廣西不同產(chǎn)地金櫻根及炮制品中沒(méi)食子酸和兒茶素的含量差異分析

韋熹苑　 鄧琦　盧小玲　舒柯　卓燊　范家文　潘思杏

摘要：為了建立金櫻根中沒(méi)食子酸和兒茶素含量的測(cè)定方法，分析廣西不同產(chǎn)地金櫻根及炮制品中沒(méi)食子酸和兒茶素含量的變化，該文以沒(méi)食子酸和兒茶素的含量作為指標(biāo)成分，采用HPLC法對(duì)廣西產(chǎn)金櫻根生品、炒炙品、酒炙品、鹽炙品及醋炙品進(jìn)行測(cè)定，并采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行方差分析和聚類分析。結(jié)果表明：廣西不同產(chǎn)地金櫻根及炮制品中沒(méi)食子酸和兒茶素含量均存在差異，所有樣品中兒茶素的含量均比沒(méi)食子酸高，南部地區(qū)（除貴港桂平外）的沒(méi)食子酸和兒茶素含量整體上比北部地區(qū)高，在炮制品中醋炙后沒(méi)食子酸和兒茶素含量最高。該研究表明HPLC測(cè)定方法簡(jiǎn)單可行，金櫻根中沒(méi)食子酸和兒茶素含量的變化差異主要表現(xiàn)為產(chǎn)地地域及炮制方法的不同，可為今后金櫻根資源的合理利用、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定以及臨床用藥的研究提供一定科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜， 金櫻根， 炮制品， 沒(méi)食子酸， 兒茶素， 方差分析， 聚類分析

中圖分類號(hào)：Q946

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：10003142（2022）05083312

Difference analysis on contents of gallic acid and catechin in roots of Rosa laevigata and its processed products from different habitats of Guangxi

Abstract：To establish the method for determination of gallic acid and catechin in the roots of Rosa laevigata， and to analyze the difference in the contents of gallic acid and catechin in roots of R. laevigata from different habitats and different processed methods resources from Guangxi. The contents of gallic acid and catechin of R. laevigata were used as evaluation index， the samples were determined by HPLC， and the data were analyzed by the analysis of variance （ANOVA） and discrimination study carried out based on the hierarchical clustering analysis （HCA） with SPSS 23.0 software. The results were as follows：The contents of gallic acid and catechin in roots of R. laevigata from different habitats and processed methods were different， the content of catechin was higer than that of gallic acid among all samples， the contents of gallic acid and catechin in roots of R. laevigata from the southern habitats （except for Guiping， Guigang） were generally higher than those from northern habitats， the contents of gallic acid and catechin were the highest in vinegarprocessed products. The conclusion display that the differences ofgallic acid and catechin contents in the roots of R. laevigata are mainly the differences of producting habitats and processed methods， the HPLC method is simple and feasible， which can provide a scientific basis for the resources development， quality control and clinical application of R. laevigata.

Key words： high performance liquid chromatography （HPLC）， roots of Rosa laevigata， processed product， gallic acid， catechin， analysis of variance （ANOVA）， hierarchical clustering analysis （HCA）

金櫻根（壯文Makgoij）又名金櫻、脫骨丹，為薔薇科植物金櫻子

（Rosa laevigata）的根。主要分布于我國(guó)華中、華南、華東及西南等地（鐘鳴等，2013）。金櫻根作為廣西道地藥材，在民間已被廣泛用作藥食兩用的保健性食材，是廣西的大宗特產(chǎn)藥物，在廣西中藥的發(fā)展中起著重要的支撐作用。金櫻根性味酸澀平，具有清熱解毒、涼血活血、祛瘀止痛、固精澀腸等作用，現(xiàn)代藥理研究表明金櫻根在抗炎、抑菌、抗腫瘤、提高機(jī)體免疫功能、抗氧化及抗心率失常等方面具有很好的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值（龍小琴和戴應(yīng)和，2017），其所含化學(xué)成分沒(méi)食子酸具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤及保護(hù)心血管系統(tǒng)等多種活性（鄭雪花等，2017），兒茶素具有抗腫瘤、抗氧化、抗病菌以及保護(hù)心腦器官等多種作用（陸昌琪等，2018），由此可見(jiàn)，沒(méi)食子酸和兒茶素作為金櫻根的關(guān)鍵藥效組分在臨床藥理中起主導(dǎo)作用。

金櫻根作為廣西特色中成藥金雞片、三金片等的君藥，但對(duì)于金櫻根的物質(zhì)基礎(chǔ)研究鮮有報(bào)道，且不同產(chǎn)地及不同炮制方法對(duì)其有效成分含量影響尚不明確。雖有學(xué)者對(duì)金櫻根不同炮制品總鞣質(zhì)和總黃酮類成分進(jìn)行研究，但采用的是紫外分光光度法分析，且研究指標(biāo)及樣本量較少（黃慧等，2011;單于超等，2011），易運(yùn)紅等（2010）比較了金櫻子根及莖的總黃酮含量，徐艷春等（2002）對(duì)全國(guó)22個(gè)產(chǎn)地金櫻子中三萜酸類成分的含量進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地三萜類有機(jī)酸的含量有明顯的差別。尚未見(jiàn)金櫻根較完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，缺乏對(duì)其進(jìn)行過(guò)程質(zhì)量控制和藥效組分關(guān)系的系統(tǒng)研究。本研究以金櫻根的關(guān)鍵藥效組分沒(méi)食子酸和兒茶素為指標(biāo)，采用HPLC法對(duì)廣西不同產(chǎn)地金櫻根及炮制品進(jìn)行分析，建立HPLC測(cè)定兩種活性成分的分析方法，同時(shí)采用方差分析及聚類分析對(duì)指標(biāo)成分的變化進(jìn)行對(duì)比研究和差異分析，旨在為金櫻根廣泛深入研究和開(kāi)發(fā)利用提供參考，為金櫻根質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定以及臨床用藥的研究提供一定科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1 材料和儀器

儀器：Ultimate 3000 高效液相色譜儀（美國(guó)賽默飛公司），KQ500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），HH4型電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永光儀器有限公司），METTLER TOLEDO MS204TS電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密儀器公司），電磁爐（美的公司）。

試劑：甲醇（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司），磷酸（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司），鹽酸（優(yōu)級(jí)純，昆山金城試劑有限公司），水（UPW50N型超凈水器制備純化水），水（UPW50N型超凈水器制備超純水），甲醇（色譜純，美國(guó)天地試劑公司），沒(méi)食子酸（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：110831201605），兒茶素（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：110877201203）。

金櫻根采自廣西9個(gè)產(chǎn)地，經(jīng)貴州省食品藥品檢驗(yàn)所副主任藥師舒柯鑒定為薔薇科（Rosaceae）植物金櫻子（Rosa laevigata）的根，金櫻根及不同炮制品（實(shí)驗(yàn)室自制）共45個(gè)見(jiàn)表1。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品2.40 mg，加甲醇溶液定容至100 mL，搖勻，即得0.024 mg·mL1的沒(méi)食子酸對(duì)照品儲(chǔ)備液;精密稱取兒茶素對(duì)照品5.81 mg，加50%乙醇定容至20 mL，即得0.290 mg·mL1的兒茶素對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.2.2 不同炮制品的制備參照2020版《中國(guó)藥典》四部項(xiàng)下炮制通則中各炮制品的制備方法，將9批不同產(chǎn)地的金櫻根分別稱取各1 000 g，每批產(chǎn)地分5份，每份200 g，分別為生品、炒黃、酒炙、鹽炙和醋炙。

生品：將9批不同產(chǎn)地金櫻根藥材凈選切制后，40 ℃低溫烘干，備用。炒黃品：取上述9批凈制后的藥材適量（每批200 g），置燒熱炒鍋內(nèi)，用文火翻炒至表面顏色加深時(shí)，取出，放涼。酒炙品：取上述9批凈制后的藥材適量（每批200 g），加入定量的黃酒（ 藥∶黃酒=100∶20 ） 攪拌均勻，悶透，置燒熱炒鍋內(nèi)，用文火炒至表面顏色加深時(shí)，取出，放涼。鹽炙品：取上述9批凈制后的藥材適量（每批200 g），加入定量的鹽水（藥∶食鹽=100∶20 ） 攪拌均勻，悶透，置燒熱炒鍋內(nèi)，用文火炒至表面顏色加深時(shí)，取出，放涼。醋炙品：取上述9批凈制后的藥材適量（每批200 g），加入定量的米醋（藥∶米醋 = 100∶20 ） 攪拌均勻，悶透，置燒熱炒鍋內(nèi)，用文火炒至表面顏色加深時(shí)，取出，放涼。

1.2.3 樣品溶液的制備

1.2.3.1 取1.2.2項(xiàng)下的各樣品低溫干燥后，粉碎，過(guò)三號(hào)篩，取各樣品粉末0.1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入4 mol·L1 HCl 50 mL，稱定重量，加熱回流4 h，取下，放冷，用4 mol·L1 HCl 補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液10 mL置于蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)眉状既芙廪D(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，備用于測(cè)定沒(méi)食子酸含量。

1.2.3.2 取1.2.2項(xiàng)下的各樣品低溫干燥后，粉碎，過(guò)三號(hào)篩，取本品約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（50∶1）50 mL，密塞，稱定重量，分別超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz ） 45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，備用于測(cè)定兒茶素含量。

1.2.4 HPLC色譜條件測(cè)定沒(méi)食子酸色譜條件：色譜柱為 thermosC18 （250 mm × 4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相為A（甲醇）-B（0.1 % 磷酸）（5∶95）;檢測(cè)波長(zhǎng)為271 nm;柱溫為30 ℃;流速為0.6 mL·min1;進(jìn)樣量為5 μL。測(cè)定兒茶素色譜條件：色譜柱為watersC18 （250 mm × 4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相為A甲醇B 0.2%磷酸（10∶90）;檢測(cè)波長(zhǎng)為279 nm;柱溫為 30 ℃;流速為1 mL·min 1;進(jìn)樣量為10 μL。

2結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 線性關(guān)系、檢出限及定量限分別精密吸取“1.2.1 ”項(xiàng)下的沒(méi)食子酸和兒茶素對(duì)照品儲(chǔ)備液1、3、5、10、15 μL，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得各成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍、檢出限及定量限，結(jié)果見(jiàn)表 2。

2.1.2 精密度試驗(yàn)分別取“1.2.1 ”項(xiàng)下各對(duì)照品溶液適量，按“1.2.4 ”項(xiàng)下各對(duì)照品的色譜條件各連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，沒(méi)食子酸和兒茶素的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）分別為0.91%和0.40%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.1.3 重復(fù)性試驗(yàn)分別取“1.2.2” 項(xiàng)下S1號(hào)樣品各6份，以每6份為一組，各組中每份分別按0.1和0.5 g精密稱定，再按“1.2.3”項(xiàng)下“1.2.3.1”和“1.2.3.2”的方法制備樣品溶液，分別按“1.2.4”項(xiàng)下各色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算含量，各6份樣品的沒(méi)食子酸和兒茶素含量測(cè)定平均值分別為4.902和19.318 mg·mL1，RSD分別為0.80%和1.50%，結(jié)果說(shuō)明兩種測(cè)定方法重復(fù)性均良好。

2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)分別取“1.2.3”項(xiàng)下S1號(hào)樣品溶液適量，在室溫下放置，并分別于0、2、4、8、12、24 h按“1.2.4”項(xiàng)下各自色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果沒(méi)食子酸和兒茶素峰面積的RSD分別為1.95%和0.96%（n=6），表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性均良好。

2.1.5 加樣回收試驗(yàn)分別取已知含量的S1號(hào)樣品適量，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液（0.226 6 mg·mL1）1 mL和兒茶素對(duì)照品溶液（1.946 2 mg·mL1）1 mL，揮干，按“1.2.3”項(xiàng)下兩種樣品溶液的方法制備，按“1.2.4”項(xiàng)下的各自色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，沒(méi)食子酸和兒茶素的測(cè)定方法均具有良好的加樣回收率。具體結(jié)果見(jiàn)表3。

2.2 含量測(cè)定結(jié)果

取 “1.2.2 ”項(xiàng)下樣品，按“1.2.3”項(xiàng)下的兩方法進(jìn)行樣品溶液的制備，并在“1.2.4 ”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1，記錄峰面積，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，兒茶素含量明顯高于沒(méi)食子酸含量，在同一樣品中兒茶素含量是沒(méi)食子酸的二至九倍，此結(jié)果可作為廣西金櫻根藥材的一項(xiàng)重要特征。

2.3 不同產(chǎn)地金櫻根聚類分析

用以上9個(gè)不同產(chǎn)地金櫻根生品中兒茶素和沒(méi)食子酸的含量作為變量，采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行聚類統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見(jiàn)圖2。 當(dāng)5<λ≤10時(shí)，S1、S6、S11、S16、S21及S26聚為第一類，S36和S41聚為第二類，S31聚為第三類。當(dāng)10 <λ< 25時(shí)，所有樣品被分為兩類：S1、S6、S11、S16、S21、S26、S36及S41聚為一類;S31單獨(dú)為一類。從聚類分析結(jié)果可知，不同產(chǎn)地的金櫻根兒茶素和沒(méi)食子酸含量具有較明顯的地理分布傾向，大致來(lái)源于廣西北部地區(qū)的宜州、柳州、桂林及賀州聚為一類（S1、S6、S11、S16、S21及S26），來(lái)源于廣西南部地區(qū)的貴港平南和欽州平吉聚為一類（S36和S41），來(lái)源于廣西南部地區(qū)貴港桂平單獨(dú)聚為一類（S31）。廣西南部地區(qū)的成分與北部地區(qū)存在一定的差別，且南部地區(qū)的貴港桂平與其他產(chǎn)區(qū)的成分差異較大，可能是由于生長(zhǎng)環(huán)境或藥材品種等多方因素影響所致。

聚類分析可將所有樣品大致分為三類，聚類后不同類群的沒(méi)食子酸和兒茶素平均含量比較見(jiàn)表5， 各類群的沒(méi)食子酸和兒茶素含量均存在顯著性差異（P<0.05）。廣西南部地區(qū)（除貴港桂平外）的沒(méi)食子酸和兒茶素含量整體上比北部地區(qū)高，第三類貴港桂平無(wú)論是沒(méi)食子酸還是兒茶素均比其他類產(chǎn)區(qū)低，具體原因有待進(jìn)一步研究分析。

2.4 不同產(chǎn)地金櫻根及不同炮制品中沒(méi)食子酸和兒茶素含量的方差分析

以沒(méi)食子酸和兒茶素的含量作為因變量，采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行多元方差分析，結(jié)果見(jiàn)表6。不同產(chǎn)地的沒(méi)食子酸和兒茶素含量均具有極顯著

性差異（ P<0.01 ），說(shuō)明金櫻根中沒(méi)食子酸和兒茶素含量均受不同地域環(huán)境因素的影響， 與聚類分析的結(jié)果相一致，都反映出金櫻根藥材不同產(chǎn)地間的差異性。在不同炮制方法上，沒(méi)食子酸含量具有極顯著性差異（P<0.01），兒茶素含量具有顯著性差異（P<0.05 ），說(shuō)明炮制方法對(duì)沒(méi)食子酸和兒茶素的含量均有不同程度的影響。

不同產(chǎn)地金櫻根及炮制品中沒(méi)食子酸和兒茶素含量分布見(jiàn)圖3和圖4，不同產(chǎn)地的金櫻根經(jīng)過(guò)炮制后，沒(méi)食子酸含量和兒茶素的含量均有一定程度的變化，沒(méi)食子酸含量在四個(gè)產(chǎn)區(qū)（宜州懷遠(yuǎn)、桂林灌陽(yáng)、貴港桂平及欽州平吉），兒茶素含量在六個(gè)產(chǎn)區(qū)（宜州洛東、桂林灌陽(yáng)、桂林全州、貴港桂平、貴港平南及欽州平吉）的個(gè)別炮制方法中略有下降，但在所有產(chǎn)區(qū)中醋炙后沒(méi)食子酸和兒茶素含量均有所升高，分別達(dá)到（0.66±0.16） mg·g1和（2.83±0.87） mg·g1。對(duì)不同炮制方法下沒(méi)食子酸和兒茶素的含量進(jìn)行進(jìn)一步的方差分析，結(jié)果見(jiàn)表7，醋炙品與其他炮制品都存在顯著性差異（P<0.05）和極顯著性差異（P<0.01），因此，表明醋炙方法最適合金櫻根炮制加工，能有效提高沒(méi)食子酸和兒茶素的含量。

3討論與結(jié)論

3.1 色譜條件及提取方法的考察

在進(jìn)行色譜條件摸索實(shí)驗(yàn)中，依次選用甲醇-磷酸、乙腈-磷酸、甲醇-甲酸、乙腈-甲酸等系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，200～400 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，色譜柱分別用watersC18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）、迪馬色譜柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）、依利特C18色譜柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）、thermosC18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）進(jìn)行考察，柱溫和流速分別用20、30、40 ℃ 和0.8、1.0、1.2 mL·min1 進(jìn)行篩選，由于考慮到?jīng)]食子酸和兒茶素都是含有酚羥基的酸性化合物，極性都比較大，而且金櫻根的成分多以極性較大的成分為主（李石平，2013），因此，為使得分離度好，且峰型效果顯著，在流動(dòng)相中加入不同種類和比例的酸性試劑進(jìn)行篩選（耿麗等，2020），最終測(cè)定沒(méi)食子酸流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸（5∶95），色譜柱為 thermosC18（250 mm ×

4.6 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)為271 nm，流速為0.6 mL·min1，柱溫為30 ℃;測(cè)定兒茶素流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸（10∶90），色譜柱為watersC18 （250 mm × 4.6 mm，5 μm）;檢測(cè)波長(zhǎng)為279 nm;柱溫為30 ℃，流速為1 mL·min1，在這些條件下色譜峰的分離好、基線平穩(wěn)、雜質(zhì)峰的干擾少。

前期在對(duì)金櫻根藥材提取工藝的考察中，分別以沒(méi)食子酸和兒茶素含量為測(cè)定指標(biāo)，將提取溶劑（不同濃度甲醇、不同濃度乙醇、不同濃度鹽酸、不同比例的甲醇-鹽酸），提取方式（加熱回流、超聲提?。?，提取時(shí)間（30 min、45 min、1 h、2 h、3 h、4 h）及稱樣量（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 g）等作為考察因素，最終以所測(cè)成分（沒(méi)食子酸和兒茶素）含量最高作為優(yōu)選條件。因此，分別選用0.1 g稱樣量，4 mol·L1 鹽酸溶液加熱回流4 h作為沒(méi)食子酸測(cè)定的提取方法;0.5 g稱樣量，甲醇-鹽酸（50∶1）溶液超聲處理提取45 min作為兒茶素測(cè)定的提取方法。

在金櫻根藥材含量測(cè)定中多數(shù)集中在采用UV法進(jìn)行（單于超和田素英，2011;黃慧等，2011;蘇亦用等， 2012; 朱萱萱等，2021），本研究建立了

HPLC測(cè)定金櫻根中沒(méi)食子酸和兒茶素的測(cè)定方法，該方法操作簡(jiǎn)單，能使沒(méi)食子酸和兒茶素與其他干擾峰達(dá)到基線分離，且靈敏、可靠、重復(fù)性好，因此能更準(zhǔn)確地對(duì)金櫻根進(jìn)行定性和定量分析。

3.2 基于沒(méi)食子酸和兒茶素含量測(cè)定的金櫻根質(zhì)量評(píng)價(jià)及其炮制方法的優(yōu)選

目前，對(duì)金櫻根中含量測(cè)定的報(bào)道多以測(cè)定某一類化學(xué)成分含量為主，如黃慧等（2011）對(duì)湖南產(chǎn)金櫻根不同炮制品中的總鞣質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示炮制后總鞣質(zhì)含量降低，單于超等（2011）分別對(duì)不同產(chǎn)地金櫻子根、陽(yáng)枝總鞣質(zhì)的含量測(cè)定和金櫻根不同炮制品中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果認(rèn)為廣西產(chǎn)金櫻根中總鞣質(zhì)含量最高和不同炮制方法對(duì)金櫻根中總黃酮含量的影響較大，以上研究只對(duì)某一產(chǎn)地炮制品或幾個(gè)產(chǎn)地的某類成分含量進(jìn)行研究，樣本量及測(cè)定指標(biāo)都較單一。沒(méi)食子酸和兒茶素是金櫻根發(fā)揮藥效作用的重要基礎(chǔ)物質(zhì)，它們均具有酚羥基結(jié)構(gòu)，有一定的酸性，同時(shí)兒茶素具有苦澀味（Scharbert & Hofmann， 2005; 張英娜等，2017）， 可見(jiàn)金櫻根性

味酸來(lái)源于沒(méi)食子酸和兒茶素，澀味主要來(lái)源于兒茶素，因此，測(cè)定沒(méi)食子酸和兒茶素含量具有重要的意義。本研究選取廣西9個(gè)不同產(chǎn)地金櫻根及炮制品作為研究對(duì)象， 并以沒(méi)食子酸和兒茶素

作為測(cè)定指標(biāo)，樣品量包括了廣西大部分產(chǎn)區(qū)，因此，測(cè)定結(jié)果能更好地評(píng)價(jià)廣西金櫻根藥材的質(zhì)量及優(yōu)選適合的炮制加工方法。

沒(méi)食子酸和兒茶素為植物二次代謝產(chǎn)物的多酚類成分，它們的合成與積累受氣候變化、地理環(huán)境等因素的影響（董娟娥和梁宗鎖，2004;錢家萍等，2020），本研究發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的金櫻根中兒茶素和沒(méi)食子酸含量具有較明顯的地理分布傾向，且廣西南部地區(qū)（除貴港桂平外）沒(méi)食子酸和兒茶素的含量整體上比北部地區(qū)高，金櫻根植物喜溫暖濕潤(rùn)的氣候和陽(yáng)光充足的環(huán)境（李小明，2010），廣西南部地區(qū)屬于南亞熱帶氣候，全年氣候較暖熱，雨量及光照充沛（況雪源等，2007），且研究發(fā)現(xiàn)光照強(qiáng)度的升高能增加植物體內(nèi)多酚物質(zhì)的含量（程春龍等，2008），因此，廣西南方氣候條件可能是影響金櫻根中沒(méi)食子酸和兒茶素含量升高的因素之一，然而南部地區(qū)的貴港桂平與其他產(chǎn)區(qū)的成分差異較大，可能是由于生長(zhǎng)環(huán)境或藥材品種等多方因素影響所致。由于本次研究數(shù)據(jù)指標(biāo)有限，對(duì)于地理環(huán)境等其他因素是否影響金櫻根中沒(méi)食子酸和兒茶素的含量需進(jìn)一步研究，后期可通過(guò)再擴(kuò)大樣本量，考察多項(xiàng)影響指標(biāo)（如土壤成分，海拔高低等）來(lái)進(jìn)行深入分析。

本研究對(duì)不同產(chǎn)地金櫻根及炮制品中沒(méi)食子酸和兒茶素進(jìn)行方差分析，發(fā)現(xiàn)經(jīng)炮制后沒(méi)食子酸和兒茶素的含量均有一定程度的變化，推測(cè)是在炮制過(guò)程中，受加熱、輔料等因素影響所致。此外，在同一炮制方法中出現(xiàn)產(chǎn)地間的沒(méi)食子酸和兒茶素含量升降不一致的現(xiàn)象，可能是個(gè)別產(chǎn)地金櫻根中含有某些成分而產(chǎn)生化學(xué)變化或由于在實(shí)驗(yàn)中操作不當(dāng)?shù)纫蛩厮?。本研究中，醋炙后沒(méi)食子酸和兒茶素含量均升高，這與筆者前期研究金櫻根炮制品中金屬含量醋炙方法最優(yōu)相一致（韋熹苑等，2021）。分析醋炙后沒(méi)食子酸含量升高的原因可能是由于在加熱和酸性條件下，金櫻根中鞣質(zhì)類成分或含有沒(méi)食子?；能疹惓煞?， 在加熱炮制條件下分解， 從而導(dǎo)致沒(méi)食子酸含量增加（王云等，2010）。醋炙后兒茶素含量升高可能是由于在中性和堿性條件下兒茶素不穩(wěn)定，而在一定pH的酸性條件下可穩(wěn)定存在（張盼等，2020），因此使得能最大限度地保存兒茶素的成分（吳夢(mèng)琦等，2019），另外也有可能是糖苷類成分轉(zhuǎn)化成兒茶素，并在酸性條件下穩(wěn)定存在。綜上所述，對(duì)于金櫻根各炮制品的炮制機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

3.3 結(jié)論

本研究采用HPLC法建立金櫻根中沒(méi)食子酸和兒茶素含量的測(cè)定方法，為研究廣西金櫻根藥材資源的合理利用及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定的科學(xué)依據(jù)，同時(shí)通過(guò)探討金櫻根炮制前后沒(méi)食子酸和兒茶素含量的變化規(guī)律，揭示金櫻根炮制的科學(xué)性，為今后研究金櫻根炮制品中化學(xué)成分的變化機(jī)制與藥理活性的關(guān)系打下一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

CAO MM， ZHU JG， ZHANG ZL， et al.， 2020. Comparative study on the fingerprints and content of 5 kinds of nucleosides in raw products and different processed products of Pinellia pedatisecta [J]. Chin Pharm， 31（13）： 1601-1607.[曹淼淼， 朱建光， 張振凌， 等， 2020. 虎掌南星生品及不同炮制品指紋圖譜和5種核苷類成分含量的比較研究 [J]. 中國(guó)藥房， 31（13）： 1601-1607. ]

CHENG CL， LIU S， LIAO RS， et al.， 2008. Concentration and distribution of phenolic compounds in Populus euphratica in Ejina Oasis and their correlation with soil water contents [J]. Acta Ecol Sin， 28（1）： 69-75.[程春龍， 劉松， 廖容蘇， 等， 2008. 額濟(jì)納綠洲胡楊（Populus euphratica）酚類物質(zhì)含量和分布及其與土壤水分的關(guān)系 [J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)， 28（1）： 69-75. ]

DAI NH， 2016. Study on active ingrefient from the roots of Rosa laevigata Michx. [D]. Nanning： Guangxi University of Chinese Medicine.[代年華， 2016. 金櫻子根的活性成分研究 [D].

南寧： 廣西中醫(yī)藥大學(xué). ]

DONG JE， LIANG ZS， 2004. Analysis on the factor influencing secondary metabolite accumulation in plants [J]. Acta Bot BorealOccident Sin， 24（10）： 1979-1983.[董娟娥， 梁宗鎖， 2004. 植物次生代謝物積累量影響因素分析 [J]. 西北植物學(xué)報(bào)， 24（10）： 1979-1983. ]

GENG L， LI C， LI ZH， 2020. Simultaneous determination of four kinds of component in the extract of Duchesnea indica （Andr.） Focke by HPLC [J]. Herald Med， 39（8）： 1138-1141.[耿麗， 李聰， 李志浩， 2020. 高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蛇莓提取物中4種成分的含量 [J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 39（8）： 1138-1141. ]

HUANG H， TIAN SY， GAO DZ， 2011. Compare with the content of total from different preparations Radix Rosae laevigatae [J]. AsiaPac Trad Med， 7（8）： 33-35.[黃慧， 田素英， 高達(dá)枝， 2011. 金櫻根不同炮制品的總鞣質(zhì)含量比較 [J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 7（8）： 33-35. ]

KUANG XY， SU Z， TU FX， 2007. Climate regionalization of Guangxi [J]. Guangxi Sci， 14（3）： 278-283.[況雪源， 蘇志， 涂方旭， 2007. 廣西氣候區(qū)劃 [J]. 廣西科學(xué)， 14（3）： 278-283. ]

LI SP， 2013. Study on chemical constituents from the roots of Rosa laevigata Michx. [D]. Hefei： Anhui University.[ 李石平， 2013. 金櫻子根的化學(xué)成分研究[D]. 合肥： 安徽大學(xué).]

LI XM， 2010. Highyield cultivation of Rosa laevigata Michx. [J]. Spec Econ Anim Plant， 13（6）： 35-36.[李小明， 2010. 金櫻子高產(chǎn)栽培 [J]. 特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物， 13（6）： 35-36.]

LONG XQ， DAI YH， 2017. Research advance in chemical constituents and pharmacological effects of roots of Rosa laevigata [J]. AsiaPac Trad Med，13（18）： 68-70.[龍小琴， 戴應(yīng)和， 2017. 金櫻子根化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展 [J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 13（18）： 68-70.]

LU CQ， MAO SH， TONG HR， et al.， 2018. Progress in the synthesis of catechin and its derivatives [J]. Food Sci， 39（11）： 316-32.[陸昌琪， 毛世紅， 童華榮， 等， 2018. 兒茶素及其衍生物合成研究進(jìn)展 [J]. 食品科學(xué)， 39（11）： 316-326.]

L LM， GAO J， LI DW， et al.， 2020. Effect of different processing methods on content of indicator components in Codonopsis [J]. J Shenyang Pharm Univ， 37（7）： 650-656.[呂立銘， 高娟， 李大煒， 等， 2020. 不同炮制方法對(duì)黨參指標(biāo)性成分含量的影響 [J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)， 37（7）： 650-656.]

MA YG， YUE XK， CAO G， et al.， 2013. Determination of main active components incrude and processed Corydalis rhizoma samples from different habitats [J]. J Chin Med Mat， 36（11）： 1754-1758.[馬月光， 岳顯可， 曹崗， 等， 2013. 不同產(chǎn)地延胡索飲片炮制前后有效成分含量的測(cè)定 [J]. 中藥材， 36（11）： 1754-1758.]

QIAN JP， LUO B， ZHONG L， et al.， 2020. Effects of different producing area， tree age， cutting processing on the contents of active compounds in Cinnamomi cortex [J]. J Chin Med Mat， 43（12）： 2887-2892. [錢家萍， 羅碧， 鐘磊， 等， 2020. 不同產(chǎn)地、樹(shù)齡、砍伐處理對(duì)肉桂藥材活性成分含量的影響 [J]. 中藥材， 43（12）： 2887-2892.]

SHAN YC， GUO QL， ZHUANG YF， et al.， 2011. Determination of total tannin in root and stem of Rosa laevigata Michx. from different habitats [J]. Chin J Ethnomed Ethnopharm， 20（23）： 59-60.[單于超， 郭巧玲， 莊銀鳳， 等， 2011. 不同產(chǎn)地金櫻子根、陽(yáng)枝總鞣質(zhì)的含量測(cè)定 [J]. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥， 20（23）： 59-60. ]

SHAN YC， TIAN SY， 2011. Content determination of total flavonoids from different preparations of Radix Rosae laevigatae [J]. Pharm Today， 21（7）： 414-415.[單于超， 田素英， 2011. 金櫻根不同炮制品中總黃酮的含量測(cè)定 [J]. 今日藥學(xué)， 21（7）： 414-415.]

SCHARBERT S， HOFMANN T， 2005. Molecular definition of black tea taste by means of quantitative studies，taste reconstitution， and omission experiments [J]. J Agric Food Chem， 53（13）： 5377-5384.

SU YY， GUO QL， TIAN SY， et al.， 2012. Studies on quality standard of Radix Rosae laevigatae [J]. Chin J Exp Trad Med Form， 18（15）： 109-111.[蘇亦用， 郭巧玲， 田素英， 等， 2012. 金櫻根質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 18（15）： 109-111.]

WANG Y， LI L， ZHANG C， et al.， 2010. Comparison of gallic acid and catechin contents in five processed products of Rheum palametum[J]. Chin J Chin Mat Med， 35（17）： 2267-2269.[王云， 李麗， 張村， 等， 2010. 大黃5種飲片中沒(méi)食子酸和兒茶素的含量比較研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志， 35（17）： 2267-2269. ]

WU MQ， QIN F， ZHANG X， et al.， 2019. Advances in bioavailability of catechins [J]. Sci Technol Food Indust， 40（21）： 326-330.[吳夢(mèng)琦， 秦菲， 張宣， 等， 2019. 兒茶素類物質(zhì)生物利用度研究進(jìn)展 [J]. 食品工業(yè)技， 40（21）： 326-330. ]

WEI XY， DENG Q， SHU K， et al.， 2021. Determination of 22 metal elements in the roots of Rosa laevigata and its processed products from different habitats of Guangxi by ICPMS [J]. Guihaia， 41（7）： 1209-1218.[韋熹苑， 鄧琦， 舒柯， 等， 2021. ICPMS法測(cè)定廣西金櫻根及炮制品中22 種金屬元素 [J]. 廣西植物， 41（7）： 1209-1218.]

XU YC， MA CH， WEI LX， et al.， 2002. Determination of the content of 2α， 3β， 19α， 23tetrahydroxy ursolu12ene28carboxylic acid in Jinyingzi （Dried Hip of Rosa laevigata） by HPLC [J]. J Beijing Univ Trad Chin Med， 25（4）： 42-44.[徐艷春， 馬長(zhǎng)華， 魏璐雪， 等， 2002. 高效液相法測(cè)定金櫻子中三萜酸類成分的含量 [J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 25（4）： 42-44. ]

YI YH， WU GQ， LIN SP， et al.， 2010. Study on contraction of total flavonoid of root and stem of Rosa laevigata Michx. [J]. Guangdong Agric Sci， 37（7）： 121-123.[易運(yùn)紅， 吳功慶， 林淑萍， 等， 2010. 金櫻子根及莖總黃酮的提取研究 [J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 37（7）： 121-123. ]

ZHANG YN， JI WB， XU YQ， et al.，2017. Review on taste characteristic of catechins and its sensory analysis method[J]. J Tea Sci， 37（1）： 1-9.[張英娜， 嵇偉彬， 許勇泉， 等， 2017. 兒茶素呈味特性及其感官分析方法研究進(jìn)展 [J]. 茶葉科學(xué)， 37（1）： 1-9.]

ZHANG P， HU Y， TANG H， et al.， 2020. Overview of the structure， formation mechanism and biological activity of catechin oxides [J]. Mod Food， 29（8）： 72-75.[張盼， 胡月， 唐晗， 等， 2020. 兒茶素氧化物的結(jié)構(gòu)、形成機(jī)理及生物活性研究進(jìn)展 [J]. 現(xiàn)代食品， 29（8）： 72-75. ]

ZHENG XH， YANG J， YANG YH， 2017. Research progress on pharmacological effects of gallic acid [J]. Chin J Hosp Pharm， 37（1）： 94-98.[鄭雪花， 楊君， 楊躍輝， 2017. 沒(méi)食子酸藥理作用的研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志， 37（1）： 94-98.]

ZHONG M， HUANG RS， LIANG QC， 2013. Chinese Zhuang Medicine [M]. Nanning： Guangxi Nationality Press： 529-530.[鐘鳴， 黃瑞松， 梁?jiǎn)⒊桑?2013. 中國(guó)壯藥學(xué) [M]. 南寧： 廣西民族出版社： 529-530.]

ZHU XX， LIU XQ， LIANG YH， et al.， 2021. Investigation on in vitro antioxidant activity and chemical composition of different polar parts of extract of Rosa cymosa roots [J]. Chin J Exp Trad Med Form， 27（8）： 117-125.[朱萱萱， 劉曉謙， 梁曜華， 等， 2021. 金櫻根提取物不同極性部位的體外抗氧化活性考察及其化學(xué)成分分析 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 27（8）： 117-125.]

（責(zé)任編輯周翠鳴）

收稿日期：2021-02-19

基金項(xiàng)目：廣西科技開(kāi)發(fā)項(xiàng)目（桂科AD19110088）;廣西高校中青年教師基礎(chǔ)能力提升項(xiàng)目（2018KY0332）

第一作者： 韋熹苑（1985-），碩士，工程師，主要從事中藥成分分析工作，（Email）249265851@qq.com。

通信作者：舒柯，碩士，副主任藥師，研究方向民族藥成分分析與研究，（Email）50618622@qq.com。