹窄到一定程度以后，會(huì)引起腦血流動(dòng)力學(xué)的改變，即繼發(fā)性的腦缺血表現(xiàn)——大腦低灌注，長(zhǎng)期大腦血流灌注不足會(huì)出現(xiàn)一系列腦損傷的表現(xiàn)[2]。研究表明大腦低灌注損傷血腦屏障同時(shí)會(huì)激活免疫反應(yīng),對(duì)神經(jīng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮功能產(chǎn)生影響。免疫反應(yīng)會(huì)使膠質(zhì)細(xì)胞被激活，而膠質(zhì)細(xì)胞具有雙向作用,既可以產(chǎn)生細(xì)胞毒性分子來?yè)p傷神經(jīng)細(xì)胞亦可分泌神經(jīng)生長(zhǎng)因子保護(hù)神經(jīng)[3]。神經(jīng)血管單元是由腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞以及血腦屏障組成[4]。保證神經(jīng)血管單元結(jié)構(gòu)的完整和健全并且令大腦進(jìn)行正常的功能運(yùn)動(dòng)。調(diào)控神經(jīng)血管單元可以達(dá)到改善大腦的低灌注狀態(tài)。

頸動(dòng)脈狹窄在中醫(yī)無相關(guān)病名，現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)家認(rèn)為動(dòng)脈狹窄是由動(dòng)脈硬化而來可歸為“脈濁”。頸動(dòng)脈狹窄引發(fā)的大腦低灌注狀態(tài)，依據(jù)其臨床表現(xiàn)在中醫(yī)可歸為“中風(fēng)”“眩暈”“失眠”“癡呆”等病。

目前臨床治療該病從生物信息學(xué)角度考慮皆是對(duì)單一神經(jīng)、血管和細(xì)胞等的影響來治療相關(guān)癥狀。補(bǔ)陽還五湯能夠保護(hù)神經(jīng)血管單元的功能及結(jié)構(gòu)的完整性，可以有效降低腦血流低灌注后神經(jīng)元的凋亡，提高腦組織缺血后的功能恢復(fù)[5]。本研究所用頸通康是以補(bǔ)陽還五湯為基礎(chǔ)方，結(jié)合多年臨床治療缺血性腦血管疾病患者的經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方，臨床應(yīng)用多年，在改善頸動(dòng)脈狹窄所致腦組織低灌注方面療效顯著。且于2019年、2020年就頸通康的方劑組成及相關(guān)配制方法成功申報(bào)發(fā)明專利2項(xiàng)。

本研究旨在探討頭腹針療法結(jié)合頸通康干預(yù)頸動(dòng)脈狹窄引發(fā)的大腦低灌注通過對(duì)神經(jīng)血管單元的調(diào)節(jié)達(dá)到再灌注促進(jìn)腦功能的恢復(fù)。希望為臨床針?biāo)幗Y(jié)合治療頸動(dòng)脈狹窄相關(guān)疾病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和治療新思路。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar健康雄性大鼠50只，體質(zhì)量為(180±20)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證編號(hào):SCXK(黑)2019-001]。

1.2 主要儀器和試劑

電熱三用水箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠有限責(zé)任公司);濕盒(Boster Industrial corporation Limited);沖洗瓶(Boster Industrial corporation Limited);原位雜交專用蓋玻片(Boster Industrial corporation Limited);光學(xué)顯微鏡(Olympus German)。

1.3 方劑制備

本實(shí)驗(yàn)所用中藥制劑補(bǔ)陽還五湯及頸通康藥材均購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院哈南分院草藥局并由其代煎。

2 研究方案

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

將50只大鼠隨機(jī)分為頸動(dòng)脈狹窄組45只、假手術(shù)組5只；造模成功后頸動(dòng)脈狹窄組隨機(jī)分為針?biāo)幹委熃M、中藥治療組和模型組各15只。

2.2 模型制備

參照周振華等[6]提出的可控程度頸動(dòng)脈狹窄模型制作方法即“針控線栓法”并對(duì)其加以改進(jìn)。造模前用地塞米松浸泡手術(shù)縫線10 min。術(shù)前8～12 h大鼠禁食，可自由飲水。采用10 %水合氯醛腹腔注射的方式對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，置于鼠架上仰臥固定，頸部正中去毛備皮，常規(guī)消毒后，行頸正中切口2～3 cm，認(rèn)真分離皮膚和肌肉。在頸前肌肉與側(cè)方肌肉之間鈍性分離頸總動(dòng)脈并游離，在頸總動(dòng)脈近心端距頸內(nèi)動(dòng)脈與頸外動(dòng)脈分叉約1.5 cm放置注射用針頭0.9 mm(重度狹窄)，用0號(hào)手術(shù)縫線將頸總動(dòng)脈和注射器針頭扎緊并打成活結(jié)，留置線頭，然后謹(jǐn)慎拔出針頭，血流恢復(fù)后因線圈仍結(jié)扎，即造成一定程度的頸總動(dòng)脈狹窄?？p合皮膚后對(duì)傷口進(jìn)行常規(guī)消毒，肌內(nèi)注射青霉素40萬U進(jìn)行預(yù)防感染。假手術(shù)組只分離頸總動(dòng)脈，不結(jié)扎，余處理同模型組。術(shù)后大鼠即可自由活動(dòng)，置于24～26 ℃環(huán)境下分籠喂養(yǎng)，每籠6～8只，自由飲食、進(jìn)水。對(duì)假手術(shù)組大鼠正常飲食喂養(yǎng)6周，頸動(dòng)脈狹窄組大鼠高脂飲食飼養(yǎng)6周后行水迷宮實(shí)驗(yàn)，神經(jīng)功能及行為學(xué)功能檢測(cè)。

2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物篩選標(biāo)準(zhǔn)

2.3.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①神經(jīng)功能Bederson5評(píng)分≤5分；②行為學(xué)檢測(cè)<9分。

2.3.2 剔除標(biāo)準(zhǔn) 剔除由于麻醉、手術(shù)和飼養(yǎng)等原因死亡或術(shù)后存活時(shí)間未能達(dá)到取材時(shí)間要求的大鼠。

2.4 干預(yù)方法

2.4.1 假手術(shù)組 對(duì)造模成功后假手術(shù)組大鼠常規(guī)喂養(yǎng)6周后，與頸動(dòng)脈狹窄組大鼠同時(shí)進(jìn)行治療，予以生理鹽水混懸液2 mg/(kg·d)灌胃。

2.4.2 模型組 對(duì)造模成功后高脂飲食喂養(yǎng)6周行水迷宮實(shí)驗(yàn)、神經(jīng)行為學(xué)功能檢測(cè)，符合納入標(biāo)準(zhǔn)后給予生理鹽水混懸液2 mg/(kg·d)灌胃。

2.4.3 治療組 對(duì)造模成功后符合納入標(biāo)準(zhǔn)的大鼠隨機(jī)分為中藥治療組和針?biāo)幗Y(jié)合治療組，予以中藥治療和針?biāo)幹委煛?/p>

中藥治療組:頸通康比例為“20∶2∶1.5∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1”，取黃芪40 g，當(dāng)歸尾4 g，赤芍3 g，丹皮、地龍、川芎、琥珀、桃仁、紅花、三七、紅景天、水蛭、甲珠、葛根、天麻、雞血藤、山楂各2 g。100 mg/(kg·d)灌胃。1次/d,共2周。

針?biāo)幹委熃M:針刺結(jié)合頸通康治療。針刺治療頭穴叢刺：依據(jù)“大鼠穴位圖譜”選取頂前區(qū)、頂區(qū)[7]；腹針選穴：依據(jù)孫氏腹針療法[8]選取腹二區(qū)、腹四區(qū)和腹五區(qū)。操作方法：在鼠板上固定頸動(dòng)脈狹窄模型大鼠，選取0.25 mm×15 mm一次性無菌針灸針(蘇州醫(yī)療用品有限公司華佗牌針灸針，蘇械標(biāo)準(zhǔn)20162270970)頭穴叢刺沿皮平刺大約3 mm[7]；腹針以15 °～30 °斜刺入皮下2 mm，每次留針30 min[8]；針刺治療1次/d，治療6 d休息1 d，共治療2周。中藥治療同中藥治療組。

2.5 腦組織取材

對(duì)各組大鼠分別于治療后3 d、7 d及14 d每次選取5只進(jìn)行取材。用EP管保留腦組織標(biāo)本。

2.6 評(píng)價(jià)指標(biāo)

2.6.1 神經(jīng)功能評(píng)分 造模成功后24 h對(duì)存活的大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，采用Bederson等建立的5分評(píng)分法進(jìn)行。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 Bederson5分評(píng)分法

2.6.2 行為學(xué)功能測(cè)驗(yàn) 行為學(xué)功能檢測(cè)由網(wǎng)屏測(cè)驗(yàn)、平衡木測(cè)驗(yàn)及抓握-牽引測(cè)驗(yàn)組成。見表2。

表2 行為學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

將實(shí)驗(yàn)大鼠在3項(xiàng)行為學(xué)測(cè)驗(yàn)的實(shí)際得分加和，測(cè)驗(yàn)分值范圍0～9分。所得結(jié)果為該實(shí)驗(yàn)大鼠的測(cè)驗(yàn)分?jǐn)?shù)。

2.6.3 原位雜交檢測(cè)指標(biāo)NCAMNCAM(神經(jīng)細(xì)胞黏附分子) 主要表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)，是神經(jīng)干細(xì)胞遷移的標(biāo)記物。在神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)元的生長(zhǎng)、重塑和神經(jīng)纖維的形成等過程中起重要作用。神經(jīng)元和神經(jīng)細(xì)胞是神經(jīng)血管單元的重要部分。NCAM分化為相應(yīng)的神經(jīng)細(xì)胞后可修復(fù)大腦低灌注后損傷的腦組織，對(duì)神經(jīng)血管單元起到一定的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)通過觀察NCAM的表達(dá)變化判斷針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)神經(jīng)血管單元的影響。

2.6.4 免疫熒光標(biāo)記及激光共聚焦 觀測(cè)檢測(cè)指標(biāo)GFAP、NeuN及GFAP(膠質(zhì)纖維酸性蛋白)在神經(jīng)血管單元的星形細(xì)胞中有豐富的表達(dá)，是星形細(xì)胞的標(biāo)志蛋白。在腦血流灌注不足出現(xiàn)缺血性損傷時(shí),GFAP可吞噬細(xì)胞外的有害物質(zhì),以維持腦功能的穩(wěn)定，還可以調(diào)控神經(jīng)血管單元的恢復(fù)[9]。當(dāng)頸總動(dòng)脈閉塞時(shí)，GFAP的表達(dá)會(huì)增多。NeuN(神經(jīng)元核抗原)是成熟神經(jīng)元細(xì)胞核的特異標(biāo)記物，當(dāng)神經(jīng)元受損后NeuN的表達(dá)會(huì)顯著降低同時(shí)會(huì)引發(fā)神經(jīng)元的死亡，其表達(dá)水平可直接評(píng)價(jià)神經(jīng)細(xì)胞丟失、死亡以及量化治療效應(yīng)[9]。研究顯示腦缺血時(shí)調(diào)控NeuN的表達(dá)可有效修復(fù)神經(jīng)血管單元[10]。以神經(jīng)血管單元為基礎(chǔ)，應(yīng)用NeuN和GFAP聯(lián)合評(píng)價(jià)，能夠更好地反應(yīng)缺血腦組織的神經(jīng)損傷程度。選擇Dil染料預(yù)先標(biāo)記SVZ細(xì)胞再分別采用GFAP抗體、NeuN抗體行免疫熒光標(biāo)記，又選擇了Brdu標(biāo)記與特有的細(xì)胞表面標(biāo)記相結(jié)合的方法。觀測(cè)時(shí)激發(fā)波長(zhǎng)為543 nm,通過激光共聚焦觀察Dil+/Brdu+/GFAP+、Dil+/Brdu+/NeuN+細(xì)胞計(jì)數(shù)能夠反映各種療法調(diào)控神經(jīng)血管單元的情況。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本實(shí)驗(yàn)研究采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用單因素組間方差分析(ANOVA)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果

3.1 各組神經(jīng)功能評(píng)分比較

在治療前各組大鼠皆出現(xiàn)神經(jīng)功能的異常,模型組、中藥組和針?biāo)幗M3組之間神經(jīng)功能評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。中藥組、針?biāo)幗M的大鼠在治療第7天、第14天后神經(jīng)功能均顯著恢復(fù),模型組大鼠亦出現(xiàn)一定程度的恢復(fù),其原因可能為大鼠的神經(jīng)自愈功能。治療后第7天中藥組與針?biāo)幗M療效優(yōu)于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);針?biāo)幗M療效優(yōu)于中藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。治療第14天中藥組和針?biāo)幗M同模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);針?biāo)幗M同中藥組進(jìn)行比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明中藥法及針?biāo)幗Y(jié)合法治療頸動(dòng)脈狹窄腦血流低灌注模型大鼠第7天及第14天后可有效改善大鼠神經(jīng)功能狀態(tài),但針?biāo)幏▋?yōu)于單純中藥。見表3。

表3 各組神經(jīng)功能比較

3.2 各組行為學(xué)功能測(cè)驗(yàn)

表4顯示，在治療前各組大鼠均表有行為學(xué)功能異常，各組行為學(xué)功能檢測(cè)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。中藥組及針?biāo)幗M大鼠在治療7 d及14 d后行為學(xué)功能均有明顯改善，模型組大鼠行為學(xué)也有改善，分析其原因或?yàn)榇笫缶哂凶晕倚迯?fù)功能。在治療第7天、14天中藥組、針?biāo)幗M同模型組進(jìn)行比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；針?biāo)幗M同中藥組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說明中藥法及針?biāo)幗Y(jié)合法治療頸動(dòng)脈狹窄腦血流低灌注模型大鼠第7天及第14天后可有效改善大鼠行為學(xué)功能，但針?biāo)幏▋?yōu)于單純中藥。見表4。

表4 各組行為學(xué)功能比較

3.3 各組NCAM表達(dá)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NCAM陽性細(xì)胞在每組的各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)皆有表達(dá)，胞漿為棕黃色；在治療過程中隨著時(shí)間及腦血流灌注不足時(shí)間的延長(zhǎng)NCAM的表達(dá)會(huì)逐漸增加，在治療7 d時(shí)達(dá)到高峰，之后NCAM的表達(dá)開始下降。見圖1。由表5可知，療后3 d、7 d和14 d各治療組同模型組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說明各治療方法均有效；針?biāo)幗M同中藥組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明針?biāo)幏▽?duì)調(diào)控神經(jīng)血管單元中NCAM的表達(dá)影響更大。

表5 各組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)NCAM陽性細(xì)胞表達(dá)計(jì)數(shù)

3.4 各組Dil+/Brdu+GFAP蛋白表達(dá)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)GFAP的表達(dá)逐漸增多,在第7天時(shí)達(dá)到高峰,隨后開始下降。見圖2。在治療后第3天及第7天和14天時(shí)中藥組與模型組比較GFAP的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01);在治療后第3天、7天和14天針?biāo)幗M同其他各組進(jìn)行比較GFAP的表達(dá)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。提示針?biāo)幗M調(diào)控神經(jīng)血管單元中GFAP的表達(dá),星形膠質(zhì)細(xì)胞的活性,神經(jīng)血管單元結(jié)構(gòu)及功能的作用優(yōu)于中藥組,模型組顯示最弱。見表6、圖2。

表6 各組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)GFAP陽性細(xì)胞表達(dá)計(jì)數(shù)

3.5 各組Dil+/Brdu+NeuN蛋白表達(dá)結(jié)果

Dil+/Brdu+NeuN細(xì)胞計(jì)數(shù)體現(xiàn)了各治療方法對(duì)神經(jīng)血管單元的調(diào)控作用，對(duì)腦血流低灌注的改善作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Dil+/Brdu+NeuN細(xì)胞計(jì)數(shù)在各治療組各時(shí)間點(diǎn)均有表達(dá)，第7天陽性細(xì)胞表達(dá)到高峰，之后開始回落，胞核著紅色熒光的為Brdu 陽性細(xì)胞,藍(lán)色熒光為Dil陽性細(xì)胞。綠色熒光的為NeuN陽性細(xì)胞，淡橘黃色的為雙標(biāo)Dil+/Brdu+NeuN陽性細(xì)胞。見圖3。依據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)報(bào)告療后3 d中藥組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在7 d、14 d各治療組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。療后3 d、7 d和14 d針?biāo)幗M與中藥組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說明在整個(gè)治療過程中，各治療方法均有效，其中針?biāo)幏▽?duì)陽性細(xì)胞影響最大。見表7。

表7 各組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)NeuN陽性細(xì)胞表達(dá)計(jì)數(shù)

4 討論

長(zhǎng)期頸動(dòng)脈狹窄會(huì)導(dǎo)致大腦慢性血流灌注不足。長(zhǎng)期慢性腦血流灌注不足會(huì)引發(fā)一系列腦損傷的表現(xiàn)如行為學(xué)功能異常、神經(jīng)功能異常[11]。究其原因皆是對(duì)神經(jīng)血管單元產(chǎn)生了影響而出現(xiàn)神經(jīng)功能及行為學(xué)功能異常。慢性血流灌注障礙后及時(shí)有效修復(fù)神經(jīng)血管單元，有利于維持整個(gè)單元穩(wěn)態(tài)，為新生神經(jīng)元提供營(yíng)養(yǎng)支持，促進(jìn)腦功能恢復(fù)[12]。

神經(jīng)血管單元(NeurovascularUnit,NVU)的穩(wěn)定有助于維持腦功能的完整性。神經(jīng)血管單元的提出，為治療神經(jīng)系統(tǒng)、腦血管相關(guān)的疾病提供了一個(gè)新的研究方向及治療思路。神經(jīng)血管單元內(nèi)的各個(gè)組織結(jié)構(gòu)是相互影響的，基于此將各組織結(jié)構(gòu)相聯(lián)合考慮有利于詳細(xì)分析腦組織灌注不足后的發(fā)展變化。神經(jīng)血管單元的結(jié)構(gòu)及功能的完整性對(duì)于改善腦損傷后的恢復(fù)發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。通過調(diào)控神經(jīng)血管單元可有效促進(jìn)神經(jīng)元及血管的新生及修復(fù)[13]。

補(bǔ)陽還五湯對(duì)于神經(jīng)元的生長(zhǎng)和修復(fù)有顯著療效[14]。神經(jīng)血管單元在修復(fù)過程中，對(duì)血管新生起著重要作用。血管新生是指新生長(zhǎng)的血管形成新的側(cè)支循環(huán)，改善受損腦組織的血流供應(yīng)，為受損腦組織提供營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)神經(jīng)元的新生及修復(fù)，推動(dòng)神經(jīng)功能的恢復(fù)。補(bǔ)陽還五湯通過激發(fā)血管內(nèi)皮因子的表達(dá)以促進(jìn)受損血管的恢復(fù)及新生，促進(jìn)腦損傷后的恢復(fù)[15]。同時(shí)對(duì)保護(hù)神經(jīng)血管單元功能完整性、減少腦缺血導(dǎo)致的腦梗死面積和提高腦缺血后神經(jīng)行為學(xué)的恢復(fù)有不可或缺的作用[5]。

本研究中針刺方法選用頭腹針療法。頭腹針療法是以中醫(yī)臟腑經(jīng)絡(luò)理論、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的腦腸軸理論以及神經(jīng)定位理論為基礎(chǔ)總結(jié)而成的針刺療法。其中腦腸軸理論完美的將頭與腹聯(lián)合，周海純等[16]的研究證明頭腹針療法可以促進(jìn)腦損傷后大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化，有效改善腦損傷后大鼠神經(jīng)和行為功能。頭為諸陽之會(huì)，十二正經(jīng)中有胃、心、小腸、膀胱、三焦、肝與膽七條經(jīng)脈皆循經(jīng)頭面，奇經(jīng)八脈中有督脈，陽蹺脈，陽維脈循經(jīng)頭面。人體氣血精微通過十二經(jīng)脈，奇經(jīng)八脈，經(jīng)筋別絡(luò)上注于頭，充養(yǎng)腦髓。腦髓得養(yǎng)，則身體強(qiáng)健。針刺頭部腧穴可以激發(fā)一身之陽氣。人體陽氣充盈則經(jīng)脈暢通，并且頭穴叢刺療法依據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)大腦全息與人體相對(duì)應(yīng)同時(shí)在針刺過程中形成一種“場(chǎng)”，對(duì)腦部疾病進(jìn)行調(diào)控。十二正經(jīng)“內(nèi)屬于臟腑，外絡(luò)于肢節(jié)”和奇經(jīng)八脈、經(jīng)筋別絡(luò)皆與臟腑相關(guān)。手太陰經(jīng)起于中焦，中焦屬脾胃；手陽明經(jīng)下膈屬大腸；足陽明經(jīng)屬胃絡(luò)脾且其有支者起于胃口，下循腹里；足太陰經(jīng)屬脾絡(luò)胃，其有支者走行胃里；手少陰經(jīng)絡(luò)小腸；手太陽經(jīng)有支者過胃，屬小腸；足太陽經(jīng)絡(luò)腎屬膀胱，膀胱位于腹部；足少陰經(jīng)屬腎絡(luò)膀胱；手厥陰經(jīng)，歷絡(luò)三焦；手少陽經(jīng)屬三焦；足少陽經(jīng)與足厥陰經(jīng)循行過胸腹；十二經(jīng)脈循環(huán)無端皆與腹部相連；任、督、沖一源三岐皆起于胞宮，與腹部相連，且3條經(jīng)脈循行皆過腹部。基于此，在腹部針刺可通調(diào)十二經(jīng)絡(luò)氣血和五臟六腑。因此將頭腹針聯(lián)合可達(dá)到從腸調(diào)腦，以腦調(diào)腸形成良性循環(huán)。

同時(shí)有研究證明[17]當(dāng)腸道菌群和腦腸肽發(fā)生改變時(shí)會(huì)激活機(jī)體的免疫反應(yīng)，對(duì)神經(jīng)、血管功能產(chǎn)生影響?；诖丝赏ㄟ^對(duì)腦腸軸的調(diào)節(jié)可實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)神經(jīng)血管單元的目的。

本實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用的中藥制劑是以補(bǔ)陽還五湯為基礎(chǔ)方，經(jīng)臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)而成的頸通康，主要組成為黃芪40 g,當(dāng)歸尾4 g,赤芍3 g,川芎、桃仁、紅花、地龍、三七、紅景天、水蛭、甲珠、丹皮、葛根、天麻、琥珀、雞血藤與山楂各2 g；方中重用黃芪以補(bǔ)氣，氣旺則血行，以促進(jìn)血液運(yùn)行；當(dāng)歸活血通絡(luò)，赤芍、川芎、桃仁、紅花、三七與紅景天可增加腦供血；水蛭、地龍可抗凝；甲珠、丹皮、葛根、天麻、琥珀、雞血藤及山楂合用可通經(jīng)活絡(luò)、化痰祛瘀，改善瘀滯。

此研究結(jié)果顯示，頭腹針療法結(jié)合頸通康治療第7天、14天，神經(jīng)功能評(píng)分、行為學(xué)評(píng)估均優(yōu)于模型組和單純中藥組。由此可推斷頭腹針療法結(jié)合頸通康能夠促進(jìn)頸動(dòng)脈狹窄引發(fā)的腦血流低灌注模型大鼠神經(jīng)功能及行為學(xué)功能的恢復(fù)，可有效改善腦功能。同時(shí)NCAM、GFAP和NeuN的陽性表達(dá)均在7 d達(dá)到高峰，在3 d、7 d和14 d時(shí)針?biāo)幗M與模型組和中藥組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說明頭腹針療法結(jié)合頸通康能夠保護(hù)神經(jīng)血管單元功能完整性，調(diào)節(jié)NCAM、GFAP和NeuN蛋白的表達(dá)。NCAM、GFAP和NeuN均具有雙向調(diào)節(jié)作用，缺血早期神經(jīng)元凋亡，為促進(jìn)神經(jīng)元的修復(fù)及新生，NCAM的表達(dá)和GFAP、NeuN的表達(dá)逐漸升高，隨著缺血時(shí)間的逐漸延長(zhǎng)NCAM、GFAP和NeuN的表達(dá)達(dá)到高峰后開始下降。NCAM、GFAP和NeuN均可以促進(jìn)膠質(zhì)細(xì)胞的活性，修復(fù)神經(jīng)元，促進(jìn)神經(jīng)血管單元的完整性及穩(wěn)定性。

本研究證明頭腹針療法結(jié)合頸通康可有效調(diào)節(jié)頸動(dòng)脈狹窄腦血流低灌注模型大鼠NCAM、GFAP和NeuN的表達(dá)，修復(fù)神經(jīng)血管單元，促進(jìn)神經(jīng)功能及行為學(xué)功能的恢復(fù)。能有效改善頸動(dòng)脈狹窄低灌注狀態(tài)下神經(jīng)血管單元的結(jié)構(gòu)及功能的穩(wěn)定性，從而改善頸動(dòng)脈狹窄低灌注，改善腦功能,為臨床提供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)依據(jù),為腦缺血疾病的治療提供新思路。