食物過(guò)敏患兒牛奶、雞蛋、花生3種食物組分蛋白特異性IgE抗體的表達(dá)水平變化

王霞，高嶺，林謙，李玫，金玉（1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院a.消化科，b.檢驗(yàn)科，南京 210008；2.南京市紅十字醫(yī)院檢驗(yàn)科，南京 210008）

食物過(guò)敏是食物不良反應(yīng)的一種，指一種或多種特定食物成分進(jìn)入人體后使機(jī)體致敏，再次反復(fù)進(jìn)入可導(dǎo)致機(jī)體對(duì)之產(chǎn)生異常免疫反應(yīng)，引起生理功能紊亂和（或）組織損傷，進(jìn)而引發(fā)一系列臨床癥狀。研究數(shù)據(jù)表明，食物過(guò)敏發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，嬰幼兒和兒童發(fā)病率顯著高于成人［1］。60%兒童的食物過(guò)敏會(huì)累及消化系統(tǒng)，患兒還會(huì)因長(zhǎng)期忌食導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)攝入的不足或缺失［2］，如何精確診斷和管理食物過(guò)敏，對(duì)臨床明確診斷、精準(zhǔn)治療具有重要意義。

過(guò)敏原組分診斷是利用提取天然變應(yīng)原組分和重組技術(shù)在分子層次上辨別致敏的過(guò)敏原組分的診斷技術(shù)，是近年來(lái)新興起的一種新型過(guò)敏原檢測(cè)方法［3］。牛奶、雞蛋、花生是兒童主要食物過(guò)敏原，患兒對(duì)其致敏后可產(chǎn)生不同的過(guò)敏癥狀，而過(guò)敏原組分檢測(cè)能夠評(píng)估產(chǎn)生嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，分析臨床確診為食物過(guò)敏的患兒血清中的牛奶、雞蛋、花生組分蛋白特異性免疫球蛋白E（sIgE）的變化，明確過(guò)敏原中引起過(guò)敏癥狀的蛋白質(zhì)組分，可為食物過(guò)敏患兒預(yù)防、診斷和治療提供臨床科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 2020年1—12月南京市兒童醫(yī)院消化科、食物過(guò)敏專(zhuān)病門(mén)診的食物過(guò)敏患兒147例，男性98例，女性49例，年齡3月～12歲，中位年齡3歲，其中，＜1歲組28例，1～3歲組87例，＞3歲組32例。其中，累及呼吸道癥狀（反復(fù)咳嗽、喘息、打噴嚏）68例，消化道癥狀（腹痛、腹瀉、嘔吐）48例，皮膚癥狀（蕁麻疹、濕疹）20例，過(guò)敏性結(jié)膜炎6例，發(fā)育遲緩5例。

單純牛奶過(guò)敏13例，雞蛋過(guò)敏13例，花生過(guò)敏1例；牛奶、雞蛋混合過(guò)敏為90例，花生、雞蛋混合過(guò)敏3例，雞蛋、牛奶、花生混合過(guò)敏27例。其中，74例（50.34%）食物過(guò)敏兒童忌食過(guò)敏食物1月后進(jìn)行食物激發(fā)試驗(yàn)再次出現(xiàn)過(guò)敏癥狀。

1.2 標(biāo)本采集與處理 采集患兒清晨空腹靜脈血3 mL，2 390×g離心10 min，分離血清，用于牛奶、雞蛋、花生及其組分蛋白sIgE、總免疫球蛋白E（tIgE）檢測(cè)。

1.3 主要儀器與試劑 EUROBlotMasterⅡ免疫印跡儀、EUROLineScan掃描系統(tǒng)、吸入性及食入性過(guò)敏原sIgE抗體檢測(cè)試劑盒、變應(yīng)原組分sIgE檢測(cè)試劑盒（德國(guó)歐蒙公司）；ImmunoCAP過(guò)敏原檢測(cè)儀器Phadia1000及其配套tIgE檢測(cè)試劑盒（美國(guó)賽默飛公司）。

1.4 過(guò)敏原及組分蛋白sIgE檢測(cè) 采用免疫印跡法檢測(cè)牛奶、雞蛋、花生sIgE。牛奶特異性組分蛋白：nBosd，乳鐵蛋白；nBosd 4，α-乳白蛋白；nBosd 5，β-乳球蛋白；nBosd 6，牛血清清蛋白；nBosd 8，酪蛋白。雞蛋特異性組分蛋白：nGald 1，累卵黏蛋白；nGald 2，卵清蛋白；nGald 3，伴清蛋白；nGald 4，溶酶菌。花生特異性組分：rArah 1，貯藏蛋白-7s球蛋白；rArah 2，貯藏蛋白-2s白蛋白；rArah 3，貯藏蛋白-11s球蛋白；rArah 9，脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白。

sIgE分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，sIgE濃度＜0.35 IU/mL；Ⅰ級(jí)，sIgE濃度為0.35～0.70 IU/mL；Ⅱ級(jí)，sIgE濃度為0.70～3.5 IU/mL；Ⅲ級(jí)，sIgE濃度為3.5～17.5 IU/mL；Ⅳ級(jí)，sIgE濃度為17.5～50 IU/mL；Ⅴ級(jí)，sIgE濃度為50～100 IU/mL；Ⅵ級(jí)，sIgE濃度為＞100 IU/mL。

1.5 tIgE檢測(cè) 采用熒光酶聯(lián)免疫法檢測(cè)tIgE水平。tIgE水平參考區(qū)間：0～60 kU/L。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS24.0軟件、EXCEL進(jìn)行。率的比較采用卡方檢驗(yàn)；正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡組食物過(guò)敏患兒tIgE水平比較

147例食物過(guò)敏患兒中，血清tIgE陽(yáng)性130例（88.44%），其中1～3歲組、3～12歲組患兒tIgE陽(yáng)性率高于0～1歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。3～12歲組患兒tIgE水平高于1～3歲組、0～1歲組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 不同年齡組食物過(guò)敏兒童tIgE比較

2.2 各項(xiàng)過(guò)敏原組分陽(yáng)性比例 130例牛奶sIgE陽(yáng)性患兒中，各項(xiàng)牛奶特異性組分陽(yáng)性比例依次為：nBosd 6為77.69%（101/130）、nBosd 5為75.38%（98/130）、nBosd 4為65.38%（85/130）、nBosd 8為40.00%（52/130）、nBosd為4.62%（6/130）。

133例雞蛋sIgE陽(yáng)性患者中，各項(xiàng)雞蛋特異性組分陽(yáng)性比例依次為：nGald 2為92.54%（124/133）、nGald 1為85.82%（115/133）、nGald 3為75.37%（101/133）、nGald 4為15.67%（21/133）。

31例花生sIgE陽(yáng)性患兒中，各項(xiàng)花生特異性組分陽(yáng)性率均較低，比例依次為：rArah 1為19.35%（6/31），rArah 2為9.68%（3%31），rArah 3為6.45%（2/31），rArah 4為3.23%（1/31）。

2.3 多種陽(yáng)性（至少2種過(guò)敏原組分sIgE檢測(cè)陽(yáng)性）檢出情況 130例牛奶sIgE陽(yáng)性患兒中，106例（81.54%）患兒存在特異性組分多種陽(yáng)性。其中，3種過(guò)敏原組分占比最多，為37.77%（40/130），5種牛奶組分均陽(yáng)性為6.92%（9/130），5種牛奶組分均陰性為3.08%（4/130）。在牛奶多種組分過(guò)敏患兒中，nBosd 4、5、6同時(shí)陽(yáng)性44.62%（58/130），nBosd 4、5、8同時(shí)陽(yáng)性29.23%（38/130）。

133例雞蛋sIgE陽(yáng)性患者中，121例（90.98%）患兒存在特異性組分多種陽(yáng)性。其中，3種過(guò)敏原組分占比最多，為55.64%（74/133），4種雞蛋組分均陽(yáng)性為15.04%（20/133），4種雞蛋組分均陰性為4.51%（6/133）。在雞蛋多種組分過(guò)敏患兒中，Gald 1、2、3同時(shí)陽(yáng)性為69.92%（93/133）。

花生各組分陽(yáng)性率均較低，且大部分患兒表現(xiàn)為單一組分陽(yáng)性，多種組分陽(yáng)性?xún)H占6.45%（2/31）。

2.4 不同濃度級(jí)數(shù)雞蛋、牛奶過(guò)敏患兒多種組分檢出情況 見(jiàn)表2。在牛奶sIgE陽(yáng)性患兒中，4例牛奶組分過(guò)敏原陰性主要見(jiàn)于Ⅰ級(jí)濃度患兒，5種組分牛奶過(guò)敏原陽(yáng)性主要見(jiàn)于以Ⅲ～Ⅴ級(jí)患兒，另外，牛奶組分過(guò)敏原陽(yáng)性各濃度級(jí)別患兒均出現(xiàn)2～4種牛奶組分過(guò)敏原陽(yáng)性。

表2 不同濃度級(jí)數(shù)雞蛋、牛奶過(guò)敏患兒多種組分檢出情況

雞蛋sIgE陽(yáng)性患兒中，Ⅰ級(jí)濃度主要是單一組分蛋白過(guò)敏，中高濃度主要以多種組分為主，雞蛋組分過(guò)敏原陰性主要見(jiàn)于Ⅰ級(jí)濃度患兒，4種雞蛋過(guò)敏原組分陽(yáng)性主要見(jiàn)于Ⅲ～Ⅴ級(jí)患兒。

3 討論

本研究中南京地區(qū)147例食物過(guò)敏患兒過(guò)敏原主要為牛奶、雞蛋。食物過(guò)敏兒童血清tIgE陽(yáng)性88.44%，且隨著年齡增加，tIgE水平也升高。雖然血清tIgE水平增高僅能提示Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)的可能性大，但不能作為判定過(guò)敏狀態(tài)的可靠指標(biāo)［4］，在臨床實(shí)踐中尤其是食物過(guò)敏兒童中，常用tIgE水平結(jié)合患者病史以及臨床癥狀來(lái)綜合評(píng)估兒童過(guò)敏情況。

過(guò)敏原組分診斷近年來(lái)被認(rèn)為在區(qū)分真正過(guò)敏和交叉反應(yīng)、診斷食物過(guò)敏以及評(píng)估患者發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)等方面有重要意義［5］。組分蛋白sIgE水平也可以提供診斷信息，而不僅僅是一個(gè)陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)食物中特定蛋白IgE，比檢測(cè)含多種蛋白質(zhì)粗提液的IgE能提供更特異的診斷信息［6］。本研究中牛奶致敏兒童中的nBosd 6、5、4、8是牛奶過(guò)敏兒童的主要致敏組分；牛血清白蛋白也可能出現(xiàn)在牛肉過(guò)敏中，這可能與nBosd 6陽(yáng)性最高有關(guān)。Ahrens等［7］研究發(fā)現(xiàn)，牛奶過(guò)敏的患兒中血清特異性牛奶α-乳球蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白IgE水平越低，患兒耐受牛奶的可能性越大。

雞蛋清中含有23種致敏性或非致敏性的蛋白質(zhì)［8］。卵黏蛋白屬于耐熱且耐消化組分，可引起嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)；卵白蛋白屬于熱敏感組分，存在于疫苗當(dāng)中，是引起疫苗接種后不良反應(yīng)的主要過(guò)敏原組分；伴清蛋白亦稱(chēng)為卵轉(zhuǎn)鐵蛋白和溶菌酶均屬于熱敏感組分。本研究中雞蛋過(guò)敏兒童的過(guò)敏組分主要是Gald 2、Gald 1、Gald 3居多，分別為92.54%、85.82%、75.37%，這3種組分蛋白是主要致敏原，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致［9-10］。

花生中的致敏組分為12種，主要致敏組分為7S球蛋白、2S白蛋白、11S球蛋白、脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白等。我國(guó)兒童中對(duì)花生過(guò)敏發(fā)病率普遍較低，與國(guó)外一些研究結(jié)果有所差異，我國(guó)以Arah1、Arah1亞基和3條Arah3多肽過(guò)敏為主。我國(guó)花生Arah1和Arah3相對(duì)含量均低于國(guó)外花生品種，或可從某種程度上解釋我國(guó)花生過(guò)敏發(fā)病率低于國(guó)外的原因［11］。

在本研究中，90.98%雞蛋過(guò)敏、81.54%牛奶過(guò)敏患兒存在特異性組分多種陽(yáng)性的情況，Gald 1、2、3同時(shí)陽(yáng)性為69.92%，在雞蛋多種組分陽(yáng)性中最多；nBosd 4、5、6同時(shí)陽(yáng)性為44.62%，在牛奶多價(jià)組分陽(yáng)性中最多。本研究中雞蛋、牛奶sIgE濃度越高，其致敏的組分蛋白種類(lèi)也越多。研究表明，基于過(guò)敏原重組蛋白的組分檢測(cè)對(duì)過(guò)敏原的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程有著重要價(jià)值，并對(duì)控制脫敏治療中的風(fēng)險(xiǎn)有重要意義［12］。