稽留流產(chǎn)患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)及意義

李雪蓮　楊芬紅　戴婉波

【摘要】 目的 探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在稽留流產(chǎn)患者外周血中的表達(dá)情況。

方法 30例稽留流產(chǎn)患者作為觀察組， 30例自愿進(jìn)行人工流產(chǎn)的健康早孕者作為對(duì)照組， 利用流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測(cè)兩組研究對(duì)象外周血中CD4+CD25+Treg表達(dá)情況， 計(jì)算得出CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例， 并進(jìn)行組間比較。結(jié)果 對(duì)照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（5.31±2.61）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（4.07±1.67）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對(duì)照組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 CD4+

CD25+Treg降低可能參與了稽留流產(chǎn)發(fā)生過程， 而其水平在妊娠早期表達(dá)明顯升高， 可能是與正常妊娠的維持以及母胎免疫耐受調(diào)節(jié)等有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 稽留流產(chǎn)；外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；表達(dá)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.25.060

稽留流產(chǎn)是婦產(chǎn)科常見病和多發(fā)病之一， 目前發(fā)病原因不明。母胎界面的免疫失衡是較為公認(rèn)的發(fā)病原因。而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell， Treg） 是調(diào)控母胎界面局部免疫耐受形成的重要因素， 對(duì)正常免疫耐受和妊娠的維持起重要作用。Treg為CD4+CD25+T細(xì)胞， 具有免疫負(fù)性調(diào)節(jié)功能。研究發(fā)現(xiàn)， 在小鼠孕早期轉(zhuǎn)移體外擴(kuò)增的Treg細(xì)胞可保護(hù)胚胎避免自然流產(chǎn)發(fā)生。既往研究資料顯示， CD4+CD25+Treg細(xì)胞與母體對(duì)胎兒的耐受程度有一定影響[1， 2]。為了研究CD4+CD25+Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)發(fā)生的過程中是否發(fā)揮作用， 本研究將檢測(cè)CD4+CD25+Treg在稽留流產(chǎn)患者和健康早孕者外周血中的表達(dá)情況， 從而初步探討其在稽留流產(chǎn)中的作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2016年12月～2017年3月本院婦科門診收治的稽留流產(chǎn)患者30例作為觀察組， 年齡20～34歲， 平均年齡（27.30±4.21）歲， 孕周6～10周；并選擇同期在本院自愿進(jìn)行人工流產(chǎn)的健康早孕者30例作為對(duì)照組， 年齡19～34歲， 平均年齡（26.07±4.07）歲， 孕周5～10周。兩組研究對(duì)象年齡、孕周等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 檢測(cè)方法 選用美國(guó)BD公司C6型流式細(xì)胞儀、日本久保田4000型臺(tái)式離心機(jī)、美國(guó)Peprotech公司的PMA（10X）、Ionomycin（10X）、Brefeldin A（10X）Fixation/Permeabilization

Concentrate、Fixation/Permeabilization Diluent、Permeabilization Buffer工作液（1X）、相關(guān)熒光標(biāo)記流式抗體Anti human CD4-FITC， Anti-Human CD25 PE-Cyanine7及同型對(duì)照抗體等完成檢測(cè)。具體檢測(cè)步驟：所有受試者均抽取2.0 ml外周靜脈血， 并且給予20 μl/ml劑量的肝素抗凝處理后， 在6 h內(nèi)完成檢驗(yàn)。CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)并計(jì)算得出結(jié)果。所有操作步驟均需要嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行， 并且保證在無菌環(huán)境中完成。

1. 3 觀察指標(biāo) 對(duì)比兩組外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

對(duì)照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（5.31±2.61）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（4.07±1.67）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對(duì)照組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.19， P<0.05）。

3 討論

稽留流產(chǎn)是早期自然流產(chǎn)的一種， 在臨床上常常發(fā)生。臨床主要表現(xiàn)為停經(jīng)、陰道少量流血， B超提示未見心管波動(dòng)， 胚胎發(fā)育小于孕周等影像學(xué)表現(xiàn)。目前， 其發(fā)病的機(jī)制尚未完全明確。隨著研究的深入， 越來越多的證據(jù)表明， 母胎免疫失調(diào)在早期自然流產(chǎn)中發(fā)揮著重要作用。但是目前尚無關(guān)于Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)中的作用研究。

現(xiàn)代生殖免疫學(xué)研究指出， 母胎免疫耐受與正常妊娠維持具有密切相關(guān)性， 如果母體免疫耐受機(jī)制平衡被打破， 則會(huì)導(dǎo)致病理性妊娠， 例如流產(chǎn)等的發(fā)生。也有學(xué)者指出， 細(xì)胞因子在妊娠成功過程中具有重要影響[3]。Treg細(xì)胞是近年來發(fā)現(xiàn)的一種T細(xì)胞， 是具有調(diào)節(jié)功能的成熟T細(xì)胞亞群， 最早發(fā)現(xiàn)于腫瘤疾病和免疫性疾病中。隨著臨床研究的深入和分子生物學(xué)的進(jìn)展， Treg細(xì)胞在機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)維持、移植耐受、腫瘤免疫、過敏反應(yīng)及微生物感染等方面的調(diào)節(jié)功能逐漸被證實(shí)。Treg細(xì)胞對(duì)于外周血中T細(xì)胞的穩(wěn)定， 有著一定的維持作用， 在免疫耐受的發(fā)生過程中有著重要的作用?，F(xiàn)階段的研究發(fā)現(xiàn)， CD4+CD25+Treg具有免疫抑制調(diào)節(jié)功能， 與母胎免疫耐受的形成具有相關(guān)性[4， 5]。有研究發(fā)現(xiàn)Treg數(shù)量的異常可能參與了自然流產(chǎn)的發(fā)生[6-9]。本研究結(jié)果顯示， 對(duì)照組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（5.31±2.61）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例為（4.07±1.67）%， 觀察組CD4+CD25+Treg細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞的比例明顯低于對(duì)照組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 這與其他相關(guān)文獻(xiàn)研究結(jié)果相符[10]， 說明CD4+CD25+Treg水平與稽留流產(chǎn)的發(fā)生有一定聯(lián)系， 其水平降低可能是導(dǎo)致稽留流產(chǎn)發(fā)生的原因。endprint

綜上所述， CD4+CD25+Treg細(xì)胞在稽留流產(chǎn)、健康早孕孕婦之間的表達(dá)存在明顯差異， CD4+CD25+Treg細(xì)胞降低可能參與了稽留流產(chǎn)發(fā)生過程， 而其水平在妊娠早期表達(dá)升高， 可能是與正常妊娠的維持以及母胎免疫耐受調(diào)節(jié)等有關(guān)， 可在臨床上對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)， 為稽留流產(chǎn)的診斷和預(yù)防提供指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

[1] 李翠， 施幼豪， 吳江南， 等. 不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)患者免疫治療前后外周血CD4+CD25+CD127lowT細(xì)胞百分率的分析. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)， 2017， 32（1）：14-17.

[2] 曾珣， 李尚為. 不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血CD4+ CD25highCD127low/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)頻率和功能研究//第十屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)， 2015：103.

[3] 李彬， 李長(zhǎng)忠. 外周血及蛻膜組織中CD4加CD25加調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系研究. 河北醫(yī)學(xué)， 2016， 22（7）：1065-1067.

[4] 趙花， 韋相才， 秦衛(wèi)兵， 等. 原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者外周血T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞表型研究. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2013， 29（16）： 2637-2639.

[5] 殷紅巖， 李婷， 郭蕊， 等. 外周血及蛻膜組織CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系研究. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2016（11）：82-84.

[6] 曹衛(wèi)平， 錢秋菊， 汪科換， 等. 稽留流產(chǎn)患者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)及意義. 中國(guó)婦幼保健， 2010， 25（27）：3963-3965.

[7] 楊金英， 李大金， 金莉萍， 等. 反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Foxp3的表達(dá). 現(xiàn)代免疫學(xué)， 2008， 28（2）：101-103.

[8] 夏欣一， 楊濱， 熊婷， 等. 反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血CD4+ CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的檢測(cè). 中華男科學(xué)雜志， 2008， 14（12）： 1106-1108.

[9] 杜久偉， 朱瑞， 王飛， 等. 原因不明反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血TLR2、TLR4表達(dá)及CD4+CD25+Treg細(xì)胞的變化. 臨床檢驗(yàn)雜志， 2013， 31（5）：360-362.

[10] 樓向明， 劉文華， 費(fèi)小陽. 外周血及蛻膜組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例和炎癥因子原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系研究. 中國(guó)性科學(xué)， 2016， 25（6）：118-120.

[收稿日期：2017-05-15]endprint