HPLC法測定馬來酸氟伏沙明片中馬來酸氟伏沙明含量

＊邵廣晴 方慶

（1.萬博科技職業(yè)學(xué)院 安徽 230031 2.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 安徽 230031）

馬來酸氟伏沙明片為薄膜衣劃痕片，除去包衣后顯白色或類白色，其主要成分馬來酸氟伏沙明（Fluvoxamine Maleate，F(xiàn)ML）（C15H21F3N2O2·C4H4O4），化學(xué)名為（E）-5-甲氧基-1-（4-三氟甲苯基）-O-（2-胺乙肟基）-1-戊酮馬來酸鹽，在甲醇或乙醇中易溶，在水中略溶。它是一種選擇性作用于腦神經(jīng)細(xì)胞的5-羥色胺再攝取抑制劑，對(duì)非腎上腺素過程影響很小，對(duì)α-腎上腺素能、β-腎上腺素能、組胺、M-膽堿能、多巴胺能或6-羥色胺受體幾乎不具有親和性。作用譜廣，能對(duì)焦慮、激動(dòng)、失眠和精神病產(chǎn)生有利的作用，能有效治療各種類型的抑郁癥和強(qiáng)迫癥，并能有效用于社交焦慮癥、驚恐性障礙、身體變形障礙等。副作用小，不會(huì)出現(xiàn)性功能障礙、視力模糊等癥狀。臨床上用于抑郁癥及相關(guān)癥狀的治療，強(qiáng)迫癥癥狀治療。在美國藥典USP43-NF38中，馬來酸氟伏沙明片含量測定使用的是高效液相色譜法，其流動(dòng)相為乙腈-緩沖液（8g的1-戊烷磺酸鈉鹽和1.0g磷酸二氫鉀，加1000ml水溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.00±0.05）=38:62。在中國藥典2020版中，馬來酸氟伏沙明片含量測定同樣使用高效液相色譜法，但流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液（含1.25%磷酸氫二銨與0.275%庚烷磺酸鈉的水溶液，用磷酸調(diào)pH值至3.0）-甲醇=45:55。兩種方法中均使用了離子對(duì)試劑，且使用了較大濃度的緩沖鹽濃度，從降低實(shí)驗(yàn)成本并減少離子對(duì)試劑對(duì)環(huán)境污染及色譜系統(tǒng)使用壽命等方面考慮，本文參照USP43中有關(guān)物質(zhì)測試2方法，調(diào)整流動(dòng)相中鹽濃度及有機(jī)相比例，以0.01mol/L的醋酸鈉溶液-乙腈-甲醇=40:40:20為流動(dòng)相，每升流動(dòng)相中加入2ml三乙胺，用冰醋酸調(diào)pH至4.5，并驗(yàn)證此方法是否能準(zhǔn)確可靠地進(jìn)行馬來酸氟伏沙明片中馬來酸氟伏沙明含量的測定。結(jié)果表明，此方法穩(wěn)定性好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高。

1.材料

(1)儀器

高效液相色譜儀（Waters 2695）：美國Waters公司；FE28 pH計(jì)：梅特勒-托利多有限公司；超聲波清洗機(jī)：昆山超聲儀器有限公司；MS105分析天平：日本島津。

(2)試劑

甲醇（HPLC級(jí)）：TEDIA公司；乙腈（HPLC級(jí)）：TEDIA公司；醋酸鈉（AR級(jí)）：天津永大試劑有限公司；冰醋酸（AR級(jí)）：國藥集團(tuán)；三乙胺：西隴化學(xué)試劑有限公司；純化水：娃哈哈純凈水。馬來酸氟伏沙明對(duì)照品：批號(hào)：100792- 201902；含量：99.9%；中國藥品生物制品檢定研究院。

2.方法

(1)色譜條件

Welch XB-C8色譜柱（4.6×250mm，5μm），流動(dòng)相：0.01mol/L的醋酸鈉溶液-乙腈-甲醇=40:40:20為流動(dòng)相，每升流動(dòng)相中加入2ml三乙胺，用冰醋酸調(diào)pH至4.5；流速：1.0ml/min；檢測波長：254nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣體積：10μl。

(2)樣品配制

①對(duì)照品溶液配制：精密稱取馬來酸氟伏沙明對(duì)照品約10mg置100ml量瓶中，加甲醇-水（60:40）溶解并稀釋至刻度。②供試品溶液配制：取馬來酸氟伏沙明片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于馬來酸氟伏沙明0.1g），置100ml量瓶中，加甲醇-水（60:40）適量，超聲溶解15min后，用甲醇-水（60:40）稀釋至刻度，用0.22μm濾膜濾過，取續(xù)濾液5ml置50ml量瓶中，用甲醇-水（60:40）稀釋至刻度。

3.結(jié)果

(1)專屬性實(shí)驗(yàn)

分別量取空白溶劑甲醇-水=60:40，對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1）。在此色譜條件下，空白溶劑無干擾，理論板數(shù)以氟伏沙明峰計(jì)，不低于2000，氟伏沙明與相鄰峰分離度大于1.5。

圖1 空白溶劑、對(duì)照品溶液和供試品溶液圖譜

(2)線性關(guān)系

取馬來酸氟伏沙明對(duì)照品100.37mg置100ml量瓶中，加甲醇-水（60:40）溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液。再用甲醇-水（60:40）稀釋制成每1ml含0.05mg、0.08mg、0.1mg、0.12mg、0.15mg、0.20mg的溶液。量取各濃度對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。濃度與峰面積關(guān)系見表1。

表1 馬來酸氟伏沙明線性關(guān)系

以峰面積為橫坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為縱坐標(biāo)，作線性回歸方程。得回歸方程為：Y=17398771x-7984，r=0.9999。

結(jié)果表明：在0.05mg/ml～0.20mg/ml范圍內(nèi)，馬來酸氟伏沙明濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

(3)精密度試驗(yàn)

取同一標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄色譜圖，數(shù)據(jù)見表2。

表2 馬來酸氟伏沙明進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

結(jié)果：6針對(duì)照品溶液峰面積均值為1737455，RSD為0.23%，說明儀器精密度良好。

(4)檢測限定量限試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)照品溶液，用甲醇-水（60:40）逐級(jí)稀釋制成氟伏沙明峰信噪比S/N約為10的溶液，作為定量限測試溶液；用甲醇-水（60:40）逐級(jí)稀釋制成氟伏沙明峰信噪比S/N約為3的溶液，作為檢測限測試溶液。

結(jié)果：馬來酸氟伏沙明定量限濃度約為0.025μg/ml；檢測限濃度約為0.013μg/ml。

(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)

取新配制的供試品溶液及對(duì)照品溶液，室溫放置，分別于0h、2h、4h、8h、12h進(jìn)樣，記錄色譜圖。數(shù)據(jù)見表3。

表3 馬來酸氟伏沙明溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果：供試品溶液室溫放置12h，峰面積RSD為5.53%；對(duì)照品溶液室溫放置12h，峰面積RSD為3.85%。溶液不穩(wěn)定。

(6)重復(fù)性試驗(yàn)

取馬來酸氟伏沙明片適量，按供試品溶液配制法平行配制6份供試品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。數(shù)據(jù)見表4。

表4 馬來酸氟伏沙明重復(fù)性試驗(yàn)

結(jié)果：6份供試品溶液平均含量為99.8%，RSD為0.38%，重復(fù)性良好。

(7)回收率試驗(yàn)

取馬來酸氟伏沙明對(duì)照品適量，按馬來酸氟伏沙明片處方加入各輔料，按供試品溶液制備方法分別制成每1ml含馬來酸氟伏沙明0.08mg、0.10mg、0.12mg的溶液各3份。量取各測試溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。數(shù)據(jù)見表5。

表5 馬來酸氟伏沙明回收率試驗(yàn)

續(xù)表

結(jié)果：9份測試溶液平均回收率為100.43%，RSD為0.84%。

4.討論

（1）中國藥典2020年版及USP43中，馬來酸氟伏沙明片含量測定采用的方法均為高效液相色譜法，在色譜法中均使用了離子對(duì)試劑，且使用了較大濃度的緩沖鹽濃度。盡管離子對(duì)試劑可以增加樣品在色譜柱上的保留時(shí)間、改善分離性質(zhì)。但是離子對(duì)試劑對(duì)儀器傷害很大，會(huì)對(duì)色譜柱造成不可逆的損傷，另外離子對(duì)試劑也很難從色譜柱上沖洗干凈，色譜柱的使用壽命也會(huì)大大縮短。并且離子對(duì)試劑的價(jià)格較為昂貴，又污染環(huán)境。本方法使用的試劑均為常規(guī)試劑，大大降低了檢測成本，對(duì)環(huán)境的污染也較小。

（2）本品供試品溶液及對(duì)照品溶液不穩(wěn)定，室溫放置12h，供試品溶液峰面積RSD為5.53%，對(duì)照品溶液峰面積RSD為3.85%，均大于2.0%。故應(yīng)臨用前新制。