血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

熊永高 彭麗紅 張勇科 李林株

廣東醫(yī)科大學(xué)附屬佛山高明醫(yī)院，廣東 佛山 528500

研究表明，超過(guò)80%的前列腺癌患者伴有轉(zhuǎn)移[1］。前列腺癌患者是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，對(duì)治療方案的選擇和患者五年生存率均至關(guān)重要。長(zhǎng)期以來(lái)，研究者對(duì)癌癥轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)因子關(guān)注較多。研究表明，胃癌根治術(shù)后預(yù)后不良組的患者血清膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因1（glioma-associated oncogene 1，Gli1）水平高于預(yù)后良好組，其水平高低對(duì)預(yù)測(cè)胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有重要參考價(jià)值[2］；前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）升高，其水平可作為總生存率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[3］。研究證實(shí)，與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的Hh-Gli1 信號(hào)通路中，Gli1 靶基因研究涉及與血管生成相關(guān)的VEGF[4-6］?；谏鲜鲅芯?，本研究通過(guò)檢測(cè)前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平，分別比較低Gli1 組和高Gli1 組、低VEGF 組和高VEGF 組患者的病理特征分布差異，比較轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移患者兩個(gè)指標(biāo)差異，并探討兩個(gè)指標(biāo)與前列腺癌轉(zhuǎn)移可能存在的相關(guān)性，利用ROC 曲線(xiàn)評(píng)估二者對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值，為診斷前列腺癌轉(zhuǎn)移提供更多有價(jià)值的檢測(cè)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取2015 年1 月至2020 年12 月于我院確診為前列腺癌的患者174 例，年齡55~75 歲，平均（65.21±8.32）歲，Gleason 評(píng)分＜8 分100 例，≥8 分74 例；臨床T 分期，T1/T2 期共94 例，T3/T4 期共80 例。按照有無(wú)轉(zhuǎn)移分組，轉(zhuǎn)移組70 例，年齡55~75 歲，平均（66.14±8.41）歲；未轉(zhuǎn)移組104 例，年齡55~75 歲，平均（65.01±8.22）歲，兩組年齡比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡55~75 歲；②所有患者均經(jīng)直腸超聲引導(dǎo)下行前列腺穿刺活檢，一部分初次病理診斷為原發(fā)性局限性前列腺癌，另一部分患者初次確診為轉(zhuǎn)移性前列腺癌，可通過(guò)全身骨掃描以及X 線(xiàn)、CT 和MRI 檢查明確診斷[7］，且在本次確診前從未采取任何手術(shù)和藥物治療；③所有患者的臨床病理資料完整，包括Gleason 評(píng)分、臨床T 分期和轉(zhuǎn)移情況；④依從性較好，患者愿意配合抽血檢測(cè)；⑤愿意簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他腫瘤病史者；②有前列腺手術(shù)史者；③合并有嚴(yán)重心肺腎功能障礙者。

1.3 檢測(cè)方法 所有患者抽取空腹肘靜脈血5mL，置于抗凝管中，離心取上清液于-80℃保存，分批檢測(cè)。采用ELISA 法，檢測(cè)血清Gli1 水平采用雙抗體夾心法，試劑盒購(gòu)自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，檢測(cè)血清VEGF 水平采用雙單抗夾心法，試劑盒購(gòu)自上?，庬嵣锟萍加邢薰?，均嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 觀察指標(biāo) 收集所有患者的臨床病理資料，檢測(cè)所有患者血清Gli1 和VEGF 水平，分析上述兩個(gè)指標(biāo)與臨床病理特征的相關(guān)性，根據(jù)血清Gli1 水平的中位數(shù)（8.35ng/mL），將前列腺癌組分為低Gli1 組（＜8.35ng/mL）和高Gli1 組（≥8.35ng/mL），根據(jù)血清VEGF 水平的中位數(shù)（159.30ng/mL），將前列腺癌組分為低VEGF 組（＜159.30ng/mL）和高VEGF 組（≥159.30ng/mL）。比較前列腺癌轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移患者血清Gli1 和VEGF 水平差異，分析前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平的相關(guān)性，分析二者是否是前列腺癌轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素，采用ROC 曲線(xiàn)評(píng)估血清Gli1 和VEGF 水平以及聯(lián)合診斷對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 24.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析，采用二元多因素Logistic 回歸分析血清Gli1 和VEGF 水平是否是前列腺癌轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，采用ROC 曲線(xiàn)評(píng)估血清Gli1 和VEGF水平以及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌患者病理特征分布差異 高Gli1 組的Gleason 分級(jí)≥8 分、T3/T4 期、前列腺癌已轉(zhuǎn)移的比例顯著高于低Gli1 組，高VEGF 組上述指標(biāo)比例顯著高于低VEGF 組（均P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌患者病理特征分布差異（例）

2.2 兩組血清Gli1 和VEGF 水平比較 前列腺癌轉(zhuǎn)移組血清Gli1 和VEGF 水平均高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組血清Gli1 和VEGF 水平比較（ng/mL，±s）

表2 兩組血清Gli1 和VEGF 水平比較（ng/mL，±s）

組別 例數(shù) Gli1 VEGF未轉(zhuǎn)移組 104 6.41±0.69 135.48±20.03轉(zhuǎn)移組 70 9.26±0.92 188.00±28.26 t-8.085 -7.696 P 0.000 0.000

2.3 前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平的相關(guān)性前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平呈顯著正相關(guān)（r=0.811，P=0.000）。

2.4 危險(xiǎn)因素分析 以血清Gli1 和VEGF 水平作為自變量，以前列腺癌是否轉(zhuǎn)移作為因變量，進(jìn)行二元多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示血清Gli1 和VEGF水平是前列腺癌是否轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR=1.011，P=0.036；OR=1.931，P=0.001）。

2.5 血清Gli1 和VEGF 水平以及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值 ROC 曲線(xiàn)分析結(jié)果顯示，血清Gli1 和VEGF 水平診斷前列腺癌轉(zhuǎn)移的臨界值（cut-off值）分別為8.26ng/mL 和179.45ng/mL，靈敏度分別為100%和60.0%，特異度分別為61.5%和100%，曲線(xiàn)下面積（AUC）分別為0.898、0.879，二者聯(lián)合檢測(cè)的AUC 為0.932，靈敏度和特異度分別為88.6%和84.6%。見(jiàn)圖1。

圖1 血清Gli1 和VEGF 水平對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移的ROC曲線(xiàn)分析

3 討論

近年來(lái)，我國(guó)前列腺癌發(fā)病率逐年上升，前列腺癌轉(zhuǎn)移患者亦逐年升高[8］。前列腺癌轉(zhuǎn)移包括前列腺癌原發(fā)病灶具有轉(zhuǎn)移特征，突破基底膜內(nèi)滲入血管，經(jīng)過(guò)血液轉(zhuǎn)運(yùn)，再外滲出血管，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移并逐漸生長(zhǎng)形成轉(zhuǎn)移瘤[7］。為了適應(yīng)轉(zhuǎn)移過(guò)程中不斷變化的周?chē)h(huán)境，細(xì)胞要有較高的可塑性，而細(xì)胞去分化過(guò)程，如上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞從原位分離、遷移、重新分化或者進(jìn)行間質(zhì)-上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變，最終定植于轉(zhuǎn)移部位[8］。研究發(fā)現(xiàn)，Hh-Gli1 信號(hào)通路以及下游靶基因VEGF 可能參與前列腺癌轉(zhuǎn)移[9］。Gli1 可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移[10］，Gli1 表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖分化以及疾病發(fā)展進(jìn)程[11］，抑制Gli1 的表達(dá)可以降低腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力[5］。VEGF 通過(guò)作用相應(yīng)受體來(lái)調(diào)節(jié)和促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化和新生血管生成[12］，前列腺腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等生理學(xué)變化均依賴(lài)微血管為其供血[7］。研究表明，高表達(dá)的Gli1 與晚期原發(fā)腫瘤分期、陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、晚期臨床分期顯著相關(guān)，Gli1 陽(yáng)性組微血管密度明顯高于陰性組[13］。前列腺癌組織中VEGF 高表達(dá)，微血管密度顯著增高，密度水平和血清VEGF 水平與腫瘤分級(jí)和病理分期密切相關(guān)[3，8］。

本研究結(jié)果顯示，高Gli1 組的Gleason 分級(jí)≥8 分、T3/T4 期、前列腺癌已轉(zhuǎn)移的比例顯著高于低Gli1 組，高VEGF 組上述指標(biāo)比例顯著高于低VEGF 組，提示前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平越高，Gleason評(píng)分越高，T 分期越大，轉(zhuǎn)移發(fā)生率越高。施雪松等[2］研究發(fā)現(xiàn)胃癌根治術(shù)后7 天，預(yù)后不良組的血清Gli1水平顯著高于預(yù)后良好組，其水平高低是影響術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要因素。Duque JL 等[3］研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清VEGF 濃度顯著高于局限性前列腺癌患者和健康者，VEGF 濃度的高低可用于區(qū)分轉(zhuǎn)移性和局限性前列腺癌。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清Gli1 和VEGF 水平顯著高于未轉(zhuǎn)移者，與上述研究結(jié)論一致。

研究發(fā)現(xiàn)，Glil 可以促進(jìn)VEGF 的表達(dá)從而提升腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力[5］，阻斷Hh 通路后，Gli1和VEGF 基因mRNA 和蛋白水平顯著下降[4］，可抑制血管生成和腫瘤細(xì)胞侵襲。本研究結(jié)果顯示，前列腺癌患者血清Gli1 和VEGF 水平呈顯著正相關(guān)，二者水平的高低是前列腺癌是否轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因素，說(shuō)明VEGF很大可能是Gli1 的下游靶基因，通過(guò)激活Hh-Gli1 信號(hào)通路，增強(qiáng)Gli1 基因表達(dá)從而上調(diào)VEGF 的表達(dá)以促進(jìn)血管生成和前列腺癌轉(zhuǎn)移，二者是靶基因調(diào)節(jié)關(guān)系，亦提示血清Gli1 和VEGF 的高水平與前列腺癌轉(zhuǎn)移存在顯著相關(guān)性。謝喜等[14］研究結(jié)果亦顯示前列腺癌轉(zhuǎn)移患者血清VEGF 水平與骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生具有一定相關(guān)性。本研究進(jìn)一步進(jìn)行ROC 曲線(xiàn)分析，結(jié)果顯示血清Gli1 和VEGF 聯(lián)合檢測(cè)診斷前列腺癌轉(zhuǎn)移的診斷性能優(yōu)于單獨(dú)指標(biāo)檢測(cè)，提示聯(lián)合檢測(cè)血清Glil 和VEGF 水平對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移具有較好的診斷價(jià)值。

綜上所述，血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)前列腺癌轉(zhuǎn)移具有一定的診斷價(jià)值。目前國(guó)內(nèi)有關(guān)血清Gli1 和VEGF 水平與前列腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究報(bào)道較少，本研究樣本量較少，需進(jìn)行臨床多中心大樣本研究進(jìn)一步驗(yàn)證。