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    恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料對(duì)小鼠睡眠的改善作用

    2022-06-23 10:40:48馮旭何穎陳松陳大貴彭偉彪王婷張建
    海軍醫(yī)學(xué)雜志 2022年3期
    關(guān)鍵詞:閾下巴比妥鈉灌胃

    馮旭,何穎,陳松,陳大貴,彭偉彪,王婷,張建

    隨著經(jīng)濟(jì)的迅猛發(fā)展,人們的工作以及生活節(jié)奏加快, 越來(lái)越多的人出現(xiàn)了失眠的癥狀,關(guān)于失眠的流行病學(xué)調(diào)查顯示,有15%~35% 的成年人存在入睡困難、睡眠時(shí)長(zhǎng)短等問(wèn)題[1]。海軍官兵的睡眠問(wèn)題更為嚴(yán)重,調(diào)查表明,艦艇航行1 個(gè)月后,潛艇官兵的匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)總分(Pittsburgh sleep quality index,PSQI)、睡眠效率、睡眠質(zhì)量和入睡時(shí)間分值均顯著升高[2]。長(zhǎng)期的睡眠障礙,可以引起一系列機(jī)體功能的損害,導(dǎo)致作業(yè)功效下降。所以開(kāi)發(fā)改善睡眠的藥物或功能食品,對(duì)提升潛艇官兵作業(yè)功效具有重要意義。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR(institute of cancer research)小鼠180 只(雄性,4~6 周,卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司),體重范圍:17~21 g,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):scxk(蘇)2016?0010。

    1.1.2 藥品與試劑 恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料(5 g/袋,主要成分為酸棗仁粉、蘆筍粉、γ-氨基丁酸、茶葉茶氨酸、紅棗粉、低聚異麥芽糖等)、棗仁安神膠囊(貴州同濟(jì)堂制藥有限公司,0.45 g×20 粒)、戊巴比妥鈉和巴比妥鈉。戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均為分析純。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 動(dòng)物分組 動(dòng)物適應(yīng)飼養(yǎng)7 d,稱重,將180 只小鼠隨機(jī)分為3 個(gè)實(shí)驗(yàn)組,每個(gè)實(shí)驗(yàn)組60 只分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)1.2.4、1.2.5、1.2.6。以成人每日劑量5 g 恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料折合成動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的中劑量組,分別將每個(gè)實(shí)驗(yàn)組中的小鼠隨機(jī)分為低、中、高劑量組(0.5、1.0、2.0 g/kg,0.2 ml/10 g 體積的恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料灌胃)、陽(yáng)性藥組(0.45 g/kg,棗仁安神膠囊配制成2.25 g/100 ml 的混懸液,0.2 ml/10 g 體積灌胃)和空白對(duì)照組(相同體積蒸餾水灌胃),每組12 只,所有小鼠每天灌胃1 次,共30 d。各組小鼠體重、周齡等經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。參照《保健食品檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》進(jìn)行改善睡眠功效評(píng)價(jià)[3]。

    1.2.2 藥物對(duì)小鼠體重的影響 選擇一個(gè)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物60 只,給藥前及給藥后每10 d 稱量各小鼠體重,觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響。

    1.2.3 藥物對(duì)小鼠直接催眠作用 計(jì)算小鼠灌胃后30 min內(nèi),出現(xiàn)睡眠的小鼠數(shù)量。觀察各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠有無(wú)直接催眠的作用(直接催眠判定標(biāo)準(zhǔn):小鼠處于背臥位時(shí),在60 s內(nèi)未翻正)[3]。

    1.2.4 延長(zhǎng)小鼠因戊巴比妥鈉作用睡眠時(shí)長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)[3]使用合適劑量戊巴比妥鈉催眠后,給予預(yù)定劑量的實(shí)驗(yàn)藥物,觀察其是否具有延長(zhǎng)睡眠時(shí)長(zhǎng)的效果。睡眠時(shí)長(zhǎng)增加,則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉引發(fā)的睡眠具有協(xié)同作用。預(yù)實(shí)驗(yàn)確定40 mg/kg 的戊巴比妥鈉能使動(dòng)物全部入睡,且睡眠時(shí)間≤60 min。連續(xù)灌胃30 d,在最后一次給藥30 min 后,各組小鼠通過(guò)腹腔注射給予預(yù)定劑量戊巴比妥鈉(40 mg/kg,0.2 ml/10 g),翻正反射消失且維持60 s 以上作為小鼠入睡標(biāo)準(zhǔn),觀察各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉引起的睡眠時(shí)長(zhǎng)影響。

    1.2.5 小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)[3]觀察實(shí)驗(yàn)藥物是否與戊巴比妥鈉具有協(xié)同作用。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定能使80%~90%小鼠不入睡的戊巴比妥鈉閾下劑量為25 mg/kg。連續(xù)灌胃30 d,最后一次給藥30 min 后,各組小鼠通過(guò)腹腔注射給予預(yù)定劑量戊巴比妥鈉(25 g/kg,0.2 ml/10 g)[3],翻正反射消失作為小鼠入睡指標(biāo),觀察各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量引起的小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)影響。

    1.2.6 小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)[3]使用合適劑量的巴比妥鈉催眠小鼠,觀察實(shí)驗(yàn)藥物是否能夠縮短小鼠的入睡潛伏期(自給藥至翻正反射消失)。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定280 mg/kg的巴比妥鈉能使動(dòng)物全部入睡,而睡眠時(shí)間≤60 min。連續(xù)灌胃30 d,在最后一次給藥30 min 后,各組小鼠通過(guò)腹腔注射給予預(yù)定劑量巴比妥鈉(280 g/kg,0.2 ml/10 g),翻正反射消失作為小鼠入睡指標(biāo),觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    使用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和多重比較,計(jì)量資料采用±s表示。計(jì)數(shù)資料用百分比(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響

    各實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重?zé)o明顯影響(P>0.05),且各組動(dòng)物狀態(tài)良好。見(jiàn)表1。

    表1 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響(g,± s,每組n=12)

    表1 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠體重的影響(g,± s,每組n=12)

    注:與空白對(duì)照組比較P 均>0.05

    組別低劑量組中劑量組高劑量組陽(yáng)性藥組空白對(duì)照組給藥30 d 36.3±1.0 36.0±1.5 35.2±1.6 36.6±1.1 36.3±1.3給藥前19.2±1.2 19.2±0.8 19.7±1.5 19.8±0.9 19.6±0.9給藥10 d 31.2±1.7 30.9±1.5 30.7±1.9 31.8±1.3 30.1±1.6給藥20 d 34.1±1.7 33.5±1.7 34.0±1.5 33.7±1.1 33.1±1.3

    2.2 直接睡眠作用

    各組動(dòng)物灌胃給藥30 min 后,所有小鼠均未入睡,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠并無(wú)直接催眠作用,符合《保健食品檢驗(yàn)和評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》中改善睡眠保健食品的要求,可進(jìn)行后面3 項(xiàng)實(shí)驗(yàn)[3]。

    2.3 延長(zhǎng)小鼠因戊巴比妥鈉作用睡眠時(shí)長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)

    不間斷給藥30 d 后,中劑量(1 g/kg)、高劑量(2 g/kg)組和陽(yáng)性藥物組的動(dòng)物睡眠時(shí)長(zhǎng)比空白對(duì)照組顯著增加(P<0.05),表明足量的實(shí)驗(yàn)藥物能夠延長(zhǎng)因戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時(shí)長(zhǎng)。見(jiàn)表2。

    表2 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)長(zhǎng)的影響(s,± s)

    表2 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)長(zhǎng)的影響(s,± s)

    注:與空白對(duì)照組比較aP<0.05,bP<0.01

    組別低劑量組中劑量組高劑量組陽(yáng)性藥組空白對(duì)照組睡眠時(shí)間1 815.2±291.0 2 249.8±352.3b 2 049.5±105.2a 2 270.4±484.6b 1 522.1±637.7小鼠數(shù)12 12 12 12 12戊巴比妥鈉(mg/kg)40 40 40 40 40

    2.4 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

    實(shí)驗(yàn)藥物各劑量對(duì)小鼠入睡率的影響比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

    表3 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響[只(%)]

    2.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

    中劑量(1 g/kg)和高劑量(2 g/kg)的實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)小鼠睡眠潛伏期有明顯縮短作用(P<0.05),陽(yáng)性藥物組對(duì)小鼠睡眠潛伏期也有著相同的效果(P<0.01),結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)藥物能夠縮短巴比妥鈉催眠下的小鼠睡眠潛伏期。見(jiàn)表4。

    表4 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響(s,± s)

    表4 實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響(s,± s)

    注:與空白對(duì)照組比較aP<0.05,bP<0.01

    組別低劑量組中劑量組高劑量組陽(yáng)性藥組空白對(duì)照組睡眠時(shí)間748.5±253.2 696.7±216.1a 739.8±130.5a 645.9±220.3b 873.6±167.6小鼠數(shù)12 12 12 12 12巴比妥鈉(g/kg)280 280 280 280 280

    4 討論

    恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料含有酸棗仁粉、蘆筍粉、γ-氨基丁酸和茶葉茶氨酸等成分,酸棗仁是我國(guó)傳統(tǒng)中藥,是具有明顯改善睡眠作用的藥食兩用藥物,酸棗仁中的黃酮類(lèi)中成分對(duì)小鼠具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用,多糖成分則明顯降低了小鼠的自主活動(dòng)性[4?5]。蘆筍粉對(duì)存在睡眠障礙的人群有良好的改善作用,不僅增加有效睡眠時(shí)長(zhǎng),還可以縮短驚醒后的再入睡時(shí)長(zhǎng),其可能的機(jī)制是調(diào)節(jié)HPA 軸或5-羥色胺分泌相關(guān)[6?7]。γ-氨基丁酸和茶氨酸為新資源食品,γ-氨基丁酸是一種存在于人體和自然界的非蛋白質(zhì)氨基酸,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有著抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的作用,在睡眠覺(jué)醒中也起著重要作用[8]。焦躁、不安、疲勞、憂郁、失眠等不適癥狀會(huì)伴隨著γ-氨基丁酸的缺失出現(xiàn)于人體[9?10],研究表明,γ-氨基丁酸可以延長(zhǎng)睡眠時(shí)間、增加閾下劑量入睡動(dòng)物數(shù)量[11]。茶氨酸是茶葉中的一種游離氨基酸,具有鎮(zhèn)靜安神、抗疲勞、提高記憶力等功效,也具有顯著改善睡眠的功效[12]。以上多種成分,改善睡眠的機(jī)制不盡相同,通過(guò)合理復(fù)配,可以更好地達(dá)到改善睡眠的功效。

    研究表明恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料灌胃給予30 d,對(duì)小鼠體重?zé)o影響。恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料低、中、高劑量均無(wú)直接促進(jìn)小鼠睡眠的作用。在延長(zhǎng)因戊巴比妥鈉引起的睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)中,中劑量和高劑量組的實(shí)驗(yàn)藥物可以顯著增加小鼠的睡眠時(shí)長(zhǎng),表明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)戊巴比妥鈉閾下劑量催眠具有協(xié)同作用。在巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)中,中劑量和高劑量的實(shí)驗(yàn)藥物顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》的要求[3],上述3 項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中,延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)和巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性,可判定恬夢(mèng)復(fù)合植物固體飲料具有改善睡眠功能的作用。

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