缺氧誘導(dǎo)HIF?1α在子宮內(nèi)膜異位癥巨噬細(xì)胞極化異常的作用及機(jī)制研究

楊如玉 梁炎春 韋雅婧 黃碧淇 楊帆 譚灝 溫磊 陸曦 牛剛

1中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科（廣州 510080）；2中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院（廣州 510089）

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMs，簡稱內(nèi)異癥）是一種常見的婦科良性疾病，指具有生長功能子宮內(nèi)膜組織（腺體和間質(zhì)）出現(xiàn)在子宮腔以外的部位，在育齡期婦女發(fā)病率為6% ～ 10%［1］。因其生長、浸潤和反復(fù)的出血常導(dǎo)致患者出現(xiàn)疼痛、不孕等癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給患者帶來巨大的心理和經(jīng)濟(jì)壓力［2］。目前學(xué)界廣泛認(rèn)可“經(jīng)血逆流”是子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制，但是該學(xué)說難以完全解釋內(nèi)異癥的具體發(fā)生機(jī)制。

近年來大量的研究表明，經(jīng)血逆流可能只是誘因，巨噬細(xì)胞狀態(tài)和功能導(dǎo)致的免疫功能異常是促進(jìn)內(nèi)膜黏附、種植和生長的重要催化因素。有研究表明內(nèi)異癥病灶中的巨噬細(xì)胞主要表現(xiàn)為M2 型，發(fā)揮促進(jìn)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖和侵襲的作用，在血管生成、免疫調(diào)控等方面也發(fā)揮著舉足輕重的作用［3-5］。相反，也有其他研究表明，內(nèi)異癥病灶中M2 型巨噬細(xì)胞的數(shù)量減少，多數(shù)巨噬細(xì)胞向M1 型轉(zhuǎn)化［6-9］。巨噬細(xì)胞作為子宮內(nèi)膜異位癥中最常見的炎癥免疫細(xì)胞，在EMs 病灶中的分布和功能狀態(tài)仍待研究，調(diào)控其表型轉(zhuǎn)變的機(jī)制仍不清楚。

越來越多的證據(jù)表明，脫落的子宮內(nèi)膜碎片進(jìn)入盆腹腔面臨的缺氧微環(huán)境可能是調(diào)控巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變的重要機(jī)制。在腫瘤學(xué)領(lǐng)域，研究顯示缺氧可抑制巨噬細(xì)胞mTOR 活性降低和糖酵解，從而抑制M1 的分化和功能，巨噬細(xì)胞更多地表現(xiàn)為M2 型［10］。但也有研究認(rèn)為缺氧上調(diào)RAGE的表達(dá)，激活了巨噬細(xì)胞中的NF?κB 信號，促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1 型分化［10］。HIF?1α 作為缺氧微環(huán)境中至關(guān)重要的轉(zhuǎn)錄因子，對內(nèi)異癥病灶中巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的調(diào)控作用仍不清楚，而且通過改善病灶缺氧微環(huán)境，恢復(fù)病灶內(nèi)巨噬細(xì)胞的分布平衡，是內(nèi)異癥靶向治療中很有前景的方向。因此，本研究擬探討缺氧誘導(dǎo)HIF?1α 調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化狀態(tài)的機(jī)制，為內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制研究提供新的科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2021年1月至2021年12月31日在中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院并行手術(shù)治療的患者。17 例子宮內(nèi)膜異位癥患者納入內(nèi)異癥組，手術(shù)標(biāo)本經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為子宮內(nèi)膜異位癥組織，對照組為20 例非子宮內(nèi)膜異位患者，取自同期因不孕癥或者子宮肌瘤而住院治療的患者，收集在位子宮內(nèi)膜標(biāo)本，術(shù)后病理證實(shí)為無子宮內(nèi)膜異位癥。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）18～45 歲女性；（2）體質(zhì)量指數(shù)（BMI）：18.5 ～ 24 kg/m2；（3）患者或其法定代理人簽署書面知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠期婦女、絕經(jīng)后婦女；（2）合并嚴(yán)重內(nèi)科疾病、免疫性疾病、惡性疾病或其他慢性炎癥疾?。唬?）合并精神疾病者（包含不能配合病例收集過程和隨訪過程者）；（4）合并急性生殖道感染或盆腔慢性炎癥；（5）入院前6 個月內(nèi)曾使用激素類藥物或GnRHa 治療者、手術(shù)史等。本研究經(jīng)中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 主要試劑與材料 THP?1 細(xì)胞（人類單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系）購買于上海中喬新舟生物科技有限公司，細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清、青霉素/鏈霉素、DMEM/F12、胰酶等均購買于Gibco，佛波酯（Phorbol 12?myristate 13?acetate，PMA，Abmole）用于誘導(dǎo)THP?1 細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞，氯化鈷（CoCl2，Sigma）用于誘導(dǎo)細(xì)胞缺氧。RNA 提取試劑盒購買于奕杉生物，Evo M?MLV 反轉(zhuǎn)錄試劑和SYBR Green Pro Taq HS 購買于艾科瑞生物。兔抗人單克隆抗體CD86（Biosis，1∶300），鼠抗人單克隆抗體CD206（Santa Cruz Biotechnology，1∶400），兔抗人單克隆抗體HIF?1α（Cell Signaling Technology，1∶300），DyLight 488 山羊抗鼠和DyLight 594 山羊抗兔熒光二抗（Cell Signaling Technology，1∶500），鼠/兔通用二抗試劑、DAB 顯色試劑、過氧化物酶封閉液等購買于廣州葆利公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 將標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋后切成4 μm 厚的切片。65 ℃烤片2 h 后，依次經(jīng)二甲苯脫蠟、乙醇梯度脫水，再經(jīng)檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)。修復(fù)后PBS清洗3 次，使用內(nèi)源性過氧化物酶封閉液封閉10 min。PBS 清洗后，使用10%山羊血清封閉1 h，甩干后滴加抗HIF?1α 一抗工作液，4℃孵育過夜。第二天室溫下復(fù)溫半小時，PBS 漂洗三次，滴加生物素標(biāo)記羊抗兔/鼠二抗工作液孵育10 min，PBS 漂洗3 次后，DAB顯色液顯色1～3 min，最后經(jīng)自來水沖洗、蘇木素復(fù)染、梯度乙醇脫水等步驟，使用中性樹脂封片，封片后在顯微鏡下觀察。免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度評估如下：染色強(qiáng)度評分：無染色（評分0）、弱但可檢測（評分1）、強(qiáng)（評分2）、非常強(qiáng)（評分3）；染色區(qū)域評分：評分0（無陽性細(xì)胞），評分1（1%～25%陽性細(xì)胞），評分2（26%～50%陽性細(xì)胞），評分3（50% ～ 75%陽性細(xì)胞），評分4（75% ～ 100%陽性細(xì)胞）。通過將兩個分?jǐn)?shù)相加計算總的染色評分。

1.4 雙重免疫熒光實(shí)驗(yàn) 石蠟標(biāo)本依次經(jīng)65 ℃烤片2 h，二甲苯和無水乙醇脫蠟水化，山羊血清封閉后，滴加預(yù)先混合的抗CD86、CD206 一抗工作液，4℃孵育過夜。第二天PBS 清洗三次，室溫下孵育熒光二抗2 h，繼而滴加DAPI 孵育5 min，使用防熒光淬滅劑封片，于熒光顯微鏡下觀察。

1.5 THP?1培養(yǎng)和處理 THP?1細(xì)胞使用RIMP?1640（含有10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 μg/mL鏈霉素，50 μmol/L β?巰基乙醇）培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80% ～ 90%進(jìn)行傳代種板。將細(xì)胞離心，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，以每孔1 × 106個細(xì)胞的密度接種到6 孔板中，加入100 ng/mL 的PMA 處理24 h，誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞。24 h 后，棄去上清液，缺氧組加入含有50 ng/mL CoCl2的細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行缺氧處理，常氧組加入等量PBS 作為對照。

1.6 實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real?time fluo?rescence quantitativepolymerase chain reaction，RT?qPCR） 收集缺氧和常氧處理后的巨噬細(xì)胞，按照RNA 提取試劑盒的說明提取RNA。采用Ta?kara 體系將提取的RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。RT?qP?CR 的模板為cDNA，嚴(yán)格參照Takara 體系配置反應(yīng)體系，熒光定量熱循環(huán)條件為：95 ℃，2 min；95 ℃，30 s；60 ℃，30 s；72 ℃，30 s，循環(huán)40 次。引物序列見表1。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 21.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以進(jìn)行描述，兩獨(dú)立組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜異位癥和正常子宮內(nèi)膜組織中巨噬細(xì)胞的分布情況 采用雙重免疫熒光技術(shù)檢測異位病灶和正常子宮內(nèi)膜組織中巨噬細(xì)胞的分布情況，M1 型巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物為CD86（綠色熒光），M2 型巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物為CD206（紅色熒光），細(xì)胞核通過DAPI 染色（藍(lán)色熒光）。異位病灶中M1型巨噬細(xì)胞密度為（3.87 ± 3.67）個/視野，M2 型巨噬細(xì)胞的密度為（24.96±19.76）個/視野，總的巨噬細(xì)胞密度為（28.83 ± 21.20）個/視野；正常子宮內(nèi)膜中M1 型巨噬細(xì)胞密度為（0.76 ± 1.00）個/視野，M2 型巨噬細(xì)胞的密度為（8.79±7.99）個/視野，總的巨噬細(xì)胞密度為（9.55 ± 8.76）個/視野。異位病灶中的巨噬細(xì)胞密度大于正常子宮內(nèi)膜，且以M2型巨噬細(xì)胞為主，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖1）。

圖1 正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜異位癥中巨噬細(xì)胞的分布情況（400×）Fig.1 Distribution of macrophages in normal endometrium and endometriosis（400×）

2.2 子宮內(nèi)膜異位癥病灶和正常子宮內(nèi)膜組織中HIF?1α 表達(dá)情況 免疫組織化學(xué)檢測子宮內(nèi)膜異位癥病灶和正常子宮內(nèi)膜組織中HIF?1α 的表達(dá)情況，結(jié)果見圖2。內(nèi)異癥腺體細(xì)胞的HIF?1α 表達(dá)水平顯著高于非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜的腺體細(xì)胞［染色強(qiáng)度：（6.31±0.62）分vs.（4.89±2.07）分，P＜0.05，圖2E］。內(nèi)異癥間質(zhì)細(xì)胞的HIF?1α 表達(dá)水平顯著高于非內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜的間質(zhì)細(xì)胞［染色強(qiáng)度：（5.76 ± 1.00）分vs.（3.93 ± 2.35）分，P＜0.05，圖2F］。提示子宮內(nèi)膜異位癥病灶中缺氧更嚴(yán)重，且腺上皮細(xì)胞的缺氧程度高于子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。

圖2 正常子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜異位癥中HIF?1α 的表達(dá)情況（200×和400×）Fig.2 Expression of HIF?1α in normal endometrium and endometriosis（200×and 400×）

2.3 缺氧通過HIF?1α 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2 型極化 為探究缺氧條件下巨噬細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)變情況，使用PMA 將THP?1 細(xì)胞誘導(dǎo)為巨噬細(xì)胞后，使用50 ng/mL CoCl2誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞缺氧，檢測巨噬細(xì)胞的極化情況。結(jié)果顯示HIF?1α 的表達(dá)升高，M1型標(biāo)記物IFN?γ、CD86、TNF?α 的表達(dá)水平無變化或變化無統(tǒng)計學(xué)意義，M2型標(biāo)記物CD206，CD163、Arg?1、TGF?β 表達(dá)升高，巨噬細(xì)胞表現(xiàn)為M2 型巨噬細(xì)胞。結(jié)果提示缺氧誘導(dǎo)HIF?1α 表達(dá)上調(diào)，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镸2 型，分泌抗炎細(xì)胞因子。

3 討論

本研究采用雙重免疫熒光的方法檢測了子宮內(nèi)膜異位癥病灶中巨噬細(xì)胞的分布情況，結(jié)果顯示病灶內(nèi)的巨噬細(xì)胞數(shù)量增多，以M2 型為主。免疫組化實(shí)驗(yàn)揭示異位病灶內(nèi)HIF?1α 的表達(dá)升高，腺體中HIF?1α 的表達(dá)高于間質(zhì)細(xì)胞，表明異位病灶內(nèi)存在更嚴(yán)重的缺氧狀況。進(jìn)一步的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明缺氧可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá)HIF?1α，促進(jìn)其轉(zhuǎn)變?yōu)镸2 型巨噬細(xì)胞。由此推測，HIF?1α 可能是誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變的重要轉(zhuǎn)錄因子。

巨噬細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，由單核細(xì)胞分化而來，具有提呈抗原、分泌細(xì)胞因子、非特異性免疫防御監(jiān)視等功能，是介導(dǎo)內(nèi)異癥免疫失衡的重要細(xì)胞。在不同的刺激因素下，巨噬細(xì)胞可以向不同的方向極化，分化為經(jīng)典激活型（M1 型）或者替代激活型（M2 型）巨噬細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞可以被IFN?γ、TNF?α、LPS 等激活，產(chǎn)生大量促炎性細(xì)胞因子IL?1β、TNF?α、IL?6、NO、ROS 等，發(fā)揮促炎作用。相反，M2 型巨噬細(xì)胞可以被IL?4、IL?10、IL?13 等激活，釋放抗炎因子、生長因子和修復(fù)因子等，參與組織修復(fù)、血管生成、免疫抑制等過程，以抗炎作用為主［11］。本研究結(jié)果顯示內(nèi)異癥患者異位病灶內(nèi)的M1、M2 型巨噬細(xì)胞的數(shù)量都顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織，以M2型巨噬細(xì)胞為主，表明M2 型巨噬細(xì)胞可能是在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用的細(xì)胞，針對M2 型巨噬細(xì)胞的靶向治療有助于改善內(nèi)異癥的相關(guān)癥狀。

但是子宮內(nèi)膜異位癥病灶中的巨噬細(xì)胞的表型是動態(tài)變化的，隨著病變的進(jìn)展不斷發(fā)生變化的。研究者采用子宮內(nèi)膜異位癥小鼠模型，在不同的時間段檢測病灶內(nèi)浸潤性巨噬細(xì)胞的表型。結(jié)果顯示，在第4 天病變發(fā)展早期，巨噬細(xì)胞主要表達(dá)促炎標(biāo)記物iNOS 和主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ（MHC II），但在第7 天后，表達(dá)精氨酸酶1 和CD204 的巨噬細(xì)胞比例逐漸增高，證明病灶內(nèi)的巨噬細(xì)胞從促炎型M1 巨噬細(xì)胞活性過渡到抗炎型M2 巨噬細(xì)胞，這種表型的漸進(jìn)性轉(zhuǎn)變進(jìn)一步證明M2 型巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜異位癥樣病變發(fā)展中起核心作用［12］。本研究中心收集的子宮內(nèi)膜異位癥病例多數(shù)因疼痛、不孕等于本中心就診，并進(jìn)行手術(shù)治療，多數(shù)患者病程長，故而病灶浸潤的巨噬細(xì)胞主要為M2 型巨噬細(xì)胞，M1 型巨噬細(xì)胞數(shù)量較少。

圖3 缺氧處理誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镸2 型巨噬細(xì)胞Fig.3 Hypoxia treatment induces the transformation of macrophages into M2 macrophages

不同表型的巨噬細(xì)胞參與內(nèi)異癥發(fā)生發(fā)展的不同時期，而M2 型巨噬細(xì)胞作為內(nèi)異癥發(fā)展過程中占主導(dǎo)的免疫細(xì)胞，被視為促進(jìn)內(nèi)異癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵免疫細(xì)胞。研究者通過耗竭子宮內(nèi)膜異位癥小鼠體內(nèi)的巨噬細(xì)胞，繼而注射不同表型的巨噬細(xì)胞，觀察病變的進(jìn)展。結(jié)果發(fā)現(xiàn)M0 型巨噬細(xì)胞不影響病變數(shù)目或重量沒有影響，但轉(zhuǎn)移M1型巨噬細(xì)胞可減少病變重量。相反，轉(zhuǎn)移M2 型巨噬細(xì)胞會導(dǎo)致病變重量增加，證明了M2 型巨噬細(xì)胞可能對病變的生長和發(fā)展起重要作用，而M1 型巨噬細(xì)胞具有拮抗作用，可以清除異位內(nèi)膜組織，破壞病變結(jié)構(gòu)。同時研究也表明M2 型巨噬細(xì)胞參與子宮內(nèi)膜異位癥的血管生成過程，耗竭子宮內(nèi)膜異位癥小鼠模型M2 型巨噬細(xì)胞，可以降低VEGFA 和TGF?β 等促血管生成因子的水平，降低病灶的血管生成，導(dǎo)致病灶的總重量減少［5］。并且，減少M(fèi)2 巨噬細(xì)胞的病變浸潤可以顯著減少病變的纖維化含量，而巨噬細(xì)胞耗竭后系統(tǒng)性過繼轉(zhuǎn)移M2a 型巨噬細(xì)胞（M2 型巨噬細(xì)胞的一種亞型），病灶的纖維化程度增加［13］。本研究發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榭寡仔秃?，TGF?β、Arg?1 和IL?10等蛋白質(zhì)mRNA 水平表達(dá)增加，研究已經(jīng)證實(shí)這些蛋白質(zhì)是巨噬細(xì)胞參與組織修復(fù)、重塑過程的重要生物學(xué)分子，而且M2 型巨噬細(xì)胞相關(guān)的分子標(biāo)記物CD206、CD163 等可能是內(nèi)異癥的潛在診斷和判斷預(yù)后的一種方式［14-15］。

目前研究者推測，內(nèi)異癥中巨噬細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)變可能受到內(nèi)異癥發(fā)生發(fā)展中微環(huán)境變化的調(diào)控［12］。與正常在位子宮內(nèi)膜相比，缺氧是子宮內(nèi)膜異位癥的重要組成和重要特征，是脫落的子宮內(nèi)膜進(jìn)入盆腹腔必須面臨的微環(huán)境改變，可能參與子宮內(nèi)膜異位癥中巨噬細(xì)胞功能和表型轉(zhuǎn)變的調(diào)控。在腫瘤學(xué)領(lǐng)域，缺氧對于巨噬細(xì)胞功能的影響是研究的熱點(diǎn)。缺氧微環(huán)境可以通過上調(diào)CCL2、CCL5、M?CSF等趨化因子誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞進(jìn)入缺氧區(qū)域HIF?1α 通過促進(jìn)CCL2 分泌招募單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞［16-17］，繼而下調(diào)CCR2、CCR5 等趨化因子受體將其阻滯在缺氧區(qū)域，并且缺氧區(qū)域的巨噬細(xì)胞主要為M2 型巨噬細(xì)胞［18］。缺氧區(qū)域的巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的促腫瘤生長、增殖、遷移的能力，促血管生成的能力，免疫抑制以及化療抵抗的能力［19-20］。

缺氧誘導(dǎo)因子是在缺氧環(huán)境中發(fā)揮作用的重要調(diào)控因子，是由HIF?1α 和HIF?1β 組成的異二聚體。HIF?1β 在常氧和缺氧的情況下可穩(wěn)定存在，而HIF?1α 只有在缺氧條件下能穩(wěn)定存在，這種特性讓HIF?1α 成為缺氧條件下最重要的缺氧調(diào)節(jié)因子。缺氧對于巨噬細(xì)胞的調(diào)控作用很可能是通過HIF?1α 實(shí)現(xiàn)的。在胃癌組織中，已有研究證明HIF?1α 可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镸2 型，進(jìn)一步在細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組水平的測序表明缺氧可以上調(diào)HIF?1α表達(dá)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞表達(dá)抗炎相關(guān)因子升高，巨噬細(xì)胞表現(xiàn)為抗炎型［21-22］。而且激活HIF?1α 可以抑制巨噬細(xì)胞NF?κB 的激活和隨后促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，特異性抑制脂多糖刺激的巨噬細(xì)胞分化為M1 細(xì)胞［23］。本研究顯示子宮內(nèi)膜異位癥病灶存在更嚴(yán)重的缺氧，腺體的缺氧程度高于間質(zhì)。進(jìn)一步在細(xì)胞水平，發(fā)現(xiàn)缺氧通過上調(diào)HIF?1α，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的M1 型標(biāo)記物TNF?α、CD86、IFN?γ 表達(dá)，M2 型標(biāo)記物Arg?1、TGF?β、CD206、CD163 等表達(dá)升高。以上結(jié)果證明在子宮內(nèi)膜異位癥中，缺氧微環(huán)境也可以通過上調(diào)HIF?1α 促進(jìn)巨噬細(xì)胞向抗炎型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化。

巨噬細(xì)胞表型是通過綜合比較多種細(xì)胞因子和表面標(biāo)記物的表達(dá)而確定，與其他研究一樣，在組織實(shí)驗(yàn)水平，檢測異位病灶中巨噬細(xì)胞表型的標(biāo)記物數(shù)量有限，使得很難真正定義內(nèi)異癥中復(fù)雜的巨噬細(xì)胞表型，雖然此研究使用的分子標(biāo)記物CD86、CD206分別為目前公認(rèn)且廣泛使用的M1、M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物。為展示不同時期內(nèi)異癥病灶中巨噬細(xì)胞的組成和探索巨噬細(xì)胞表型的動態(tài)轉(zhuǎn)變，應(yīng)該收集不同分期的臨床標(biāo)本進(jìn)行研究，但本研究使用的組織標(biāo)本缺乏早期病灶，研究不夠全面。

綜上所述，子宮內(nèi)膜異位癥異位病灶中巨噬細(xì)胞密度顯著增加，而且以M2 型為主。HIF?1α 是缺氧誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镸2 型的重要調(diào)控因子。如何改善異位病灶的缺氧微環(huán)境，調(diào)控巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)，可能為挖掘新的治療靶點(diǎn)提供新的思路。