巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗藥性品系對常見藥劑的交互抗性及其種群參數(shù)分析

張倩 成立新 溫彩霞 常靜 孟瑞霞 李海平 王振 戴桂香

摘要 為了明確巴氏新小綏螨Neoseiulus barkeri溴氰菊酯抗性品系對常用殺蟲（螨）劑的交互抗性水平及生物適合度，為巴氏新小綏螨抗藥性品系田間應用提供科學依據(jù)。本文應用玻片浸漬法測定了巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系對12種殺蟲（螨）劑的交互抗性，采用種群生命表評價了其生長發(fā)育及繁殖情況。結果顯示，相對于巴氏新小綏螨敏感品系，溴氰菊酯抗性品系（226.38倍）對供試的其他6種擬除蟲菊酯類藥劑均存在交互抗性，尤其對氯氟氰菊酯的交互抗性倍數(shù)最高，達到2 210.91倍。對噻蟲嗪、毒死蜱和乙螨唑的交互抗性分別是116.46、110.71倍和20.43倍，對丁硫克百威、阿維菌素和噠螨靈無交互抗性。對其生物適合度研究發(fā)現(xiàn)，溴氰菊酯抗性品系相較于敏感品系，前若螨期和產(chǎn)卵前期顯著縮短，產(chǎn)卵期和單雌總產(chǎn)卵量顯著增加。上述結果表明，巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系對10種常用殺蟲（螨）藥劑產(chǎn)生了不同水平的交互抗性，且其繁殖率顯著增加，推薦在田間推廣應用。

關鍵詞 巴氏新小綏螨;溴氰菊酯;抗藥性品系;交互抗性;生長發(fā)育

中圖分類號： S476.2

文獻標識碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2021495

Abstract This study aims to clarify the cross-resistance level of a deltamethrin-resistant strain of the Neoseiulus barkeri to commonly used pesticides and its fitness， and provide scientific basis for the field application of the strain in biological pest control. The cross-resistance of the deltamethrin-resistant strain to 12 commonly used pesticides was measured by slide-dip method， and the growth and development parameters and the fecundity were determined by the life-table analysis. The results showed that the deltamethrin-resistant strain （226.38 fold） of N. barkeri had cross-resistance to all the other six tested pyrethroids， especially the level of cross-resistance to cyhalothrin is the highest which reached 2 210.91 fold. The strain also showed cross-resistance to thiamethoxam， chlorpyrifos and etoxazole， which was 116.46， 110.71 fold and 20.43 fold， respectively， compared to the sensitive strain. There was no cross-resistance to carbosulfan， abamectin and pyridaben. The results of its biological fitness test reveal that the protonymph stage， pre-oviposition stage were significantly shortened， but the oviposition period and the total eggs laid by single female increased in the resistant strain. These results indicated that the deltamethrin-resistant strain of N. barkeri showed different levels of cross-resistance to nine of commonly used pesticides and their fecundity significantly increased， therefore， it could be more widely used as a biological control agent.

Key words Neoseiulus barkeri;deltamethrin;resistant strain;cross-resistance;growth and development

巴氏新小綏螨Neoseiulus barkeri屬植綏螨科Phytoseiidae新小綏螨屬Neoseiulus，主要分布在溫帶地區(qū)，在澳大利亞、歐洲、以色列等國家和地區(qū)被廣泛用于防治薊馬和葉螨[1]。該螨對馬鈴薯腐爛莖線蟲Ditylenchus destructor [2]、水稻干尖線蟲Aphelenchoides besseyi [3]、西花薊馬Frankliniella occidentalis [4]、柑橘全爪螨Panonychus citri [5]和朱砂葉螨Tetranychus cinnabarinus [6]等有較好的防治效果。因其擴散能力強、死亡率低、發(fā)育歷期短、易于飼養(yǎng)和大量繁殖等優(yōu)點，被認為是最有效的生物防治天敵之一[7]。

目前，對害蟲（螨）的防治仍然以化學防治為主，但長期大量施用化學藥劑引發(fā)害蟲（螨）抗藥性的同時，還導致其天敵大量死亡，致使害蟲（螨）再猖獗[8]。研發(fā)具有抗藥性的天敵是解決這一矛盾的有效方法。目前對抗藥性捕食螨的篩選和應用的實例很多。Roush等[9]篩選了西方盲走螨Metaseiulus occidentalis甲萘威抗性品系，結果發(fā)現(xiàn)該螨可以在甲萘威脅迫和寒冷條件下存活，并可成功控制害螨種群數(shù)量。Mochizuki[10]將抗擬除蟲菊酯的奧氏鈍綏螨Amblyseius womersleyi種群與化學藥劑結合，成功防治了茶樹上的神澤氏葉螨Tetranychus kanzawai。很多昆蟲（螨）對一種殺蟲（螨）劑產(chǎn)生抗性后，對其他殺蟲（螨）劑也會產(chǎn)生相應的抗性，即產(chǎn)生交互抗性，抗藥性天敵也不例外?？沙浞掷眠@樣的抗藥性天敵品系，將其與化學防治有效結合[11]。Sato等[12]的研究發(fā)現(xiàn)，在田間施用有機磷殺蟲劑的環(huán)境下，奧氏鈍綏螨殺撲磷抗性品系可以存活并很好地控制神澤氏葉螨的種群數(shù)量。Zhao等[13]的研究證明，田間采集的長刺鈍綏螨Amblyseius longispinosus對甲氰菊酯、毒死蜱和阿維菌素均產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，建議可以在田間聯(lián)合殺蟲劑共同防治蔬菜害蟲。Salman等[14]對篩選獲得的智利小植綏螨Phytoseiulus persimilis乙螨唑抗性品系進行了交互抗性研究，發(fā)現(xiàn)該捕食螨對溴氰菊酯、多殺霉素、啶蟲脒和茚蟲威等8種藥劑均產(chǎn)生了交互抗性，尤其對溴氰菊酯的交互抗性最強，在田間可以利用這些藥劑和智利小植綏螨協(xié)同防治害蟲（螨）。B14FEF28-5805-4608-99A4-767255C25CA1

本文測定了室內(nèi)篩選的巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系對13種殺蟲（螨）劑的交互抗性，并比較了該抗性品系與敏感品系的生長發(fā)育相關參數(shù)和繁殖力，目的是分析巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系在田間應用的可行性，為田間科學應用該捕食螨防治害蟲（螨）提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試螨

巴氏新小綏螨敏感品系（SS）：在內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學園藝與植物保護學院有害昆蟲生物防治實驗室長期應用橢圓食粉螨Aleuroglyphus ovatus飼養(yǎng)繁殖，飼養(yǎng)期間不接觸任何殺蟲殺螨劑。

巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗藥性品系（RR）：室內(nèi)飼養(yǎng)的巴氏新小綏螨敏感種群通過溴氰菊酯連續(xù)選育30代獲得的對溴氰菊酯具有226.38倍抗性的種群。

1.2 供試藥劑

99%溴氰菊酯、96%高效氯氰菊酯、94%氯氰菊酯、95%聯(lián)苯菊酯、96%氯氟氰菊酯、95%高效氯氟氰菊酯、95%醚菊酯，江蘇揚農(nóng)化工有限公司生產(chǎn);95%噻蟲嗪、85%毒死蜱、97%阿維菌素、90%丁硫克百威，天津艾格福農(nóng)藥科技有限公司生產(chǎn);以上藥劑均為原藥。20%乙螨唑懸浮劑（SC），河南省焦作華生化工有限公司生產(chǎn);15%噠螨靈乳油（EC），南京華洲藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.3 巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系交互抗性測定方法

采用FAO推薦的玻片浸漬法[15]測定常用藥劑對巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系和敏感品系的毒力。將各原藥用丙酮制成5 000 mg/L的母液待用。試驗時，根據(jù)預試驗結果，用清水分別將母液稀釋成5～6個濃度梯度，并以清水做對照。把寬為1 cm的雙面膠帶剪2 cm長貼在載玻片上，選擇大小一致的雌成螨，用細毛筆將其背面粘在雙面膠上，確保其足及口器可自由活動，并保證無機械損傷，每玻片粘30頭。將帶蟲玻片浸入不同濃度藥液中5 s，每處理30頭螨，3個重復。玻片取出后用濾紙吸干多余液滴，放于玻片架上，置于溫度（25±1）℃，光周期L∥D=16 h∥8 h，相對濕度（80±5）%的人工智能光照培養(yǎng)箱中，24 h后解剖鏡下用毛筆或針刺檢查死亡情況。

1.4 巴氏新小綏螨生物學參數(shù)測定

參照Lee等[16]的試驗方法。在培養(yǎng)皿（d=12 cm）中放入圓形海綿（d=10 cm），海綿邊不與培養(yǎng)皿接觸，在海綿上鋪小于海綿的圓形黑色塑料紙，培養(yǎng)皿中加入適量水，以防止螨逃逸。分別挑取巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性和敏感品系懷卵雌成螨各200頭置于不同培養(yǎng)皿中待其產(chǎn)卵，取6 h后所產(chǎn)卵進行試驗。

另準備培養(yǎng)皿（d=12 cm），內(nèi)放圓形海綿（d=4 cm）4個，圓形海綿上鋪小于海綿的濾紙和黑色塑料紙，用毛筆將卵挑到黑色塑料紙上進行單頭飼養(yǎng)。培養(yǎng)皿放入溫度為（25±1）℃，光周期L∥D=16 h∥8 h，相對濕度（80±5）%的人工智能光照培養(yǎng)箱中?？剐院兔舾衅废蹈髟O40個重復。每12 h在解剖鏡下觀察其發(fā)育情況，觀察到新的蛻皮殼即確認進入新的螨態(tài)。從幼螨開始飼喂獵物（獵物為二斑葉螨Tetranychus urticae），幼螨期每頭巴氏新小綏螨飼喂10頭二斑葉螨，若螨期多于10頭，成螨多于 15頭。每次觀察時往培養(yǎng)皿中加水。發(fā)育至成螨后，將雌雄螨配對。若雄螨死亡，應立即補充一頭雄螨。記錄發(fā)育歷期、捕食螨的存活及產(chǎn)卵情況。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)處理均在Excel 2016中計算。采用SPSS 21.0軟件對敏感和抗性品系相關參數(shù)的差異顯著性進行t測驗，顯著水平α=0.05。

2 結果與分析

2.1 巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系對常見殺蟲劑的交互抗性

表1顯示，巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系（226.38倍）對除溴氰菊酯以外的6種擬除蟲菊酯殺蟲劑均產(chǎn)生了不同程度的交互抗性，其中對氯氟氰菊酯的抗性水平最高，為2 210.91倍。對其他供試殺蟲劑的交互抗性由高到低依次是聯(lián)苯菊酯>噻蟲嗪>毒死蜱>高效氯氟氰菊酯>醚菊酯>高效氯氰菊酯>氯氰菊酯>乙螨唑。對丁硫克百威、阿維菌素和噠螨靈無交互抗性。

2.2 巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系和敏感品系的發(fā)育歷期

巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系的卵期、幼螨期、后若螨期和完成1個世代所需天數(shù)與敏感品系均無顯著差異，但其產(chǎn)卵期顯著長于敏感品系，而前若螨期和產(chǎn)卵前期顯著短于敏感品系（P<0.05）（表2）。

2.3 巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系的繁殖力

由表3可知，巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系每雌總產(chǎn)卵量顯著高于敏感品系（P<0.05），但每雌日產(chǎn)卵量和孵化率兩品系間無顯著差異。

3 討論

害蟲（螨）對殺蟲劑產(chǎn)生抗藥性非常不利于化學防治，抗藥性天敵的應用將有利于協(xié)調(diào)化學防治和生物防治的關系，有益于害蟲綜合治理。本文測定了前期在實驗室經(jīng)過30代篩選獲得的對溴氰菊酯具有226.38倍抗性的巴氏新小綏螨抗藥性品系對12種藥劑的交互抗性。結果顯示，相較于敏感品系，抗性品系對6種擬除蟲菊酯藥劑均有不同程度的交互抗性，對噻蟲嗪、毒死蜱和乙螨唑也產(chǎn)生了交互抗性。昆蟲（螨）對一種藥劑產(chǎn)生抗性后，有可能對同類或非同類的其他藥劑產(chǎn)生抗性。Sato等[17]研究發(fā)現(xiàn)，奧氏鈍綏螨殺撲磷抗性品系對乙酰甲胺磷（acephate）和馬拉硫磷（malathion）等有機磷藥劑都產(chǎn)生了交互抗性，但是對擬除蟲菊酯藥劑均未產(chǎn)生交互抗性。Sibel等[18]對室內(nèi)篩選的加州新小綏螨Neoseiylus californicus螺甲螨酯（spiromesifen）抗性品系研究發(fā)現(xiàn)，其對炔螨特（propargite）、四螨嗪（clofentezine）和乙螨唑等殺螨劑也產(chǎn)生了交互抗性。但本研究發(fā)現(xiàn)，巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系不僅對擬除蟲菊酯藥劑產(chǎn)生了交互抗性，對氯化煙酰類藥劑噻蟲嗪、有機磷藥劑毒死蜱、殺螨劑乙螨唑也產(chǎn)生了交互抗性，只是對乙螨唑抗性水平較低，而對噠螨靈、丁硫克百威和阿維菌素均未產(chǎn)生抗性。侯棟元等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，巴氏新小綏螨甲氰菊酯抗性品系不僅對擬除蟲菊酯類藥劑高效氯氟氰菊酯產(chǎn)生了交互抗性，對噻蟲嗪、毒死蜱、乙螨唑和螺螨酯均產(chǎn)生了交互抗性，這與本文研究結果相似。因為不同殺蟲劑對昆蟲（螨）作用靶標部位不同，昆蟲（螨）對其解毒機制也不同，本文研究的巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗藥性品系對多個不同種類的殺蟲劑產(chǎn)生交互抗性，說明其抗藥性機制比較復雜，有待進一步研究。B14FEF28-5805-4608-99A4-767255C25CA1

抗藥性捕食螨的生長發(fā)育和繁殖的研究對其田間應用至關重要。劉雨芳等[19]對奧氏鈍綏螨殺撲磷抗藥性品系和敏感品系的發(fā)育歷期、產(chǎn)卵期、產(chǎn)卵量、孵化率等進行了比較，發(fā)現(xiàn)兩個品系間沒有顯著差異。侯棟元等[7]比較了巴氏新小綏螨甲氰菊酯抗性品系和敏感品系的生物學特性，發(fā)現(xiàn)抗性品系的發(fā)育歷期顯著延長，捕食量和孵化率變化不顯著，具有田間應用潛力。本文研究結果顯示，巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗藥性品系的前若螨期、產(chǎn)卵前期顯著短于敏感品系，而產(chǎn)卵期顯著長于敏感品系（P<0.05），每雌總產(chǎn)卵量也顯著高于敏感品系（P<0.05），說明其適合度升高，初步判斷該捕食螨具有投入田間應用的潛力和價值。多數(shù)昆蟲對藥劑產(chǎn)生抗藥性后，其適合度都有所降低。例如與敏感品系相比，橘小實蠅Bactrocera dorsalis抗多殺霉素品系[20]、西花薊馬抗多殺霉素品系[21]、棉鈴蟲Helicoverpa armigera抗Bt品系[22]等均存在生殖力下降、發(fā)育歷期延長、成蟲壽命和生殖期縮短等適合度下降的現(xiàn)象。但也有一些抗性昆蟲適合度升高，如普通草蛉Chrysoperla carnea抗甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽品系和抗多殺霉素品系均表現(xiàn)出比敏感品系更高的適合度[23-24]?？顾幮岳ハx（螨）的相對適合度與其攜帶的抗性基因引起的生理生化變化和抗藥性形成的遺傳背景及抗藥性水平密切相關[25]，本文研究的巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系存在前若螨期和產(chǎn)卵前期縮短、產(chǎn)卵期延長、總產(chǎn)卵量顯著高于敏感品系的現(xiàn)象，這可能與其抗性基因密切相關，將在未來的研究中繼續(xù)探索。本試驗對比了巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗性品系和敏感品系的生長發(fā)育情況，并證實了抗性品系對多個田間常用藥劑具有交互抗性，建議在田間將巴氏新小綏螨溴氰菊酯抗藥性品系單獨或與具有交互抗性的殺蟲劑混合應用防治害蟲，一方面可以減少藥劑對巴氏新小綏螨的危害，另一方面還可以減少害蟲（螨）抗藥性的產(chǎn)生，達到更好的防治效果。

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（責任編輯：楊明麗）B14FEF28-5805-4608-99A4-767255C25CA1