p53、增殖細(xì)胞核抗原在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)情況及與超聲圖像特征的關(guān)系

徐珂珂，王軍梅，郭亞南#

鄭州市第六人民醫(yī)院（河南省傳染病醫(yī)院）1超聲醫(yī)學(xué)科，2中西醫(yī)肝病科，鄭州 450000

肝癌根據(jù)組織來源、生物學(xué)特性分為原發(fā)性肝癌和繼發(fā)性肝癌。原發(fā)性肝癌是常見惡性腫瘤之一，在中國發(fā)病率居第4位，已嚴(yán)重影響人們的生命安全[1]。在臨床中，B超檢查因可明確顯示原發(fā)性肝癌病變部位、大小、與膽道及血管的關(guān)系及有無瘤栓存在等優(yōu)勢，是臨床早期診斷原發(fā)性肝癌的有效手段。由于其病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確，且早期缺乏典型癥狀，為進(jìn)一步提高原發(fā)性肝癌診斷準(zhǔn)確率，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)超聲圖像與免疫組化檢測技術(shù)相結(jié)合可發(fā)揮較好作用，因此，發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌與多生物學(xué)因子的相關(guān)性對提高診斷準(zhǔn)確率具有一定幫助[2]。p53作為一種腫瘤抑制蛋白和轉(zhuǎn)錄因子，與腫瘤發(fā)生、增殖、凋亡具有密切聯(lián)系；增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）因其合成情況與細(xì)胞DNA關(guān)系密切，作用于細(xì)胞增殖啟動，是反映腫瘤細(xì)胞增殖狀況的重要指標(biāo)[3]?；诖?，本研究探討p53、PCNA在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)情況及與超聲圖像特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年9月至2021年2月鄭州市第六人民醫(yī)院收治的原發(fā)性肝癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料完整；②經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性肝癌；③凝血功能正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位腫瘤；②非首次手術(shù)治療；③妊娠期或哺乳期女性。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入65例原發(fā)性肝癌患者，其中男48例，女17例；年齡32～74歲，平均（47.16±16.09）歲；Edmondson肝癌分級：Ⅰ級11例，Ⅱ級17例，Ⅲ級23例，Ⅳ級14例。取65例原發(fā)性肝癌患者的肝癌組織及癌旁組織（距腫瘤＞3 cm）。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化檢測采用免疫組化法檢測p53、PCNA，將石蠟包埋的組織進(jìn)行常規(guī)切片操作。進(jìn)行免疫組化染色，染色方法采用鏈霉素卵白素生物素過氧化酶復(fù)合物法，采用鼠抗PCNA（PC10）單克隆抗體、鼠抗人p53蛋白免疫組化單克隆抗體。PCNA以肝癌陽性石蠟切片為陽性對照，p53以肝癌組織準(zhǔn)確結(jié)果為陽性對照；陰性對照為磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）。結(jié)果判定：PCNA，細(xì)胞呈清晰棕色為陽性細(xì)胞；p53，細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。參考標(biāo)準(zhǔn)：PCNA隨機(jī)選取50倍鏡視野，計(jì)數(shù)約1000個(gè)細(xì)胞，若陽性細(xì)胞比例≥30%判定為陽性，反之為陰性；p53隨機(jī)選取40倍鏡視野，計(jì)數(shù)約1000個(gè)細(xì)胞，若陽性細(xì)胞比例≥10%判定為陽性，反之為陰性。

1.2.2 超聲檢查首先叮囑患者側(cè)臥或仰臥后充分暴露腹部，檢查前排空膀胱。首先應(yīng)用彩色超聲波診斷儀在探頭上涂抹耦合劑，凸陣探頭頻率3.8 MHz，觀察肝臟內(nèi)腫塊大小、形狀、回聲強(qiáng)度等，利用常規(guī)模式顯示門靜脈，便于查看有無瘤栓存在或淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移。其次應(yīng)用彩色多普勒超聲（color Doppler flow imaging，CDFI）查看血流情況，最后使用三維彩色血管能量成像（three-dimensional color power angiography，3D-CPA）查看腫瘤區(qū)域血供情況（評定標(biāo)準(zhǔn)：CDFI分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ4型，3D-CPA分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3型[4]），超聲檢查完后，由2名具有中級職稱的影像科醫(yī)師對原發(fā)性肝癌圖像進(jìn)行分析，另選取2名醫(yī)師詳細(xì)記錄并準(zhǔn)確判斷其大小、位置、分型等。

1.3 觀察指標(biāo)

對比不同組織中p53、PCNA表達(dá)情況，分析原發(fā)性肝癌超聲圖像特征與p53、PCNA的關(guān)系，分析原發(fā)性肝癌CDFI及3D-CPA圖像與p53、PCNA的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 28.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCNA、 p53表達(dá)情況的比較

原發(fā)性肝癌組織中PCNA、p53陽性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 原發(fā)性肝癌組織及癌旁組織中 p53、PCNA表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.2 超聲圖像表現(xiàn)

65例患者超聲圖像特征顯示，肝臟形態(tài)呈不規(guī)則，肝內(nèi)光點(diǎn)密集且略粗，肝內(nèi)邊緣欠光整，分布不均勻，血管走向不清晰；內(nèi)部回聲增強(qiáng)，可見弱回聲和強(qiáng)回聲；CDFI檢查可顯示癌灶的光團(tuán)周邊，光團(tuán)內(nèi)可見到豐富的動脈血流信號。

2.3 二維超聲圖像特征與 p53、PCNA表達(dá)的關(guān)系

不同p53、PCNA表達(dá)情況的原發(fā)性肝癌患者腫瘤數(shù)量、邊界、均勻性、壞死、轉(zhuǎn)移情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同 p53、PCNA表達(dá)情況原發(fā)性肝癌患者超聲圖像特征的比較

2.4 不同CDFI分型原發(fā)性肝癌患者肝癌組織中p 53、PCNA表達(dá)情況的比較

不同CDFI分型原發(fā)性肝癌患者p53、PCNA表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；且Ⅲ型患者p53、PCNA陽性表達(dá)率均高于Ⅰ型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表3 不同CDFI分型原發(fā)性肝癌患者肝癌組織中 p53、PCNA表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.5 不同 3D-CPA分型原發(fā)性肝癌患者肝癌組織中 p53、PCNA表達(dá)情況的比較

不同3D-CPA分型原發(fā)性肝癌患者p53、PCNA表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；且Ⅱ、Ⅲ型患者p53、PCNA陽性表達(dá)率均高于Ⅰ型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表4）

表4 不同 3D-CPA分型原發(fā)性肝癌患者肝癌組織中 p53、PCNA表達(dá)情況的比較[ n（%）]

3 討論

原發(fā)性肝癌主要臨床癥狀為肝區(qū)疼痛、惡心嘔吐、消瘦乏力等，為進(jìn)一步提高患者診斷率和治療效果，了解病因機(jī)制是必要基礎(chǔ)，隨之探尋其與各種生物因子的關(guān)系是關(guān)鍵步驟[5]。在臨床中，影像學(xué)檢查一直是分析生物因子如p53、PCNA表達(dá)情況與原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展、預(yù)后關(guān)系等的有效方法之一。p53與原發(fā)性肝癌分化程度密切相關(guān)；而PCNA位于G1晚期、S期細(xì)胞核中，是評價(jià)腫瘤惡性程度的一項(xiàng)指標(biāo)[6-7]。研究發(fā)現(xiàn)，重新生長的腫瘤血管分布、血供特點(diǎn)的特殊性可能是引起原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移的主要因素，且可應(yīng)用于該病診斷和治療[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌組織中PCNA、p53陽性表達(dá)率均明顯高于癌旁組織，說明p53、PCNA陽性表達(dá)率的高低可能與原發(fā)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展息息相關(guān)。

p53是一種腫瘤抑制因子，具有阻止DNA突變、受損細(xì)胞分裂及通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控細(xì)胞傳輸?shù)蛲鲂畔⒌茸饔?，達(dá)到阻止腫瘤形成的目的[9]。臨床研究表明，惡性腫瘤中大部分患者出現(xiàn)p53基因突變，為腫瘤細(xì)胞選擇性提供優(yōu)勢，使其逃避細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，并能夠在正常細(xì)胞無法增殖的情況下為它提供增殖條件，說明p53表達(dá)高低與原發(fā)性肝癌存在較大關(guān)系[10]。腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖活性，然而PCNA可作為評價(jià)腫瘤細(xì)胞增殖狀況的重要指標(biāo)[11]。研究發(fā)現(xiàn)，PCNA是細(xì)胞增殖相關(guān)的核內(nèi)因子，與肺癌分化程度密切相關(guān)，分化程度越低的肺癌其PCNA表達(dá)越高，為PCNA作為肺癌惡性程度、分化程度評估指標(biāo)奠定基礎(chǔ)[12-13]。本研究中，不同p53、PCNA表達(dá)情況的原發(fā)性肝癌患者腫瘤數(shù)量、邊界、均勻性、壞死、轉(zhuǎn)移情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明p53、PCNA在原發(fā)性肝癌的發(fā)展中具有一定推動作用，而p53表達(dá)出現(xiàn)明顯增高，可能與p53本身可刺激細(xì)胞增長的特點(diǎn)有關(guān)。

為進(jìn)一步推斷p53、PCNA與超聲圖像特征的關(guān)系，本研究采用CDFI、3D-CPA進(jìn)行深入探討。CDFI利用血流成像的特點(diǎn)，對判斷血流方向、速度、性質(zhì)有重要意義；3D-CPA作為一種新型彩色多普勒成像技術(shù)，能在一定程度上加強(qiáng)反映腫瘤增殖情況，提高血流檢測的靈敏度等[14-15]。陳亮等[16]發(fā)現(xiàn)，p53、PCNA表達(dá)水平與CDFI、3D-CPA圖像特征有關(guān)。本研究中，不同CDFI、3D-CPA分型的患者p53、PCNA表達(dá)情況不同，其分型越高，p53、PCNA表達(dá)越高，說明p53、PCNA水平越高，原發(fā)性肝癌分型越高，病情越嚴(yán)重，其原因可能是腫瘤細(xì)胞不斷擴(kuò)散、生長，血管也隨之生長，同時(shí)在此過程中，p53基因突變，PCNA被動激活。

綜上所述，p53、PCNA與原發(fā)性肝癌超聲圖像特征具有一定關(guān)系，有利于原發(fā)性肝癌的診斷及治療。