三種不同免疫檢驗方式在HIV 檢測中的可靠性觀察

羅純生，劉 靜

（佳木斯市中心血站檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002）

艾滋?。ˋIDS）是一種臨床常見的傳染性疾病，是由人類免疫缺陷病毒（HIV）引起的慢性疾病，其主要傳染途徑為血液傳播、性傳播以及母嬰傳播[1，2]。該病患者機體免疫功能會遭到破壞，且機體感染疾病或出現(xiàn)其他并發(fā)癥的發(fā)生率較高，同時具有較高的致死率[3]。目前尚無治療艾滋病的特效藥物和手段，臨床治療難度較大[4]。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計[5]，近年來艾滋病發(fā)生率不斷上升，嚴重危害人類健康安全。因此，早診斷、早治療是降低該病病死率，改善預(yù)后的關(guān)鍵。艾滋病具有較長的潛伏期，早期癥狀容易被忽視，早期篩查和診斷至關(guān)重要[6]。隨著對艾滋病發(fā)病機制的不斷深入研究，臨床可通過多種檢測方法對HIV 進行檢測，但是不同檢測方法的結(jié)果存在差異[7]。本研究結(jié)合2016 年1 月-2021 年4 月我站HIV陽性血清資料，比較ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢驗方式在HIV 檢測中的可靠性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年1 月-2021 年4 月佳木斯市中心血站采集血液中篩查出的50 份血清為觀察組，并選取同期未感染HIV 無償獻血者血清30份為對照組。觀察組男30 例，女20 例；年齡21～55歲，平均年齡（36.58±1.20）歲；對照組男18 例，女12例；年齡22～56 歲，平均年齡（36.80±1.33）歲，兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），研究可行，研究對象知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標(biāo)準 納入標(biāo)準：①觀察組所有患者均符合臨床艾滋病毒攜帶診斷標(biāo)準[8]；②患者均經(jīng)疾病預(yù)防控制中心使用免疫印跡法（WB）檢測確診[9]。排除標(biāo)準：①合并結(jié)核等其他傳染性疾病者；②合并惡性器質(zhì)性病變者；③隨訪資料不完善者。

1.3 方法 分別采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法、乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、雙抗原夾心和雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法對兩組血清樣本進行抗HIV 檢測。觀察組50 份血樣標(biāo)準，將其中10 份血清設(shè)為參照組，其余40 份血清分別予以ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法進行檢測，且所有的檢測均由同一檢測小組人員完成。同時所有檢測人員嚴格做好相關(guān)防護，整個檢測過程必須嚴格執(zhí)行艾滋病操作規(guī)范[10]。

1.3.1 ELISA 雙抗原夾心法 采用澳斯邦哈米爾頓費米自動化酶免分析儀檢測系統(tǒng)，應(yīng)用HIV 抗體診斷試劑盒（英科新創(chuàng)＜廈門＞科技股份有限公司），所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.2 乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗 試紙由艾博生物醫(yī)藥（杭州）有限公司提供，將25 μl 血清加入試紙，隨后加入1 滴緩沖液（約40 μl），結(jié)果在15～20 min內(nèi)判讀，肉眼觀察變化情況，如果試紙出現(xiàn)兩條紅線則判定為陽性，若試紙為一條紅線判定為陰性。

1.3.3 ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法 采用澳斯邦哈米爾頓費米自動化酶免分析儀檢測系統(tǒng)，應(yīng)用HIV 抗體診斷試劑盒（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司），所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 實驗樣本 室間質(zhì)量評價血清為國家臨床檢驗中心2021 年第一批次下發(fā)免疫項目樣本，2 NCU/ml、4 NCU/ml 質(zhì)控品為北京康徹斯坦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.5 觀察指標(biāo) 觀察各種檢測方法血清陽性檢測率、HIV 檢測的靈敏度、特異度及準確率。靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)＋假陰性例數(shù)）×100%；特異性=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)＋假陽性例數(shù)）×100%[11]。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計軟件包SPSS 21.0 對本研究的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料采用（）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；P＜0.05 說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組不同檢測方法陽性檢出率比較 ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測2 NCU/ml、室間質(zhì)量血清、4 NCU/ml 的陽性檢出率均高于對照組，且ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法陽性檢出率高于乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心法（P＜0.05），見表1。

表1 各組不同檢測方法陽性檢出率比較[n（%）]

2.2 不同檢測方法檢測HIV 的靈敏度、特異度、準確率比較 ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 靈敏度、準確率均高于乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心法（P＜0.05），見表2。

表2 不同檢測方法檢測HIV 的靈敏度、特異度、準確率比較（%）

3 討論

艾滋病目前已經(jīng)發(fā)展成為社會公共衛(wèi)生問題，由于尚無有效治療方法，病死率較高[12]。艾滋病患者病理性改變較為復(fù)雜，且機體的所有系統(tǒng)、器官均會遭受病毒的侵害[13]。人體一但感染HIV，病毒會破壞體內(nèi)T 淋巴細胞，溶解CD-T 淋巴細胞。隨著病情的不斷發(fā)展，機體內(nèi)正常細胞不斷死亡，嚴重影響機體的正常功能和健康[14，15]。同時隨著淋巴細胞的損傷、溶解，人體免疫系統(tǒng)嚴重受損，感染風(fēng)險升高。研究顯示[16]，導(dǎo)致艾滋病發(fā)生率持續(xù)增加的 主要影響因素是不安全輸血行為、不安全性行為等。為了預(yù)防艾滋病的發(fā)生，降低其對人類健康安全的威脅，應(yīng)重視艾滋病的篩查、診斷。因此，提高艾滋病診斷準確性是重要條件。目前，臨床通過HIV 抗原抗體檢測，可對人體是否攜帶HIV 病毒進行判斷[17]。但是臨床檢測方法較多，不同檢測手段具有各自的優(yōu)缺點，且不同檢測方法會受到檢測環(huán)境、操作技術(shù)等因素的影響，導(dǎo)致不同檢測方法的可靠性存在差異，且目前對已有檢測方法的優(yōu)略勢更是無統(tǒng)一標(biāo)準[18，19]。

本研究結(jié)果顯示，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法2 NCU/ml、室間質(zhì)評血清、4 NCU/ml 的陽性檢出率（100.00%、100.00%、100.00%）、乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗（92.50%、90.00%、90.00%）、ELISA雙抗原夾心法（85.00%、80.00%、80.00%）均高于對照組（0、3.33%、6.67%），且ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法陽性檢出率高于乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心法（P＜0.05），提示ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗、ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 均具有較高的陽性檢出率，但是相對而言ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢出陽性率最高。自愿無償獻血者采用ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測可實現(xiàn)HIV血清陽性率為0，而其他兩種檢測方式不能達到這樣的效果，該結(jié)論與梁少聰[20]的研究結(jié)果一致。因此，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法可作為檢測HIV 的有效方法，具有相對更優(yōu)的檢測價值。分析認為可能是由于ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法操作簡單，試劑相對穩(wěn)定，檢測限制少，從而一定程度提高了檢測準確性[21]。同時本研究顯示，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 靈敏度為100.00%、特異度為95.00%、準確率為92.50%，高于乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗的90.00%、87.50%、85.00%、ELISA 雙抗原夾心法的88.10%、76.85%、85.70%（P＜0.05），表明ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測HIV 診斷準率最高，具有較高的診斷敏感度和特異度，可為HIV 診斷提供可靠的參考依據(jù)。分析原因認為ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法檢測時間較短，在抗體與酶發(fā)生結(jié)合時，不會造成抗體免疫性反應(yīng)的特異性變化，也不會影響酶的活性，從而會發(fā)生相應(yīng)的水解呈色反應(yīng)，可有效避免正常受檢者陽性檢出，具有相對更優(yōu)的整體效果。

綜上所述，在HIV 的檢測中，ELISA 雙抗原夾心法、乳膠顆粒標(biāo)記免疫層析試驗與ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法這3 種檢測方法均具有一定的價值，但從HIV 陽性檢出率、準確率、靈敏度以及特異度方面比較，ELISA 雙抗原夾心和雙抗體夾心法具有更好的準確度，值得臨床加以重視。