妊娠期高血壓患者 HLA-Ⅰ、miR-95-5p表達(dá)及與母嬰不良結(jié)局相關(guān)性

劉麗麗 劉 靜

河北省唐山市婦幼保健院(063000)

妊娠期高血壓未及時(shí)治療會(huì)進(jìn)展為子癇前期，嚴(yán)重者可出現(xiàn)子癇，累及胎盤、胎兒，可導(dǎo)致產(chǎn)后出血、早產(chǎn)等多種不良結(jié)局[1]。目前對(duì)妊娠期高血壓發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，但部分研究認(rèn)為[2]，此病的發(fā)生與多種細(xì)胞因子異常表達(dá)相關(guān)。白細(xì)胞抗原Ⅰ類分子(HLA-Ⅰ)屬一種受組織相容性復(fù)合體所調(diào)控的位于細(xì)胞表面的具有識(shí)別抗原、傳遞活性的一組免疫球蛋白，與妊娠期高血壓發(fā)生相關(guān)[3]。miRNA參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過程，其中部分miRNA參與妊娠期高血壓的發(fā)生[4]?；谏鲜鲅芯勘尘?，本研究分析HLA-Ⅰ、微小RNA-95-5p(miR-95-5p)在妊娠期高血壓患者中的表達(dá)及與母嬰結(jié)局的相關(guān)性，為臨床診治提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2019年1月-2020年1月本院收治的妊娠期高血壓患者95例作為高血壓組，健康體檢的正常妊娠產(chǎn)婦80例作為健康組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[5]診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常妊娠產(chǎn)婦無妊娠合并癥，身體健康。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并糖尿?。惶ツぴ缙?、存在感染征象；心肺等重要臟器障礙；存在原發(fā)性肝腎合并癥；精神障礙、溝通障礙。研究對(duì)象均知情同意。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法

1.2.1 HLA-Ⅰ類分子HLA-Ⅰ類分子包括可溶性白細(xì)胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)、HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白。采集研究對(duì)象晨空腹靜脈血，酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清sHLA-Ⅰ水平，HLA-E、HLA-F、HLA-G蛋白水平采用Western Blot法檢測。

1.2.2 miR-95-5p采集所有研究對(duì)象晨空腹靜脈血分離單個(gè)核細(xì)胞，采用熒光定量PCR法(RT-PCR)檢測血miR-95-5p表達(dá)量。反應(yīng)體系：8μl cDNA模板、10μl SYBRP Green mix、2μl PCR Primer mix。反應(yīng)條件：95℃ 10min；95℃ 10s；60℃ 1min；40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△Ct方法計(jì)算血miR-95-5p表達(dá)量。miR-95-5p引物序列：上游：5’-ACACTCCAGCTGGGTCAATAAATGTC-3’，下游：5’-TGGTGTCGTGGAGTCG-3’；內(nèi)參β-actin引物序列：上游：5’-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3’，下游：5’-GAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGT-3’。

1.3 母嬰結(jié)局

統(tǒng)計(jì)不良母嬰結(jié)局，包括胎盤早剝、子宮切除、產(chǎn)后出血、早產(chǎn)，圍產(chǎn)兒結(jié)局包括新生兒窒息、胎兒窘迫、胎兒生長受限、新生兒死亡。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 基本情況

高血壓組年齡(29.9±4.6)歲(25～38歲)，孕周(28.0±5.7)周(22～37周)；健康組年齡(28.5±5.2)歲(23～37歲)，孕周(28.3±5.4)周(22.5～37周)。兩組比較無差異(P>0.05)。

2.2 HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平

如表1所示，與健康組相比，高血壓組sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G表達(dá)降低，miR-95-5p表達(dá)升高(P<0.05)。

表1 兩組HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平比較

2.3 HLA-Ⅰ、miR-95-5p與妊娠期高血壓患者臨床特征

如表2所示，HLA-Ⅰ、miR-95-5p表達(dá)與妊娠期高血壓患者年齡、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、孕產(chǎn)次無關(guān)(P>0.05)，與患者有無高血壓家族史、妊娠高血壓史相關(guān)(P<0.05)。

表2 妊娠期高血壓患者臨床特征與HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平

2.4 不良母嬰結(jié)局比較

如表3所示，高血壓組不良母嬰結(jié)局發(fā)生率高于健康組(P<0.05)。

2.5 妊娠期高血壓患者HLA-Ⅰ、miR-95-5p與母嬰結(jié)局

如表4所示，妊娠期高血壓患者不良母嬰結(jié)局與正常母嬰結(jié)局相比，孕婦的HLA-Ⅰ分子sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G表達(dá)降低，miR-95-5p表達(dá)升高(P<0.05)。

表4 妊娠期高血壓患者HLA-Ⅰ、miR-95-5p水平與母嬰結(jié)局

2.6 各指標(biāo)間相關(guān)性分析

sHLA-Ⅰ、HLA-E、HLA-F、HLA-G與miR-95-5p均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.369,P=0.001)(r=-0.267,P=0.009)(r=-0.317,P=0.002)(r=-0.829,P=0.001)。

3 討論

目前臨床對(duì)妊娠期高血壓發(fā)病機(jī)制尚不明確，缺乏有效治療藥物。雖然已有研究顯示[6-7]，妊娠期高血壓的發(fā)生與免疫、血管內(nèi)皮功能等障礙相關(guān)，但并未深入探究具體細(xì)胞因子的表達(dá)情況，目前對(duì)妊娠期高血壓的診治和母嬰結(jié)局預(yù)后的研究仍是普遍關(guān)注熱點(diǎn)。本研究探究與妊娠期高血壓患者母嬰結(jié)局相關(guān)的細(xì)胞因子(HLA-Ⅰ、miR-95-5p)，為臨床診斷、治療及母嬰預(yù)后研究提供參考。

妊娠期母胎界面存在顯著的免疫反應(yīng)。研究顯示[8-9]，當(dāng)母胎界面免疫耐受被其他因素打破后可導(dǎo)致免疫排斥反應(yīng)發(fā)生，進(jìn)而引發(fā)多種妊娠期疾病，如妊娠期高血壓等。研究顯示[10]，滋養(yǎng)層細(xì)胞所表達(dá)的主要組織相容性復(fù)合體與母胎免疫耐受相關(guān)。HLA-Ⅰ包括多種分子亞型，其中HLA-A、HLA-B屬經(jīng)典的HLA-Ⅰ，與惡性腫瘤病理變化相關(guān)，HLA-E、HLA-F、HLA-G等屬非經(jīng)典HLA-Ⅰ，主要在蛻膜的人絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞中表達(dá)[11-12]。研究發(fā)現(xiàn)[13]，母胎界面滋養(yǎng)細(xì)胞上特異性表達(dá)的HLA-Ⅰ屬免疫耐受分子，sHLA-Ⅰ屬HLA-Ⅰ可溶性形式，已證實(shí)sHLA-Ⅰ、HLA-G在病理性妊娠的發(fā)生進(jìn)展中有重要調(diào)控作用，而對(duì)于HLA-E、HLA-F是否參與病理性妊娠報(bào)道較少。研究發(fā)現(xiàn)[14]，HLA-E主要在人絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞表面和細(xì)胞漿中表達(dá)，在妊娠中晚期合成分泌，隨著含量升高使血液循環(huán)中含量增加。HLA-F表達(dá)于整個(gè)孕期，與胎兒的免疫排斥作用相關(guān)，可抑制免疫排斥作用[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，HLA-Ⅰ在妊娠期高血壓中低表達(dá)且與母嬰結(jié)局相關(guān)，提示HLA-Ⅰ可能經(jīng)不同途徑參與妊娠期高血壓的病理妊娠過程，最終改變?nèi)焉锝Y(jié)局，導(dǎo)致不良母嬰結(jié)局發(fā)生。

目前臨床上對(duì)妊娠期高血壓發(fā)病所涉及的分子機(jī)制尚不明確，但已有研究顯示[16-17]，妊娠期高血壓發(fā)病過程中有miRNA參與，可經(jīng)對(duì)多種基因、蛋白的表達(dá)產(chǎn)生調(diào)控作用參與細(xì)胞生物學(xué)行為，而組織細(xì)胞生物學(xué)過程與維持妊娠過程中胎盤穩(wěn)態(tài)具有重要作用。近年已有多數(shù)研究表明[18-19]，miRNA參與多種生理、病理過程，包括細(xì)胞增殖分化、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、心血管疾病等，且在高血壓的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義。研究顯示[20]，妊娠期高血壓的發(fā)生與代謝酶、受體基因的單核苷酸多態(tài)性、DNA甲基化相關(guān)，miR-155、miR-143、miR-124等可經(jīng)作用于血管緊張素受體、改變血管內(nèi)皮功能、降低免疫耐受等途徑參與妊娠期高血壓的發(fā)生進(jìn)展過程。miR-95-5p屬miRNA家族成員之一，目前臨床上對(duì)于miR-95-5p參與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生進(jìn)展研究較少，劉侃等[21]研究認(rèn)為妊娠期高血壓可能與miR-95-5p的表達(dá)相關(guān)?；诖吮尘埃狙芯拷Y(jié)果顯示，miR-95-5p在妊娠期高血壓高表達(dá)且與不良母嬰結(jié)局相關(guān)，說明miR-95-5p參與了妊娠期高血壓進(jìn)展，是影響不良母嬰結(jié)局發(fā)生的可能因素之一。雖然本文研究證實(shí)miR-95-5p與妊娠期高血壓患者母嬰結(jié)局相關(guān)，但未深入研究其作用機(jī)制，還需進(jìn)一步研究以證實(shí)二者關(guān)系，并明確其作用機(jī)制，以早期預(yù)測妊娠期高血壓母嬰結(jié)局，改善母嬰預(yù)后。

另外本研究發(fā)現(xiàn)，HLA-Ⅰ類分子與miR-95-5p呈負(fù)性相關(guān)，提示其可能共同參與此病的發(fā)生進(jìn)展。分析其作用機(jī)制可能與在疾病發(fā)生后miR-95-5p介導(dǎo)機(jī)體免疫，降低免疫耐受性，此過程中HLA-Ⅰ類分子表達(dá)降低，兩者相互介導(dǎo)促進(jìn)了疾病發(fā)展。但本文未分析兩者作用機(jī)制，且本次納入樣本量較少，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時(shí)可能存在一定偏倚，因此本文上述結(jié)果還需后續(xù)研究進(jìn)一步驗(yàn)證，以明確兩者在此病中的作用，為臨床研究提供參考。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓患者血清HLA-Ⅰ類分子低表達(dá)、miR-95-5p高表達(dá)，且與患者母嬰結(jié)局相關(guān)，提示臨床可根據(jù)其水平變化預(yù)測妊娠期高血壓患者母嬰結(jié)局，及早干預(yù)預(yù)防。