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    電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和海馬突觸結(jié)構(gòu)與相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響

    2022-06-09 14:09:44王婧吉杜坤銳朱國(guó)旗
    關(guān)鍵詞:神庭百會(huì)西坦

    王婧吉,瞿 艷,王 娟,杜坤銳,陳 赟,朱國(guó)旗

    (1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院,安徽 合肥 230061;2.安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院針灸臨床研究所,安徽 合肥 230061;3.安徽中醫(yī)藥大學(xué)研究生院,安徽 合肥 230012;4.安徽中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,安徽 合肥 230012)

    血管性癡呆(vascular dementia,VD)是第二大常見(jiàn)性癡呆[1],僅次于阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)。據(jù)統(tǒng)計(jì),北美與歐洲15%~20%癡呆患者是腦血管病變引起的,而亞洲該類癡呆患者占比30%[2]。VD是由腦血管病變引起,繼發(fā)神經(jīng)細(xì)胞功能與突觸功能的異常[3]。因此,晚期VD患者在腦功能、腦病理變化等方面與AD有較多的相似性[4],均與海馬神經(jīng)細(xì)胞丟失和海馬突觸可塑性異常密切相關(guān)[5]。海馬突觸結(jié)構(gòu)由突觸前膜、間隙和突觸后膜組成。突觸后膜上分布有α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸受體(α-amino-3-hydroxy 5-methyl-4-isoxazole-propionic acid receptor,AMPAR)、N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)以及突觸后致密蛋白95(postsynaptic density 95,PSD95)等蛋白,在維系突觸后膜結(jié)構(gòu)和發(fā)揮功能過(guò)程中具有重要的作用[6]。因此,從突觸角度探討VD的發(fā)生機(jī)制及尋求干預(yù)措施具有重要意義。

    “百會(huì)”“神庭”穴作為督脈腧穴,具有升陽(yáng)補(bǔ)氣、填髓安神之功效,是針灸臨床中防治認(rèn)知功能障礙等神經(jīng)系統(tǒng)疾病常用選穴。多項(xiàng)研究[7-9]表明,電針“百會(huì)”“神庭”可顯著改善認(rèn)知功能障礙患者的臨床癥狀,其作用機(jī)制可能與促進(jìn)血管新生、改善系統(tǒng)性炎癥、調(diào)控學(xué)習(xí)記憶相關(guān)神經(jīng)肽物質(zhì)等相關(guān)。然而,電針“百會(huì)”“神庭”是否能夠影響VD大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)及具體的機(jī)制仍有待進(jìn)一步探索。本研究選用改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型[10],進(jìn)一步從突觸結(jié)構(gòu)與突觸蛋白表達(dá)水平角度探討電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)與記憶的作用及其機(jī)制,為電針治療VD提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

    1 材料

    1.1 動(dòng)物與分組 SPF級(jí)健康雄性SD大鼠35只(3月齡),體質(zhì)量(200±20)g,由安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(皖)2011-0002。動(dòng)物飼養(yǎng)在室溫20~25 ℃、相對(duì)濕度40%~75%的環(huán)境中。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為假手術(shù)組、模型組、電針?lè)茄ㄎ唤M、電針穴位組和奧拉西坦組,每組7只。實(shí)驗(yàn)手術(shù)中未出現(xiàn)大鼠死亡情況。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,動(dòng)物經(jīng)過(guò)量戊巴比妥鈉注射安樂(lè)死,4只動(dòng)物用于Western blot檢測(cè),3只動(dòng)物用于透射電子顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物各項(xiàng)處理方法均按照《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》及動(dòng)物倫理相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

    1.2 主要試劑及儀器 奧拉西坦(批號(hào) 20030301):中國(guó)湖南健朗藥業(yè)有限責(zé)任公司;β-actin抗體(批號(hào) 3700、1∶1 000)、GluA1抗體(批號(hào) 13185、1∶1 000)、GluN2B抗體(批號(hào) 14544、1∶1 000)、p-GluN2B(批號(hào) 4209、1∶1 000):美國(guó)Cell Signaling Technology公司;SDZ-Ⅱ型電子針療儀:蘇州華佗醫(yī)療器械有限公司;一次性不銹鋼針灸針(0.25 mm×25 mm):蘇州華佗醫(yī)療器械有限公司;電泳儀:美國(guó)Bio-Rad公司;165-8000型電泳槽:美國(guó)Bio-Rad公司;UC-7切片機(jī):德國(guó)LEICA;7700型透射電子顯微鏡:日本HITACHI。

    2 方法

    2.1 改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型及干預(yù) 模型組、電針?lè)茄ㄎ唤M、電針穴位組和奧拉西坦組大鼠采用改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型[10]:2%戊巴比妥鈉(2.3 mL/kg)腹腔注射麻醉后,將其仰臥固定于手術(shù)板上。頸部皮膚剃毛后用75%乙醇棉球進(jìn)行常規(guī)無(wú)菌操作。沿頸部正中線切2 cm的切口,鈍性分離皮下組織,于肌肉間隙找到左頸總動(dòng)脈,分離迷走神經(jīng),用4-0手術(shù)線永久結(jié)扎后縫合皮下組織及皮膚。放回鼠籠休息并注意保溫,待完全蘇醒后轉(zhuǎn)移到鼠房飼養(yǎng)。1周后進(jìn)行右側(cè)頸總動(dòng)脈分離結(jié)扎,方法同前。假手術(shù)組大鼠也采用相同的手術(shù)操作,但不結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈。

    術(shù)后第2天,電針穴位組大鼠在2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后將其俯臥位固定在操作臺(tái)上,根據(jù)《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[11]選取“百會(huì)”“神庭”,其中“百會(huì)”位于頂骨正中,“神庭”位于前正中線上,在額頂骨縫交界線前方處。穴位常規(guī)無(wú)菌操作后,選用一次性針灸針進(jìn)行針刺治療,“百會(huì)”穴向后斜刺2 mm,“神庭”穴向上斜刺2 mm,針刺后選用SDZ-Ⅱ型電子針療儀,疏密波,強(qiáng)度0.5 mA,頻率1 Hz/20 Hz。每次電針干預(yù)30 min,每日1次,共治療14 d。電針?lè)茄ㄎ唤M在取兩個(gè)固定非穴點(diǎn)(穴位旁開(kāi)0.2寸),電針干預(yù)30 min。假手術(shù)組和模型組大鼠分別給予相同時(shí)間、相同水平的抓握刺激,不進(jìn)行電針干預(yù)。奧拉西坦組大鼠予以?shī)W拉西坦鹽水溶液50 mg/kg腹腔注射,每日1次,共治療14 d。

    2.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

    2.2.1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) Morris水迷宮評(píng)估空間學(xué)習(xí)和記憶功能,水迷宮由一個(gè)直徑為1.6 m的黑色圓形水池組成,水溫控制在(25±2)℃。隱藏在水下的平臺(tái)(直徑為12 cm,高20 cm)位于第四象限的中心。使用連接到固定在水迷宮中心上方的視頻跟蹤系統(tǒng)獲取數(shù)據(jù)。定位巡航實(shí)驗(yàn)為期4 d。每只大鼠從任意象限面向池壁被放入水中,讓其在60 s內(nèi)找到隱藏的平臺(tái)。如果大鼠在60 s內(nèi)未能找到平臺(tái),則由實(shí)驗(yàn)者引導(dǎo)至平臺(tái)并記錄逃離潛伏期為60 s??臻g探索實(shí)驗(yàn)在定位巡航結(jié)束后的第5天,用于測(cè)試大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)以及目標(biāo)象限停留的時(shí)間。行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)束后,動(dòng)物經(jīng)過(guò)量戊巴比妥鈉麻醉安樂(lè)死,并取海馬組織。

    2.2.2 Western blot檢測(cè)海馬突觸相關(guān)蛋白水平 大鼠海馬組織加細(xì)胞裂解液,4 ℃冰上研磨,4 ℃、12 000 r/min離心15 min,取上清。1∶1加入蛋白上樣緩沖液,100 ℃水浴加熱10 min,以充分變性蛋白,經(jīng)SDS-PAGE電泳,轉(zhuǎn)膜,漂洗5 min,5%脫脂奶粉室溫封閉2 h。分別加入PSD-95(1∶1 000)、GluA1(AMPA receptor subunit GluR1)(1∶1 000)、GluN2B(NMDA Receptor 2B)(1∶1 000)和磷酸化GluN2B(1∶500)抗體,緩慢搖動(dòng)4 ℃孵育過(guò)夜。加入洗滌液TBST(10 min×3)。加入二抗(1∶10 000),室溫孵育2 h。加入洗滌液TBST,10 min×3次。采用化學(xué)發(fā)光試劑顯影成像。使用Image J軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析,計(jì)算條帶的光密度值。

    2.2.3 透射電子顯微鏡觀察海馬CA1區(qū)突觸數(shù)量 取新鮮海馬CA1區(qū)組織(1 mm×1 mm×1 mm),置2.5%戊二醛液中固定6 h,將標(biāo)本用0.1 mmol/L磷酸緩沖液洗3次后,鋨酸固定2 h,用上述緩沖液洗3次后,逐級(jí)梯度乙醇、丙酮脫水,環(huán)氧丙烷過(guò)渡;然后用環(huán)氧樹(shù)脂包埋,60 ℃烤箱聚合48 h,超薄切片機(jī)切片,厚度70 nm;醋酸鈾,硝酸鉛液染色,用透射電子顯微鏡觀察拍照。

    3 結(jié)果

    3.1 電針對(duì)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型大鼠學(xué)習(xí)和記憶功能的影響 水迷宮實(shí)驗(yàn)分為學(xué)習(xí)和測(cè)試兩個(gè)時(shí)期。各組大鼠在1~4 d學(xué)習(xí)期,逃避潛伏時(shí)間顯著縮短,與假手術(shù)組比較,模型組大鼠第4天逃避潛伏時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.05);與模型組比較,電針穴位組和奧拉西坦組第4天逃避潛伏時(shí)間顯著縮短(P<0.05)。與假手術(shù)組比較,測(cè)試期模型組大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)減少,目標(biāo)象限停留時(shí)間顯著縮短(P<0.05)。與模型組比較,電針穴位組和奧拉西坦組大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)增加,目標(biāo)象限停留時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.05)。電針?lè)茄ㄎ唤M大鼠學(xué)習(xí)期逃避潛伏期與測(cè)試期跨越平臺(tái)次數(shù)和目標(biāo)象限停留時(shí)間與模型組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

    3.2 電針對(duì)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型大鼠腦質(zhì)量的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦質(zhì)量顯著增加(P<0.05);與模型組比較,電針穴位組和奧拉西坦組大鼠腦質(zhì)量顯著降低(P<0.05),而電針?lè)茄ㄎ唤M大鼠腦質(zhì)量無(wú)顯著變化(P>0.05);與奧拉西坦組比較,電針穴位組大鼠腦質(zhì)量顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

    注:A.假手術(shù)組;B.模型組;C.電針?lè)茄ńM;D.電針穴位組;E.奧拉西坦組;與假手術(shù)組比較,?P<0.05;與模型組比較,#P<0.05

    3.3 電針對(duì)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型大鼠大腦海馬CA1區(qū)突觸數(shù)量的影響 假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)突觸數(shù)量豐富,而模型組大鼠和電針?lè)茄ㄎ唤M大鼠海馬CA1區(qū)突觸數(shù)量明顯下降;而電針穴位組大鼠海馬CA1區(qū)突觸密度增加。見(jiàn)圖3。

    注:A.假手術(shù)組;B.模型組;C.電針?lè)茄ńM;D.電針穴位組

    3.4 電針對(duì)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型大鼠大腦海馬突觸蛋白PSD95、GluA1和GluN2B表達(dá)水平的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬PSD95、GluA1、GluN2B和p-GluN2B蛋白表達(dá)水平顯著下降(P<0.05)。與模型組比較,電針穴位組PSD95、GluA1、GluN2B和p-GluN2B蛋白表達(dá)水平顯著上升(P<0.05),電針?lè)茄ㄎ唤MPSD95、GluA1、GluN2B和p-GluN2B蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖4。

    4 討論

    VD屬于中醫(yī)“呆證”范疇,其病位在腦,病機(jī)為髓海不足、清竅閉阻、神機(jī)失用?!鞍贂?huì)”屬督脈,位于巔頂,是督脈、手少陽(yáng)三焦經(jīng)、足太陽(yáng)膀胱經(jīng)、足少陽(yáng)膽經(jīng)和足厥陰肝經(jīng)的交會(huì)穴,能通達(dá)陰陽(yáng)脈絡(luò),連貫周身經(jīng)穴,可振復(fù)陽(yáng)氣、疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)一身之陰陽(yáng)之氣,故“百會(huì)”為治療精神情志類疾病的要穴?!吧裢ァ币矊儆诙矫},為神志所在,其功在神,為督脈、陽(yáng)明經(jīng)、足太陽(yáng)交匯之穴。《針灸甲乙經(jīng)》:“神者,天部之氣也;庭者,庭院也?!爆F(xiàn)代臨床研究也表明,“百會(huì)”“神庭”穴是調(diào)節(jié)大腦功能的要穴,具有較為明顯的安神定志、調(diào)節(jié)情志、醒腦開(kāi)竅的功效,可有效改善認(rèn)知功能,是極具研究?jī)r(jià)值的穴組[8-9]。本研究選擇“百會(huì)”“神庭”二穴,并施以電針,評(píng)價(jià)電針對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)和記憶功能的影響。

    注:A.假手術(shù)組;B.模型組;C.電針?lè)茄ńM;D.電針穴位組;與假手術(shù)組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05

    改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型是一種經(jīng)典的制作VD模型的方法,該模型廣泛應(yīng)用于VD發(fā)病機(jī)制的研究和篩選相關(guān)的治療方法[12]。故本研究選擇改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎大鼠模型評(píng)價(jià)電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)和記憶的作用及探究其機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn),改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎能延長(zhǎng)大鼠訓(xùn)練期平臺(tái)逃避潛伏期,并縮短大鼠測(cè)試期平臺(tái)象限穿越次數(shù)和平臺(tái)象限停留時(shí)間。該結(jié)果提示,改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎能造成大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶功能的下降。本研究選擇奧拉西坦作為陽(yáng)性對(duì)照藥[13],結(jié)果表明,奧拉西坦能改善模型復(fù)制造成的學(xué)習(xí)和記憶能力的損傷,進(jìn)一步證明該研究模型的成功。模型組大鼠經(jīng)電針“百會(huì)”“神庭”治療后,空間學(xué)習(xí)和記憶功能都得到顯著改善,而電針?lè)茄ńM大鼠學(xué)習(xí)和記憶功能未能得到改善。值得注意的是,本研究選擇改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎大鼠模型,雙側(cè)頸動(dòng)脈的結(jié)扎間隔1周的時(shí)間,成功地避免了傳統(tǒng)雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎復(fù)制模型引起動(dòng)物的高死亡率[10]。因此,該模型是一種較好的VD模型。

    本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎后,大鼠腦組織出現(xiàn)水腫等現(xiàn)象,且大腦的質(zhì)量顯著增加,這和以往研究結(jié)果[14]相一致。電針“百會(huì)”“神庭”能阻止雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎造成的大鼠腦質(zhì)量的增加,而電針?lè)茄ńM則不具備這種功效。此外,與奧拉西坦組比較,電針“百會(huì)”“神庭”也展示了更優(yōu)的效果,該結(jié)果也提示電針和奧拉西坦發(fā)揮改善VD學(xué)習(xí)和記憶功能的機(jī)制不完全相同。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,奧拉西坦主要促進(jìn)磷酰膽堿和磷酰乙醇胺合成,提高大腦中ATP與ADP的比值,使大腦中蛋白質(zhì)和核酸的合成增加,從而改善AD和記憶障礙患者的記憶和學(xué)習(xí)功能[15]。而電針可通過(guò)多種機(jī)制改善學(xué)習(xí)和記憶功能,如抗炎、抗氧化和阻止細(xì)胞凋亡等[16]。

    海馬是大腦內(nèi)重要的腦區(qū),與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)[17-18],雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎能導(dǎo)致海馬結(jié)構(gòu)的萎縮及功能的減弱。神經(jīng)細(xì)胞間的信息傳遞主要通過(guò)突觸來(lái)完成,而突觸的損傷意味著神經(jīng)細(xì)胞間信息傳遞的異常。突觸損傷發(fā)生在VD發(fā)病的晚期,且與認(rèn)知功能障礙密切相關(guān)[5]。對(duì)VD發(fā)病中突觸可塑性的研究有利于進(jìn)一步闡明其發(fā)病機(jī)制。本研究重點(diǎn)觀察海馬CA1突觸的結(jié)構(gòu)以及突觸相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,來(lái)探究電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)海馬突觸結(jié)構(gòu)的影響。透射電子顯微鏡結(jié)果顯示,模型組大鼠海馬CA1區(qū)突觸結(jié)構(gòu)的數(shù)量顯著減少,電針“百會(huì)”“神庭”能逆轉(zhuǎn)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型造成的突觸損傷,而電針?lè)茄ú痪邆淠孓D(zhuǎn)雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎造成的突觸損傷的功效。該結(jié)果表明,電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎造成的突觸結(jié)構(gòu)損傷確有改善效應(yīng),同時(shí)也說(shuō)明穴位的特異性作用。

    為進(jìn)一步研究電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型大鼠海馬突觸損傷修復(fù)的機(jī)制,本研究選擇性檢測(cè)了突觸后膜蛋白PSD-95及突觸受體蛋白的表達(dá)水平。突觸后致密物是位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸后膜的特殊結(jié)構(gòu),是突觸后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和整合的關(guān)鍵物質(zhì)。根據(jù)分子質(zhì)量不同,可將其分為PSD-95和PSD-93。海馬CA1區(qū)突觸后膜廣泛分布PSD-95。因此,通過(guò)檢測(cè)PSD-95的表達(dá)水平可進(jìn)一步確證突觸結(jié)構(gòu)的變化。Western blot檢測(cè)結(jié)果表明,模型組大鼠海馬PSD-95表達(dá)水平顯著下降,電針“百會(huì)”“神庭”能顯著提升PSD-95表達(dá)水平,而電針?lè)茄ㄎ晃茨芴嵘摰鞍椎谋磉_(dá)水平,該結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型造成的突觸損傷具有改善作用。

    突觸后膜主要的膜受體包括AMPAR和NMDAR,而GluA1是AMPAR的主要亞型,負(fù)責(zé)海馬突觸的基礎(chǔ)傳遞[19]。NMDAR由NR1、N2A和N2B亞基構(gòu)成,參與突觸可塑性的調(diào)控。本研究中,筆者檢測(cè)了GluA1的表達(dá)水平,結(jié)果顯示模型組大鼠海馬GluA1的表達(dá)水平顯著下降,而電針能改善改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎造成的GluA1下降。此外,筆者檢測(cè)了各組大鼠海馬GluN2B和磷酸化GluN2B的表達(dá)水平變化。磷酸化GluN2B是一種活化的GluN2B,參與NMDAR對(duì)Ca2+的調(diào)控[20]。因此,磷酸化GluN2B是NMDAR活性的亞基。模型組大鼠海馬GluN2B和磷酸化GluN2B的表達(dá)水平均下降,而電針“百會(huì)”“神庭”促進(jìn)GluN2B的表達(dá)及GluN2B的磷酸化。該結(jié)果也提示改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型動(dòng)物海馬突觸可塑性的損傷及電針“百會(huì)”“神庭”對(duì)其的逆轉(zhuǎn)作用。

    總之,電針“百會(huì)”“神庭”可能通過(guò)調(diào)節(jié)突觸結(jié)構(gòu)改善VD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能,其分子機(jī)制可能與增加突觸蛋白PSD95、GluA1和GluN2B的表達(dá)水平有關(guān)。海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(long-term potentiation,LTP)是學(xué)習(xí)記憶重要的模型,而LTP的誘導(dǎo)和維持與AMPAR和NMDAR的功能密切相關(guān)[21],本研究未能用電生理的方法來(lái)評(píng)價(jià)改良型雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎模型和電針對(duì)LTP誘導(dǎo)的影響,后期課題組將進(jìn)一步展開(kāi)該方面的研究。此外,Arc等蛋白參與LTP的維持,后期研究應(yīng)該更多聚焦NMDAR的下游信號(hào)通路的變化,進(jìn)一步闡明電針“百會(huì)”“神庭”的作用機(jī)制。

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