真核細(xì)胞延伸因子2激酶（eEF2K）在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病機制中的作用

岑麗蘭　周欣鴻　顧倩　陸海善　田喆　楊茜

【摘要】目的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GBM）具有高度的異質(zhì)性和侵略性。真核細(xì)胞延伸因子2激酶（eEF2K）在多種腫瘤中均過表達(dá)，但其在GBM中的作用尚不清楚。本研究基于腫瘤基因組圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)，旨在闡明eEF2K與GBM的關(guān)系。方法通過TCGA數(shù)據(jù)庫用Wilcoxon檢驗和配對檢驗了解eEF2K在GBM和正常組織中eEF2K的表達(dá)水平。制作受試者工作特征（ROC）曲線，利用曲線下面積（AUC值）評價eEF2K作為二元分類法的價值。Cox回歸分析和Kaplan-Meier曲線用于評估eEF2K mRNA表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性?；蚣患治觯℅SEA）被用于闡明eEF2K在GBM中的生物學(xué)功能。結(jié)果與正常組織相比，eEF2K在GBM組織中的表達(dá)顯著升高（P<0.001）。ROC曲線顯示eEF2K對GBM的診斷能力較低（AUC=0.697）。Kaplan-Meier生存分析顯示eEF2K高表達(dá)與GBM患者預(yù)后無關(guān)。GSEA發(fā)現(xiàn)eEF2K的表達(dá)與G-alpha（s）信號通路、亨廷頓?。℉untington disease）、阿爾茲海默?。ˋlzheimer's disease， AD）、TP53調(diào)節(jié)代謝基因、線粒體中的電子傳輸鏈、反應(yīng)性生物氧化有關(guān)，而ssGSEA顯示eEF2K的表達(dá)與多種免疫細(xì)胞浸潤水平有關(guān)。結(jié)論eEF2K在GBM中上調(diào)并不能作為預(yù)后不良的生物標(biāo)志，但是參與GBM中多種免疫細(xì)胞浸潤。此外，eEF2K在GBM中的生物學(xué)功能可能與G-alpha（s）、TP53調(diào)節(jié)代謝基因、線粒體中的電子傳輸鏈、反應(yīng)性生物氧化有關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)有助于闡明eEF2K在腫瘤發(fā)生中的作用，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】真核細(xì)胞延伸因子2激酶;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;免疫細(xì)胞浸潤;預(yù)后;泛癌分析

中圖分類號：R739.41文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.05.002

Role of eukaryotic elongation factor 2 kinase （eEF2K）

in the pathogenesis of glioblastoma

CEN Lilan ZHOU Xinhong GU Qian LU Haishan TIAN Zhe YANG Qian

（1. Center for Clinical Pathology Diagnosis and Research， Youjiang Medical University for Nationalities，

2. Department of Clinical Pathology， Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities，

3. College of Basic Medicine， Youjiang Medical University for Nationalities， 4. Neuroscience Research

Laboratory， Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China）

【Abstract】ObjectiveGlioblastoma （GBM） is highly heterogeneous and aggressive， and eukaryotic elongation factor 2 kinase （eEF2K） is overexpressed in a variety of tumors， but its role in GBM is unknown. This study aimed to elucidate relationship between eEF2K and GBM based on data from The Cancer Genome Atlas （TCGA） database. MethodsThe expression levels of eEF2K in GBM and normal tissues were studied by Wilcoxon test and pairing test through TCGA database. Receiver operating characteristic （ROC） curve was used to evaluate the value of eEF2K as a binary classification method. Cox regression analysis and Kaplan Meier curve were used to evaluate correlation between eEF2K mRNA expression and prognosis. In addition， gene set enrichment analysis （GSEA） was used to clarify the biological function of eEF2K in GBM. ResultsCompared with normal tissues， the expression of eEF2K in GBM tissues was significantly higher （P<0.001）. ROC curve showed that eEF2K had low diagnostic ability for GBM （AUC=0.697）. Kaplan Meier survival analysis showed that the high expression of eEF2K was not related to the prognosis of GBM patients. Meanwhile， GSEA found that the expression of eEF2K was related to G-alpha （s） signal pathway， Huntington disease， Alzheimer's disease（AD）， TP53 regulates metabolic genes， electron transport chain in mitochondria， and reactive biological oxidation， while ssGSEA showed that the expression of eEF2K was related to various levels of immune cell infiltration. ConclusionThe up-regulation of eEF2K in GBM can not be used as a biomarker of poor prognosis， but it involves in a variety of immune cell infiltration in GBM. In addition， the biological function of eEF2K in GBM may be related to G-alpha （s）， Tp53 regulates metabolic genes， electron transport chain in mitochondria， and reactive biological oxidations. These findings help to clarify the role of eEF2K in tumorigenesis and lay a foundation for further research.9860FF2B-6653-4F43-81A5-22CFDB094EDF

【Key words】eEF2K; glioblastoma; immune cell infiltration; prognosis; pan-cancer analysis

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GBM）是成人原發(fā)性腦腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一。盡管目前有可用的治療方法，但預(yù)后不佳，1年生存率為35.7%，5年生存率為4.7%，總生存期為14.6個月，平均生存期低于20個月[1～2]。目前治療GBM患者的傳統(tǒng)方法是手術(shù)切除腫瘤（在可能的情況下），同時進(jìn)行放療和替莫唑胺（TMZ）化療，然后輔以替莫唑胺[3]。新出現(xiàn)的免疫療法在治療方案上取得一定進(jìn)展，但由于缺乏共同表達(dá)的分子靶點和有效的靶向治療，患者的生存并未得到實質(zhì)性改善。因此，為了開發(fā)高效的分子靶向治療方法，迫切需要更好地了解GBM的生物學(xué)機制，尋找新的治療靶點。

鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅲ（Ca²⁺/calmodulin-dependent protein kinases Ⅲ），也被稱之為真核細(xì)胞延長因子2激酶（eukaryotic elongation factor-2 kinase，eEF2K），是一種控制蛋白質(zhì)的關(guān)鍵酶，在膠質(zhì)瘤和其他幾種類型的人類癌癥中表達(dá)上調(diào)[3～4]。通過不同的途徑和機制，發(fā)現(xiàn)eEF2K的活性與腫瘤細(xì)胞的增殖有關(guān)，在幾種類型的惡性腫瘤中檢測到eEF2K的高表達(dá)水平[5～6]。此外發(fā)現(xiàn)TMZ聯(lián)合eEF2K抑制劑可以使GBM患者獲得更好的治療效果[3]，所以我們認(rèn)為eEF2K可能是GBM新的治療靶點。

本研究使用來自基于腫瘤基因組圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)，我們試圖證明 eEF2K與GBM之間的相關(guān)性，確定eEF2K在GBM腫瘤組織中表達(dá)情況。此外，我們進(jìn)行預(yù)后和臨床相關(guān)性研究，以探索eEF2K的潛在診斷和預(yù)后價值;并通過富集分析和免疫浸潤相關(guān)分析確定eEF2K的生物學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 eEF2K單基因表達(dá)差異分析所有癌癥類型包括腎上腺皮質(zhì)癌（ACC）、膀胱尿路上皮癌（BLCA）、乳腺浸潤癌（BRCA）、宮頸鱗癌和腺癌（CESC）、膽管癌（CHOL）、結(jié)腸癌（COAD）、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBC）、食管癌（ESCA）、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤（GBM）、頭頸鱗狀細(xì)胞癌（HNSC）、腎嫌色細(xì)胞癌（KICH）、腎透明細(xì)胞癌（KIRC）、腎乳頭狀細(xì)胞癌（KIRP）、急性髓細(xì)胞樣白血?。↙AML）、腦低級別膠質(zhì)瘤（LGG）、肝細(xì)胞癌（LIHC）、肺腺癌（LUAD）、肺鱗癌（LUSC）、間皮瘤（MESO）、卵巢漿液性囊腺癌（OV）、胰腺癌（PAAD）、嗜鉻細(xì)胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤（PCPG）、前列腺癌（PRAD）、直腸腺癌（READ）、肉瘤（SARC）、皮膚黑色素瘤（SKCM）、胃癌（STAD）、睪丸癌（TGCT）、甲狀腺癌（THCA）、胸腺癌（THYM）、子宮內(nèi)膜癌（UCEC）、子宮肉瘤（UCS）和葡萄膜黑色素瘤（UVM）。為了分析eEF2K在以上癌癥和鄰近組織中表達(dá)差異，我們使用UCSC XENA （https：//xenabrowser.net/datapages/）網(wǎng)站下載TCGA和基因型-組織表達(dá)（genotype-tissue expression， GTEx）的TPM （transcripts per million reads）格式的RNAseq（RNA sequencing）數(shù)據(jù)，樣本數(shù)共15 776個。將TPM格式的RNAseq數(shù)據(jù)進(jìn)行l(wèi)og2轉(zhuǎn)化后通過Mann-Whitney U 檢驗比較分析。從中提取TCGA的GBM和GTEx中對應(yīng)的正常組織數(shù)據(jù)并繪制受試者工作特征（ROC）曲線。運行R 語言（3.6.3版本） 加載ggplot2包（3.3.3版本）[7]和pROC包（1.17.0.1版本）用于可視化分析。

1.2 eEF2K在GBM患者中的預(yù)后分析GBM樣品的RNA測序結(jié)果以及臨床數(shù)據(jù)來自TCGA數(shù)據(jù)庫（https：//portal.gdc.cancer.gov/）和來自于Cell的文章的數(shù)據(jù)作為補充數(shù)據(jù)[8]。將數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選：剔除對照組以及不含有臨床信息的數(shù)據(jù)。采用Cox回歸分析eEF2K與GBM患者中總體生存率（overall survival，OS）、疾病特異性生存率（disease specific survival，DDS）和無進(jìn)展間期（progress free interval，PFI）的關(guān)系，通過Kaplan-Meier曲線表示GBM患者eEF2K高低表達(dá)之間的生存情況。運行R語言軟件（3.6.3版本）加載survminer包（0.4.9版本）用于可視化;加載survival包（3.2-10版本）用于生存資料的統(tǒng)計分析。

1.3 GBM患者中與eEF2K相關(guān)的差異表達(dá)基因（differentially expressed genes， DEGs）在R語言軟件（3.6.3版本）加載DESeq2包（1.26.0版本）處理TCGA GBM項目中 level 3 HTSeq-Counts格式的RNAseq數(shù)據(jù)，去除對照/正常組。根據(jù)eEF2K基因的表達(dá)中位值，將樣本分為eEF2K高表達(dá)組和eEF2K低表達(dá)組。對數(shù)倍變化的絕對值|log2（FC）|>1.5和調(diào)整后的P值（p.adj）<0.05被認(rèn)為是DEGs的閾值。設(shè)置差異倍數(shù)、生成差異分析結(jié)果后利用ggplot2（3.3.3版本）繪制火山圖。

1.4 基因本體注釋（GO）分析Enrichr （https：//maayanlab.cloud/Enrichr/）是基于網(wǎng)頁端的綜合性的基因集富集工具[9]。本研究利用Enrichr軟件對eEF2K相關(guān)DEGs進(jìn)行GO分析。基于Enrichr在線工具，將涉及的生物過程（biological process，BP）、細(xì)胞成分（cellular component，CC）和分子功能（molecular function，MF）類別的GO術(shù)語按P值排序。9860FF2B-6653-4F43-81A5-22CFDB094EDF

1.5 基因集富集分析（gene set enrichment analysis， GSEA）GSEA用來評估一個預(yù)先定義的一組基因在兩種生物狀態(tài)之間是否表現(xiàn)出統(tǒng)計學(xué)上顯著的一致性差異[10]。在這項研究中，使用R語言包Cluster Profiler[11]進(jìn)行GSEA可視化，以闡明eEF2K高表達(dá)組和低表達(dá)組之間的顯著功能和途徑差異。每個分析程序重復(fù)1000次。參考基因集合：c2.cp.v7.2.symbols.gmt（Curated），基因集數(shù)據(jù)庫來自MSigDB Collections。P<0.05且偽發(fā)現(xiàn)率（false discovery rate， FDR）<0.25的功能或途徑被認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義的富集。

1.6 免疫浸潤細(xì)胞與eEF2K表達(dá)的相關(guān)性分析通過R語言軟件 （3.6.3版本）加載GSVA包（1.34.0版本）利用ssGSEA（single-sample gene set enrichment analysis）免疫浸潤算法得出數(shù)據(jù)。采用Wilcoxon秩和檢驗和Pearson相關(guān)分析，評價免疫細(xì)胞浸潤與不同eEF2K mRNA表達(dá)組之間的關(guān)系。用TIMER軟件驗證不同eEF2K mRNA表達(dá)水平與TCGA數(shù)據(jù)庫中GBM免疫細(xì)胞浸潤的相關(guān)性。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法所有統(tǒng)計分析和繪圖均使用R語言軟件（3.6.3版）進(jìn)行。Mann-Whitney U檢驗（Wilcoxon rank sum test）用于eEF2K在泛癌中的表達(dá)情況。Wilcoxon秩和檢驗和Wilcoxon符號秩檢驗分別用于分析eEF2K在非配對樣本中的表達(dá)。使用 pROC 包生成 ROC 曲線以評估 eEF2K 表達(dá)的診斷性能。使用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并通過對數(shù)秩檢驗評估組間差異。使用Spearman檢驗分析eEF2K與免疫細(xì)胞的關(guān)系。檢驗水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗。

2 結(jié)果

2.1 eEF2K在GBM中表達(dá)上調(diào)為了評估人類癌癥中的eEF2K mRNA表達(dá)，我們使用來自TCGA的泛癌RNAseq數(shù)據(jù)檢查eEF2K mRNA表達(dá)（表1）。得出了33種腫瘤（包括GBM在內(nèi)）與鄰近正常組織之間eEF2K mRNA的差異表達(dá)情況（圖1A）。TCGA數(shù)據(jù)庫中除了ACC、OV、PCPG表達(dá)無差異外，SARC的正常組織例數(shù)僅為2例，無法進(jìn)行客觀的比較，其他腫瘤類型的 eEF2K mRNA 表達(dá)均存在差異。CHOL、DLBC、ESCA、GBM、HNSC、KIRC、KIRP、LAML、LGG、LIHC、 PAAD、STAD、TGCT、THYM表達(dá)均顯著高于正常組織; BLCA、BRCA、CESC、COAD、KICH、LUAD、LUSC、PRAD、READ、SKCM、THCA、UCEC、UCS表達(dá)均顯著低于正常組織。通過泛癌分析提示GBM患者中eEF2K mRNA顯著高于鄰近正常組織。我們進(jìn)一步通過非配對標(biāo)本分析，GBM組eEF2K mRNA的表達(dá)高于鄰近正常組織（圖1B）。ROC曲線顯示GBM中eEF2K mRNA的表達(dá)為0.697（95% CI：0.665～0.729）（圖1C），eEF2K的最佳截斷值為2.455（TPM）。

2.2 eEF2K表達(dá)與GBM預(yù)后無關(guān)為了探討eEF2K是否影響GBM患者的預(yù)后，我們通過Kaplan-Meier 曲線進(jìn)行生存分析，如圖2A～C所示，eEF2K高表達(dá)（n=84，紅色）和低表達(dá)（n=84，藍(lán)色）與GBM患者的OS，eEF2K高表達(dá)（n=77）和低表達(dá)（n=78）的DSS、eEF2K高表達(dá)（n=84）和低表達(dá)（n=84）的PFI預(yù)后無相關(guān)性。

2.3 DEGs鑒定與eEF2K相關(guān)的37 832個基因我們對膠質(zhì)瘤中與eEF2K相關(guān)的基因的進(jìn)行DEGs。共鑒定了37 832個與eEF2K表達(dá)相關(guān)的基因，鑒定出滿足|log2（FC）|>1.5 & p.adj<0.05閾值的ID有357個，在這閾值下，上調(diào)基因（logFC為正）的數(shù)目有5個，下調(diào)基因（logFC為負(fù)）的數(shù)目有352個， 在熱圖和火山圖中顯示了DEGs的表達(dá)（圖3A、B）。

2.4 預(yù)測與eEF2K高、低表達(dá)的相關(guān)信號通路利用GO分析對GBM患者共表達(dá)的功能進(jìn)行預(yù)測。在生物過程（BP）、細(xì)胞成分（CC）和分子功能（MF）組中， BP中GO術(shù)語前10的條目是CD4⁺αβT細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)節(jié)、維A酸受體信號通路、αβT細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)控、CD4⁺αβT細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)、CD4⁺αβT細(xì)胞活化的負(fù)性調(diào)節(jié)、鈉離子穩(wěn)態(tài)、單價無機陽離子穩(wěn)態(tài)、干擾素-γ產(chǎn)生的負(fù)調(diào)控、金屬離子的穩(wěn)態(tài)、對維A酸的反應(yīng)（圖4A）。CC中GO術(shù)語中P值排序靠前的條目是鈉通道復(fù)合物、陽離子通道復(fù)合物（圖4B）。MF中GO術(shù)語中P值排序靠前的條目是配體門控鈉通道活性、MAP激酶活性、蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸激酶活性、WW結(jié)構(gòu)域綁定、鈉通道活性、配體門控陽離子通道活性（圖4C）。我們還進(jìn)行了GSEA分析，以確定與eEF2K相關(guān)的關(guān)鍵通路和疾病。由于文章篇幅有限，按照降序選取前19個滿足FDR<0.25，P<0.05標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)集，并結(jié)合相關(guān)文章報道利用GSEA分析，從中挑選六條最豐富的通路和相關(guān)疾病，包括G-α（s）信號通路（圖4D），Huntington?。▓D4E），阿爾茨海默?。▓D4F）， TP53調(diào)節(jié)代謝基因（圖4G），線粒體中的電子傳輸鏈（圖4H），反應(yīng)組生物氧化（圖4I）。

2.5 eEF2K表達(dá)與免疫浸潤有關(guān)GO和GSEA富集分析提示eEF2K可能參與腫瘤免疫反應(yīng)。我們進(jìn)一步應(yīng)用ssGSEA分析了eEF2K mRNA表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤水平的關(guān)系，詳細(xì)的分析結(jié)果見表2。免疫細(xì)胞浸潤與eEF2K mRNA表達(dá)的相關(guān)性如圖5A所示。結(jié)果表明，eEF2K mRNA表達(dá)與Tem cells、NK cells、Tgd cells、Tcm cells、輔助性T cells和Th2 cells浸潤呈正相關(guān)（圖5B～G）。eEF2K mRNA表達(dá)與細(xì)胞毒性T細(xì)胞、T cells和B cells浸潤呈負(fù)相關(guān)（圖5H～J）。9860FF2B-6653-4F43-81A5-22CFDB094EDF

3 討論

我們通過TCGA數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)eEF2K在多種腫瘤組織中表達(dá)存在差異，eEF2K在胃癌、胰腺癌、食管癌、肝癌和腦腫瘤（多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤）等多種實體癌中表達(dá)上調(diào)[4，6，12～14]，在結(jié)直腸癌中，eEF2K的mRNA和蛋白質(zhì)水平均顯著下調(diào)[15]。文章還揭示了eEF2K參與腫瘤的增殖、侵襲、浸潤和生長[5]。不僅如此，其還參與多種疾病狀態(tài)的調(diào)節(jié)，包括心血管、神經(jīng)系統(tǒng)疾病及其他癌癥[16]。eEF2K似乎在腫瘤中充當(dāng)了雙重作用，既可以有助于體內(nèi)腫瘤的生長，又可以抑制腫瘤的發(fā)生。我們的分析證實了這一點，我們發(fā)現(xiàn)eEF2K在TCGA各腫瘤類型中既有高表達(dá)，也存在低表達(dá)。這些結(jié)果表明，eEF2K可能參與了多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展。

結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)庫中結(jié)果顯示，eEF2K在GBM組織中的表達(dá)高于正常組織，與非配對樣本分析中基因表達(dá)水平一致。eEF2K在膠質(zhì)瘤細(xì)胞誘導(dǎo)自噬中起著關(guān)鍵作用，通過沉默BECN1來抑制eEF2K介導(dǎo)的自噬，可以顯著提高抗癌藥物對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的療效[17]。抑制自噬顯著降低了在營養(yǎng)耗竭條件下GBM瘤細(xì)胞的生長活力[4]。LIU等人[3]通過在膠質(zhì)瘤模型中加用eEF2K抑制劑NH125，發(fā)現(xiàn)抑制eEF2K可增強TMZ對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長、增殖、遷移和侵襲的抑制作用。此外我們還發(fā)現(xiàn)，eEF2K的表達(dá)可以作為GBM的診斷標(biāo)志，其AUC（area under curve）為0.697。但基于目前關(guān)于eEF2K在GBM腫瘤中的研究甚少，其作用機制暫不清楚。

研究表明eEF2K與多種腫瘤生存預(yù)后有關(guān)，目前人們把eEF2K看成多種腫瘤預(yù)后不良的生物標(biāo)志物和靶向治療的潛在新的分子靶點[18]。其高表達(dá)與肺癌患者總體生存期較短有關(guān)[5]。而在結(jié)直腸癌中，eEF2K陰性組的患者總體存活率明顯低于eEF2K陽性組[15]。因此，我們猜想eEF2K在GBM腫瘤中表達(dá)上調(diào)，是否可以作為GBM患者生存不良的潛在預(yù)后指標(biāo)。但是令人失望的是，從TCGA數(shù)據(jù)庫中得出結(jié)論，eEF2K表達(dá)與GBM患者預(yù)后無關(guān)。eEF2K mRNA的表達(dá)與GBM患者的OS、DSS、PFI預(yù)后無關(guān)。這種無差異性可能基于TCGA中GBM患者的種群、地域性差異以及病例數(shù)過少引起，也許需要更大的樣本量來驗證上述結(jié)論。雖然我們的結(jié)論沒有支持eEF2K表達(dá)與GBM患者預(yù)后有關(guān)，但不排除其可能參與GBM的細(xì)胞生長、增殖、遷移和侵襲的抑制作用。

GSEA分析發(fā)現(xiàn)，eEF2K的表達(dá)與Galpha（s）信號、亨廷頓病、阿爾茲海默病、TP53調(diào)節(jié)代謝基因、線粒體中的電子傳輸鏈、生物氧化反應(yīng)等有關(guān)。因此，我們的研究為理解eEF2K在腫瘤發(fā)病機制中的潛在作用提供了見解，并證明了它作為潛在的神經(jīng)退行性疾病生物標(biāo)志物的用途。這也與以往的研究一致，以往的研究發(fā)現(xiàn)，eEF2K不僅可能參與多種生物學(xué)功能，如細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[5]，還可以調(diào)節(jié)一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病的記憶缺陷，例如AD[19～20]。我們的研究也提示eEF2K與AD、亨廷頓病有關(guān)，可能因為兩者都存在共同癥狀記憶障礙現(xiàn)象，但目前具體作用機制還需要我們進(jìn)一步探討。GBM中最常見的基因突變是EGFR（epidermal growth factor receptor）、PTEN（gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten）、TP53、TERT（telomerase reverse transcriptase）或RB1（Rb gene1）基因等，TP53也被確定為低級別星形細(xì)胞瘤和繼發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的標(biāo)志物[21]。抑制TP53 GOF（gain of function）突變可以抑制GBM的炎癥[22]，而且TP53和PTEN的聯(lián)合缺失導(dǎo)致eEF2K的乳腺癌（breast cancer，BC）加速發(fā)展[22]。有趣的是，在GBM中，TP53突變也與免疫浸潤增加有關(guān)[21]。

在腫瘤微環(huán)境中，免疫系統(tǒng)不僅保護(hù)宿主不受腫瘤發(fā)展的影響，而且還可以通過塑造和選擇免疫原性降低腫瘤逃逸變體來促進(jìn)腫瘤的生長[23]。GBM進(jìn)展過程中受損的血腦屏障允許免疫細(xì)胞從血液進(jìn)入，誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞激活，從而促進(jìn)神經(jīng)炎癥[24]。而在生理條件下，免疫細(xì)胞透過血腦屏障是有限的[25]。我們試圖研究eEF2K與GBM免疫及24種免疫細(xì)胞的浸潤水平關(guān)系，eEF2K的表達(dá)增加與GBM中Tem、NK cells、Tgd、Tcm、T helper cells、Th2 cell浸潤呈正相關(guān)，與Cytotoxic cells、T cells和B cells浸潤呈負(fù)相關(guān)。近年來，免疫治療成為包括GBM腫瘤在內(nèi)的顱內(nèi)腫瘤疾病很有前景的治療方法[26]。目前腫瘤免疫治療的方法包括NK細(xì)胞的免疫療法[25]和T細(xì)胞療法[27]。研究表明，T細(xì)胞活化和浸潤是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵步驟[28]。GBM通過觸發(fā)T細(xì)胞功能障礙來破壞腫瘤免疫反應(yīng)，導(dǎo)致T細(xì)胞老化、耐受、無力和衰竭[29]。先前的研究發(fā)現(xiàn)，Th2細(xì)胞的浸潤與多種腫瘤的免疫抑制和生存不良有關(guān)[30]。Th2介導(dǎo)的免疫抑制降低了保護(hù)性細(xì)胞免疫，并與腫瘤進(jìn)展有關(guān)，在本研究中，eEF2K表達(dá)增加會導(dǎo)致Th2細(xì)胞浸潤增強，提示eEF2K可能有助于介導(dǎo)GBM的免疫逃逸。在GBM患者的腫瘤組織和外周血中增加的Tgd細(xì)胞調(diào)節(jié)GBM的發(fā)展[31]。因此，我們推測eEF2K可能通過調(diào)節(jié)GBM中的免疫浸潤來影響患者的預(yù)后。

雖然這項研究可以為我們對eEF2K與GBM之間的相關(guān)性提供新的見解，但也存在一些局限性。首先，只評估了一個數(shù)據(jù)集，這可能會導(dǎo)致樣本偏差。其次，為了增加研究結(jié)果的可信度，應(yīng)進(jìn)一步擴大樣本量。第三，為了提高臨床應(yīng)用水平，還應(yīng)考慮更多的臨床因素。第四，缺乏體外實驗和活體實驗，我們的結(jié)果還需要進(jìn)一步的實驗驗證。為了進(jìn)一步研究eEF2K在GBM中的作用機制，我們應(yīng)在不久的將來進(jìn)行體內(nèi)外研究實驗。9860FF2B-6653-4F43-81A5-22CFDB094EDF

綜上所述，eEF2K mRNA在GBM中高表達(dá)，本研究雖然沒有揭示eEF2K在GBM中的預(yù)后價值。但我們的研究結(jié)果表明，eEF2K可能通過促進(jìn)多種免疫細(xì)胞的浸潤，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的腫瘤微環(huán)境，抑制獲得性免疫，從而發(fā)揮致癌作用。本研究表明eEF2K可作為GBM診斷的潛在生物標(biāo)志物，并強調(diào)它是一個潛在的免疫治療靶點。參考文獻(xiàn)[1] BRANDAO M，SIMON T，CRITCHLEY G，et al.Astrocytes，the rising stars of the glioblastoma microenvironment[J].Glia，2019，67（5）：779-790.

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（收稿日期：2021-11-03修回日期：2022-03-17）

（編輯：梁明佩）9860FF2B-6653-4F43-81A5-22CFDB094EDF