• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    阿里牦牛經(jīng)濟性狀相關遺傳標記基因型頻率研究

    2022-06-06 13:32:48洛桑頓珠鮮莉莉平措占堆索朗多吉旦巴加參巴桑旺堆
    西南農(nóng)業(yè)學報 2022年5期
    關鍵詞:牦牛阿里基因型

    張 強,洛桑頓珠,鮮莉莉,平措占堆,索朗多吉,巴 多,旦 巴,旦巴加參,支 張,巴桑旺堆

    (1.省部共建青稞和牦牛種質(zhì)資源與遺傳改良國家重點實驗室,拉薩 850000;2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院畜牧獸醫(yī)研究所,拉薩 850009;3.西藏阿里地區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,西藏 阿里 859000;4.西藏阿里改則縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,西藏 阿里 859200)

    【研究意義】牦牛(Bosgrunniens)廣泛分布于中國青藏高原海拔3000 m以上的地區(qū),其不僅可作為農(nóng)耕和高原運輸工具,還可以為當?shù)啬撩裉峁┠?、肉、毛、役力、燃料等生產(chǎn)生活必需品,是青藏高原牧民重要的生活和經(jīng)濟支柱。目前,由于受到不同自然生態(tài)條件的自然選擇塑造,我國青藏高原牦牛資源形成了大量適應性強和生產(chǎn)力各具特色的優(yōu)秀地方資源群體[1]。故而對不同地理分布的牦牛新資源進行種質(zhì)資源保護狀態(tài)評價及遺傳改良評估是提升區(qū)域牦牛產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要途徑[2]?!厩叭搜芯窟M展】單核苷酸多態(tài)位點(Single nucleotide polymorphism, SNP)作為基因組中分布最廣泛的遺傳變異類型,被廣泛用于物種起源進化、種群遷徙等領域研究。特別是在家養(yǎng)動物育種方面也扮演著重要的角色,如利用全基因組重測序技術對重要經(jīng)濟性狀的受選擇區(qū)域進行候選基因挖掘[3-5];全基因高密度SNP芯片(DNA chip)用于家養(yǎng)動物經(jīng)濟性狀全基因組關聯(lián)分析進而篩選相關關鍵候選遺傳標記[6-7]。與高成本的全基因組高通量測序技術和微陣列芯片相比,單個重要候選基因的SNP標記與經(jīng)濟性狀間關聯(lián)分析在經(jīng)濟性狀重要候選基因定位中應用更為廣泛。如,通過單基因SNP關聯(lián)分析研究發(fā)現(xiàn)在家雞上大量來自MyOD,IGF-I,IGFBP-3,ESM1和Smad3等基因的SNPs與多種屠宰、繁殖和生長性狀相關[8-12],對黃牛和水牛的研究也發(fā)現(xiàn)一系列與生長性狀相關的候選基因,如CDC10[13],MOGAT1[14],SPARC[15],PLAG1[16],IGF2[17]。另外發(fā)現(xiàn)GH和GHR基因與水牛的生長和產(chǎn)奶量相關[18-19]。盡管由于牦牛的生活環(huán)境限制而導致針對牦牛的經(jīng)濟性狀相關候選基因挖掘的研究較少,但仍有一些列與牦牛的經(jīng)濟性狀相關的候選基因的分子標記被鑒定。如研究發(fā)現(xiàn)一個來自MC4R基因的SNP (1069GC)與麥洼牦牛18 月齡體重顯著相關(P<0.01)[20]。位于LPL基因編碼區(qū)域中的外顯子7的錯義突變位點SNP(19913CT)與牦牛的體重相關(P<0.01),平均日增重、腰眼面積和內(nèi)臟脂肪重量都具有顯著相關性[21]?!颈狙芯壳腥朦c】阿里地區(qū)位于西藏西部,平均海拔4500 m,有“世界屋脊之屋脊”、“世界第三極”、“生命之禁區(qū)”的稱號。當?shù)靥烊徊輬鰯?shù)量充沛,是良好的牦牛生產(chǎn)基地,阿里牦牛作為阿里地區(qū)特有的牧業(yè)資源,牦牛種群數(shù)量巨大,為當?shù)啬撩裉峁┝巳?、奶、役力等重要生產(chǎn)資料。本研究通過對阿里牦牛多種經(jīng)濟性狀的分析,從而獲得期望的結果。【擬解決的關鍵問題】本研究根據(jù)已報道的與牦牛多種經(jīng)濟性狀具有顯著相關性的候選遺傳標記在西藏阿里牦牛生態(tài)類群內(nèi)優(yōu)勢基因型分布情況,以期評估種群遺傳改良的潛力。其次,對該群體的遺傳多樣性和群體結構進行評估,為今后牦牛的遺傳資源保護工作提供理論參考。

    1 材料與方法

    于2020年5月赴阿里地區(qū)改則縣牦牛牧場(81°59′86″N;31°30′35″E)收集無血緣關系的青年健康阿里牦牛62頭(年齡為3~5歲),每只牦牛收集靜脈血液5 mL。利用GNTTM血液DNA提取試劑盒(吉恩生物,中國)提取牛血液全基因組DNA。DNA濃度利用NanoDrop2000DNA微量核酸蛋白測定儀檢測,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質(zhì)量和完整性。

    根據(jù)位點對應牦牛參考基因組(BosGru_v2.0)序列信息,使用PrimerPlex 2軟件設計PCR反應引物(表1~2),單堿基延伸引物使用primer3plus(http://www.primer3plus.com/)設計,并交由武漢天一華煜基因科技有限公司(武漢,中國)合成引物。

    表1 7個牦牛生長性狀相關SNP標記擴增引物信息

    PCR擴增體系:5 μL 2×TaqPCR Mix,上下游引物各0.5 μL,1 μL DNA(20 ng/μL),3 μL ddH2O補足體系至10 μL。PCR 擴增程序:95 ℃預變性5 min;94 ℃變性30 s,52 ℃退火30 s,72 ℃延伸80 s,循環(huán)40次;72 ℃延伸 10 min。SAP消化體系對PCR產(chǎn)物進行純化,詳細步驟如下:使用蝦堿酶純化法將殘余dNTPs去磷酸化,降解游離單鏈引物。取4 μL PCR產(chǎn)物,加入2 μL EX-SAP酶[其中包含ddH2O 0.75 μL,SAP(1 U/μL) 0.5 μL,ExoI(5 U/μL) 0.15 μL,10×SAP buffer 0.6 μL]。孵育程序:37 ℃ 40 min,85 ℃ 5 min,4 ℃保存。

    將混合PCR產(chǎn)物模板純化后進行電泳鑒定,根據(jù)濃度定量稀釋。將稀釋后的PCR產(chǎn)物作為模板進行SNaPshot反應。反應體系:SNaPshot Mix 0.5 mL,Pooled PCR Products 3 mL,Pooled Primers 1 mL,ddH2O 0.5 mL,即配制成5.0 mL的反應體系;SNaPshot反應程序:95 ℃ 2 min;95 ℃ 10 s,52 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,40個循環(huán),4 ℃ 保存。

    SNaPshot產(chǎn)物純化體系:直接向SNaPshot反應產(chǎn)物中加入2 μL SAP Mix[包含H2O 0.9 μL,SAP (1 U/μL) 0.5 μL,10×SAP buffer 0.6 μL)];SNaPshot產(chǎn)物消化反應程序:37 ℃ 40 min,75 ℃ 15 min,4 ℃ 保存。

    取2 μL消化后的SNaPshot反應產(chǎn)物加入到含有0.4% LIZ120 8 μL去離子甲酰胺中,95 ℃變性5 min,然后放-20 ℃驟冷,PCR產(chǎn)物由武漢天一華煜基因科技有限公司(武漢,北京)利用ABI3130XL(美國AB應用生物系統(tǒng)公司,美國)完成測序,并利用Genemarker進行SNP位點的基因型判定。

    原始分型數(shù)據(jù)利用Microsatellite Toolkit軟件包計算各遺傳位點及群體的等位基因數(shù)(NA)、多態(tài)信息含量(PIC)、觀察雜合度(HO)和期望雜合度(HE)等。用Arlequin 3.5軟件[22]進行群體內(nèi)各位點哈代溫伯格平衡檢驗(HWE)。

    2 結果與分析

    從表3可知,Hesx1_G618C標記在所在的全部個體中都為純合子G/G型。而來自于相同HesxI基因的另一個標記(Hesx1_T226C)在阿里群體內(nèi)具有一定多態(tài)性,但高頻率為T/T(82.2581%),等位基因T頻率為91.1300%。另外,ACSL1_A2079T 位點在群體內(nèi)最高頻率基因型為A/A(67.7419%),最低為T/T型(3.2258%),其中等位基因A和T頻率分別為82.2600%和17.7400%。ACSL1_G2409A位點的最高基因型為G/G型(58.0645%),最低為A/A型(11.2903%)。MyoD1_C1710T位點50%的個體攜帶C/T基因型,C/C 和T/T的頻率僅為25.8065%和24.1935%,其中等位基因C和T的頻率基本相當(C=49.1900%,T=50.8100%)。來自TMEM-18基因的2個位點(TMEM-18_C1267T,TMEM-18_C4447T)在群體內(nèi)攜帶的最高頻率基因型均為C/C,且T/T為稀有等位基因型(1.6129%~3.2258%)。

    表2 7個牦牛生長性狀相關SNP標記單堿基延伸測序引物信息

    表3 阿里牦牛群體內(nèi)7個牦牛生長性狀相關SNP標記基因型頻率及遺傳多樣性信息

    由于Hesx1_G618C全部個體都為G/G型,故而其HE、PIC和HO均為0,且無法進行哈代—溫伯格平衡檢驗。剩余位點中HO最高為MyoD1_C1710T(HO=0.5000)和ACSL1_G2409A(HO=0.3065),最低是TMEM-18_C4447T和TMEM-18_C1267T,均為0.1452。HE值高低排序與HO規(guī)律一致,且在群體內(nèi)各位點的HO和HE間存在分歧,但差距較小。PIC結果顯示,其值分布范圍為0.3749(MyoD1_C1710T)~0.1486(TMEM-18_C4447T和Hesx1_T226C),即全部位點中僅有2個(MyoD1_C1710T和ACSL1_G2409A)具有中度多態(tài)位點(0.25

    3 討 論

    本研究利用SNaPshot基因分型技術對已明確與牦牛經(jīng)濟性狀相關的7個候選SNPs標記在阿里牦牛群體內(nèi)基因型分布開展進行評價,發(fā)現(xiàn)阿里牦牛群體攜帶大量重要經(jīng)濟性狀標記相關標記的優(yōu)勢基因型。眾所周知,垂體作為性腺軸成員,其在調(diào)控多種生長相關激素過程中起了至關重要作用,尤其是垂體前葉分泌的生長激素(Growth hormone, GH)在影響動物生長的作用被廣泛證實[23-24]。研究表明,ES細胞表達同源異型盒基因(Homeobox expressed in ES cells, HesxI)是參與胚胎早期垂體發(fā)育的重要基因,影響腎上腺皮質(zhì)激素和甲狀腺素刺激素分泌[25-27],尤其是HesxI基因對垂體前葉分泌生長激素具有調(diào)控作用[24,28-29]。

    在HesxI基因的內(nèi)含子1區(qū)域發(fā)現(xiàn)的SNP標記與南陽牛日增重有顯著相關,在外顯子4的突變位點與南陽牛胸圍、6月齡平均日增重、秦川牛的胸圍和體質(zhì)量等指標都存在顯著相關[30]。在對山羊的研究中,HesxI基因中一些SNP位點被證實與山羊體質(zhì)量有顯著聯(lián)系,且A/A為優(yōu)勢基因型[31]。尤其是在青海大通牦牛的無角牦牛群體中發(fā)現(xiàn),多個來自HexsI基因的SNPs與其生長性能相關,如HesxI_G-618C與6月齡和12月齡無角牦牛體質(zhì)量、體高、胸圍均有極顯著相關(P<0.01),另外,HesxI_T226C與12月齡無角牦牛的體重、體高、胸圍均有顯著相關(P<0. 05)[32]。本研究發(fā)現(xiàn)阿里無角牦牛群體中HesxI_G-618C位點為純合G/G型,但在無角牦牛群體內(nèi)該位點位G/G:76.4000%,G/C:23.6000%。且G/G型為6月齡體質(zhì)量和胸圍、12月齡體斜長和體質(zhì)量、18月齡體質(zhì)量的非優(yōu)勢基因型[32]。表明HesxI_G-618C位點在阿里牦牛群體內(nèi)不具備分子遺傳改良與評估價值。另外,盡管約82.0000%阿里牦牛個體攜帶HesxI_T226C位點的T/T型,但仍有17.7419%的個體攜帶T/C型頻率,已有研究表明其與青海無角牦牛12月齡體質(zhì)量、體高和胸圍的關聯(lián)分析研究中確定T/C為優(yōu)勢基因型[32],故阿里牦牛在HesxI_T226C位點內(nèi)具有一定改良潛力。

    來自于肌肉調(diào)節(jié)因子(Muscle Regulatory Factors, MRFS)家族的生肌決定因子(Myostatin 1, MyoD1)是調(diào)控骨骼肌生成的重要轉錄因子,它能夠激活肌肉基因轉錄,使非肌細胞轉變?yōu)榧〖毎?,調(diào)控肌細胞的融合,促進成肌細胞分化為肌管,進而融合為肌纖維,是調(diào)控脊椎動物胚胎期肌肉發(fā)育過程的主調(diào)控因子[33-34],同時有研究證實該基因也與壞損組織修復存在密切關聯(lián)[34]。在家養(yǎng)動物方面,目前大量在MyoD1基因區(qū)域的遺傳變異與家養(yǎng)動物的生長和肉品質(zhì)經(jīng)濟性狀呈顯著相關,如篩選獲得MyoD1基因內(nèi)含子1區(qū)的位點突變(T→A)在高郵鴨的49日齡的體重、胸肌重、胸肌橫截面積、胸肌纖維直徑以及胸肌纖維密度均顯著相關(P<0.05)[35]。豬MyoD1基因外顯子4上發(fā)現(xiàn)一個同義突變SNP(c.783 GA)與天府黑兔、伊拉兔和香檳兔的全凈膛重、半凈膛重間呈顯著相關(P<0.05)[36]。在長白豬和大白豬的MyoD1基因第1內(nèi)含子第257位存在1個A/C顛換被證實與肉色評分和失水率相關(P<0.05或P<0.01)[37]。在多個新疆地方綿羊群體中發(fā)現(xiàn)MyoD1基因第一外顯子的突變與其產(chǎn)肉性能有關[38-39]。在牛上同樣也發(fā)現(xiàn)在MyoD1基因內(nèi)存在大量與其生長和屠宰性狀相關的遺傳標記[40-41]。尤其,研究發(fā)現(xiàn)申扎牦牛MyoD1基因外顯子3上的SNP(MyoD1_C1710T)與體尺性狀顯著(P<0.05)相關,C/T為優(yōu)勢基因型[42]。本研究發(fā)現(xiàn)這個位點優(yōu)勢基因型在阿里牦牛群體中頻率為50%,暗示利用該標記在此群體內(nèi)進行分子選育的潛力巨大。

    大量研究表明跨膜蛋白18(Transmembrane protein, TEME18)影響癌細胞的代謝和調(diào)節(jié)[43-44]并參與神經(jīng)元干細胞的遷移[45]。尤其是近些年研究發(fā)現(xiàn)TEME18可通過神經(jīng)調(diào)節(jié)而參與脂肪細胞的分化,從而影響機體肥胖[46-47]。通過人的全基因組關聯(lián)分析(GWAS)發(fā)現(xiàn)TMEM18基因存在與人類食欲及生長發(fā)育相關的遺傳變異標記[48-49]。在家養(yǎng)動物中也發(fā)現(xiàn)TMEM18基因中多個SNP與豬和牛的多個生長經(jīng)濟性狀相關[50-51]。尤其是新近在天祝牦牛中發(fā)現(xiàn)TMEM18基因SNP標記(C1267T)位點與牦牛的體高、體重和屠宰率差異顯著(P<0.05)。另外,TMEM18_C4447T位點與牦牛的體斜長、管圍、胸圍、體重、胴體重、凈肉重、凈肉率和屠宰率均存在顯著性差異(P<0.05)[52]。本研究發(fā)現(xiàn),兩個來自于TMEM18基因的SNP位點在阿里牦牛群體中都主要攜帶C/T和C/C,而T/T型稀少。據(jù)已有研究報道稱TMEM18_C4447T的C/T和C/C較T/T基因型在胸圍、管圍及體斜長指標上均具有優(yōu)勢,其性能均高于T/T型個體攜帶者[52]。

    長鏈?;o酶A合成酶1(Long chain acyl-CoA synthetase 1, ACSL1)被證實廣泛參與甘油三酯、磷脂、膽固醇酯的合成及脂肪酸氧化作用[53-55]。眾所周知,鮮乳中最重要指標之一的乳脂,其98%~99%是甘油三酯,主要由甘油和長鏈脂肪酸組成。有研究表明小鼠肝臟細胞及脂肪細胞中過表達ACSL1可增加長鏈脂肪酸轉化為甘油三酯[56],故而理論上該基因能夠間接提高乳脂率。在家養(yǎng)動物中也發(fā)現(xiàn)ACSL1被定位到影響豬(Sus scrofa)肉中脂肪酸組成的QTL區(qū)域[57]。另外,有研究發(fā)現(xiàn)ACSL1基因多態(tài)性與肉牛骨骼肌中脂肪酸組成和比例呈顯著相關[58]。尤其,新近研究發(fā)現(xiàn)ACSL1基因區(qū)域的大量遺傳變異與荷斯坦奶牛的產(chǎn)奶量的性狀呈顯著相關,包括日產(chǎn)奶量(TDMY)、脂肪含量(FC)、蛋白質(zhì)含量(PC)和體細胞評分(SCS)[31]。

    牦牛上,已有報道稱位于ACSL1基因啟動子區(qū)存在2個SNP位點(ACSL1_A2079T和ACSL1_G2409A)并被證實與甘南牦牛的乳蛋白率及總固體物質(zhì)含量、乳脂率等乳性狀顯著相關,且攜帶ACSL1_A2079T的T/A基因型個體的乳白蛋白率高于A/A型個體,攜帶ACSL1_G2409A位點的A/A型個體乳脂率和總固體含量指標優(yōu)于其他基因型個體[59]。本研究的阿里牦牛群體中CSL1_A2079T位點攜帶T/A者占總群體的29.0323%,另外阿里牦牛攜帶ACSL1_G2409A位點的A/A基因型個體占種群11.2903%。這表明暗示阿里牦牛群體內(nèi)具有較高頻率ACSL1基因與產(chǎn)乳性能及乳品質(zhì)候選標記的優(yōu)勢基因型。最后,本研究中全部個體均未在阿里牦牛群體內(nèi)顯著偏離哈代—溫伯格平衡,暗示了阿里牦牛歷史上沒有經(jīng)歷強烈的人工選擇。

    4 結 論

    研究結果顯示阿里牦牛群體在與生長及泌乳性狀相關基因的候選標記座位上攜帶高比例優(yōu)勢基因型,如Hesx1-T226C、MyoD1-C1710T及TMEM-18-C4447T,表明阿里牦牛具有優(yōu)秀的分子遺傳改良潛力。

    猜你喜歡
    牦牛阿里基因型
    美仁大草原的牦牛(外一章)
    散文詩(2021年22期)2022-01-12 06:13:54
    云上阿里
    炎黃地理(2021年1期)2021-06-08 00:27:03
    跟著牦牛去巡山
    辰辰帶你游阿里
    目前牦??谔阋叩脑\斷與防治
    阿里戰(zhàn)略
    阿里是個好榜樣
    西安地區(qū)育齡婦女MTHFRC677T基因型分布研究
    BAMBI基因敲除小鼠的繁育、基因型鑒定
    甘蔗黃葉病毒基因型研究進展
    中國糖料(2013年1期)2013-01-22 12:28:23
    久久99蜜桃精品久久| 在线观看免费高清a一片| 九九在线视频观看精品| 日韩视频在线欧美| 伊人久久国产一区二区| 啦啦啦啦在线视频资源| 99热6这里只有精品| 大香蕉97超碰在线| 亚洲成人手机| 最新中文字幕久久久久| 欧美三级亚洲精品| 亚洲国产精品999| 在线观看一区二区三区激情| 如何舔出高潮| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产精品久久久久久av不卡| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品三级大全| 久久人人爽人人爽人人片va| av免费在线看不卡| 亚洲av男天堂| 视频区图区小说| 国产精品无大码| 亚洲美女黄色视频免费看| 成人手机av| 十八禁高潮呻吟视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 一边亲一边摸免费视频| 欧美最新免费一区二区三区| 晚上一个人看的免费电影| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品午夜福利在线看| 久久女婷五月综合色啪小说| av专区在线播放| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品蜜桃在线观看| 婷婷色av中文字幕| a级毛色黄片| 日韩一区二区三区影片| 最近的中文字幕免费完整| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 大香蕉97超碰在线| 亚洲综合精品二区| 综合色丁香网| 精品一区二区免费观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 免费大片黄手机在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 一区二区三区乱码不卡18| 制服人妻中文乱码| 草草在线视频免费看| 国产黄色免费在线视频| 国产av码专区亚洲av| 亚洲精品一二三| 精品久久久噜噜| 18禁观看日本| 999精品在线视频| 一级黄片播放器| 久久韩国三级中文字幕| av天堂久久9| 日韩精品有码人妻一区| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产免费福利视频在线观看| 久久99一区二区三区| 天天操日日干夜夜撸| 超色免费av| 成人国产麻豆网| 日韩av免费高清视频| 视频区图区小说| 国产成人91sexporn| 国产一区二区在线观看日韩| 中文天堂在线官网| 99视频精品全部免费 在线| 色网站视频免费| 熟女电影av网| 色网站视频免费| 亚洲,欧美,日韩| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产成人freesex在线| 女性生殖器流出的白浆| 老司机影院毛片| 国产av码专区亚洲av| av.在线天堂| 美女大奶头黄色视频| freevideosex欧美| 在线观看免费日韩欧美大片 | 精品国产乱码久久久久久小说| 麻豆成人av视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲av综合色区一区| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲综合色惰| 免费观看av网站的网址| 蜜桃在线观看..| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲不卡免费看| 一个人免费看片子| 国产又色又爽无遮挡免| 91精品三级在线观看| 精品酒店卫生间| 插逼视频在线观看| 永久免费av网站大全| 久久久久久久久久久久大奶| a级毛片在线看网站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 天天操日日干夜夜撸| 女性生殖器流出的白浆| 久久久国产精品麻豆| h视频一区二区三区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久精品久久久久久久性| 日韩一区二区三区影片| 国产精品一二三区在线看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲人与动物交配视频| 久久精品夜色国产| 婷婷成人精品国产| 韩国高清视频一区二区三区| 一本一本综合久久| 最近手机中文字幕大全| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲精品久久午夜乱码| 嫩草影院入口| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲国产色片| 国产精品久久久久久精品古装| 丝瓜视频免费看黄片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品人妻久久久久久| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 日韩中文字幕视频在线看片| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品欧美亚洲77777| 精品久久国产蜜桃| 一级二级三级毛片免费看| 丝袜美足系列| 久久久久网色| 亚洲精品成人av观看孕妇| 妹子高潮喷水视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日本黄色日本黄色录像| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 黄色配什么色好看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | av电影中文网址| 青青草视频在线视频观看| 国精品久久久久久国模美| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 视频区图区小说| 日本午夜av视频| 91国产中文字幕| 爱豆传媒免费全集在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜91福利影院| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 夜夜爽夜夜爽视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲av.av天堂| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 在线观看人妻少妇| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美97在线视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 人妻 亚洲 视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产成人精品福利久久| 黑丝袜美女国产一区| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲美女黄色视频免费看| 色婷婷av一区二区三区视频| 最近最新中文字幕免费大全7| 少妇的逼好多水| av国产精品久久久久影院| 少妇熟女欧美另类| 男女无遮挡免费网站观看| 日韩av不卡免费在线播放| 成人国产av品久久久| 精品人妻熟女av久视频| 午夜精品国产一区二区电影| 男女无遮挡免费网站观看| 成人免费观看视频高清| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产成人精品一,二区| 国产在线视频一区二区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产成人免费观看mmmm| 综合色丁香网| 成年人午夜在线观看视频| 丝袜在线中文字幕| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久午夜欧美精品| 国产伦精品一区二区三区视频9| 伦理电影免费视频| 久久韩国三级中文字幕| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 中国三级夫妇交换| 最近中文字幕高清免费大全6| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| a级毛片免费高清观看在线播放| av又黄又爽大尺度在线免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲综合精品二区| 99九九在线精品视频| 人妻系列 视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产成人一区二区在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品乱久久久久久| av国产精品久久久久影院| 韩国av在线不卡| h视频一区二区三区| 熟女电影av网| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品av麻豆狂野| 婷婷成人精品国产| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲成人手机| 亚洲不卡免费看| 99久久精品一区二区三区| 伦理电影大哥的女人| 国产极品天堂在线| 777米奇影视久久| 男女国产视频网站| 毛片一级片免费看久久久久| 久久久久网色| 亚洲av综合色区一区| 久久久国产欧美日韩av| 午夜视频国产福利| 亚洲av二区三区四区| freevideosex欧美| 亚洲av.av天堂| 视频中文字幕在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产精品久久久久久久久免| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 国产免费现黄频在线看| 自线自在国产av| 色94色欧美一区二区| 制服诱惑二区| 少妇的逼好多水| 一本一本综合久久| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久久国产精品麻豆| 看非洲黑人一级黄片| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品少妇内射三级| 成年人午夜在线观看视频| av线在线观看网站| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 永久免费av网站大全| 日韩中字成人| 色视频在线一区二区三区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| av在线播放精品| 国产av国产精品国产| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| av福利片在线| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久亚洲国产成人精品v| 天天操日日干夜夜撸| 少妇的逼好多水| 国产片特级美女逼逼视频| 国产淫语在线视频| 国产精品国产av在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 国产成人精品久久久久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 日韩免费高清中文字幕av| 赤兔流量卡办理| 婷婷色综合大香蕉| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品久久久久久av不卡| 在线观看www视频免费| 国产精品久久久久久久久免| 免费少妇av软件| 熟女av电影| 久久女婷五月综合色啪小说| a级毛片在线看网站| 日韩av免费高清视频| 国内精品宾馆在线| 91精品国产九色| 免费大片黄手机在线观看| 欧美bdsm另类| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 嘟嘟电影网在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲熟女精品中文字幕| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久99热6这里只有精品| 色5月婷婷丁香| 国产精品一国产av| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 全区人妻精品视频| 成人国语在线视频| 精品国产国语对白av| 男人添女人高潮全过程视频| 两个人免费观看高清视频| 欧美xxⅹ黑人| 爱豆传媒免费全集在线观看| av电影中文网址| av在线app专区| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久久久久伊人网av| 久久午夜福利片| 中文字幕免费在线视频6| 国产免费现黄频在线看| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 妹子高潮喷水视频| 熟女av电影| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| av黄色大香蕉| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产亚洲欧美精品永久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产毛片在线视频| 欧美bdsm另类| 性色avwww在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 婷婷色麻豆天堂久久| 97超视频在线观看视频| 插阴视频在线观看视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国内精品宾馆在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 日韩一本色道免费dvd| 国产精品免费大片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品酒店卫生间| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 高清在线视频一区二区三区| 国产成人精品无人区| 91久久精品国产一区二区三区| 人妻系列 视频| 久久久久国产网址| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲欧美清纯卡通| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲在久久综合| 日韩av不卡免费在线播放| 精品午夜福利在线看| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 美女中出高潮动态图| 国产熟女欧美一区二区| 97在线视频观看| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 各种免费的搞黄视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 九九爱精品视频在线观看| 国产成人精品久久久久久| 在线观看www视频免费| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久久久久久久大av| 成年人午夜在线观看视频| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲av成人精品一二三区| 久久国内精品自在自线图片| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 18禁在线播放成人免费| 国产在视频线精品| 国产av一区二区精品久久| a级毛片在线看网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 日韩免费高清中文字幕av| 久久久久久人妻| 国产精品99久久久久久久久| 99国产综合亚洲精品| 桃花免费在线播放| 免费观看的影片在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久99蜜桃精品久久| 一二三四中文在线观看免费高清| av线在线观看网站| 成人毛片60女人毛片免费| av天堂久久9| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲经典国产精华液单| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲在久久综合| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 一本大道久久a久久精品| 两个人免费观看高清视频| 中文欧美无线码| 高清不卡的av网站| 男人添女人高潮全过程视频| 久久99蜜桃精品久久| 能在线免费看毛片的网站| 国产av一区二区精品久久| 人人妻人人澡人人看| 久久久久精品性色| 免费看光身美女| 国产亚洲欧美精品永久| 久久精品国产亚洲网站| 91精品三级在线观看| 日本wwww免费看| 国内精品宾馆在线| 国产成人一区二区在线| 少妇人妻 视频| 99久国产av精品国产电影| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 又大又黄又爽视频免费| 午夜老司机福利剧场| 午夜免费观看性视频| 免费观看a级毛片全部| av电影中文网址| 18+在线观看网站| 亚洲美女视频黄频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 少妇精品久久久久久久| 人妻一区二区av| 日本wwww免费看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 精品久久久久久电影网| 婷婷色av中文字幕| 午夜av观看不卡| 国产乱来视频区| 只有这里有精品99| 久久久久国产精品人妻一区二区| 在线天堂最新版资源| 最近手机中文字幕大全| 久久国产精品大桥未久av| 国产成人免费无遮挡视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 简卡轻食公司| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产黄频视频在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 在线观看免费视频网站a站| 七月丁香在线播放| 国产精品久久久久久久久免| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久97久久精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲国产精品专区欧美| 一边摸一边做爽爽视频免费| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 黄色怎么调成土黄色| 精品视频人人做人人爽| 草草在线视频免费看| 精品人妻熟女av久视频| 免费高清在线观看日韩| 国产精品一区二区在线不卡| 精品亚洲成a人片在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 91精品国产九色| 蜜臀久久99精品久久宅男| 免费日韩欧美在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日韩一本色道免费dvd| 国产精品一区二区在线不卡| 久久精品国产a三级三级三级| 免费高清在线观看视频在线观看| 丰满少妇做爰视频| 日本黄色日本黄色录像| 中国国产av一级| 午夜免费男女啪啪视频观看| 少妇人妻久久综合中文| 51国产日韩欧美| 亚洲成人av在线免费| 人人澡人人妻人| 日韩电影二区| 少妇人妻久久综合中文| 91精品国产九色| 亚洲精品亚洲一区二区| 我要看黄色一级片免费的| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产视频首页在线观看| 国产69精品久久久久777片| 国产熟女欧美一区二区| 午夜免费鲁丝| 日韩电影二区| 美女主播在线视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 熟女电影av网| 综合色丁香网| 成年女人在线观看亚洲视频| 少妇人妻 视频| 91精品国产九色| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产片特级美女逼逼视频| 久久国产精品大桥未久av| 色视频在线一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲图色成人| 精品国产乱码久久久久久小说| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 天堂中文最新版在线下载| 视频中文字幕在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久精品国产亚洲av天美| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 满18在线观看网站| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲经典国产精华液单| 精品少妇久久久久久888优播| 蜜桃在线观看..| √禁漫天堂资源中文www| 国产高清三级在线| 亚洲怡红院男人天堂| 自线自在国产av| 美女主播在线视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 曰老女人黄片| 免费观看在线日韩| 免费观看的影片在线观看| 亚洲成人av在线免费| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产在线免费精品| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产毛片在线视频| 久久影院123| 日韩在线高清观看一区二区三区| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美一级a爱片免费观看看| 中国三级夫妇交换| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产一区二区三区av在线| 国产精品一区www在线观看| 91久久精品电影网| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲性久久影院| 久久午夜综合久久蜜桃| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲av成人精品一二三区| 内地一区二区视频在线| av播播在线观看一区| 亚洲人与动物交配视频| freevideosex欧美| 亚洲精品日本国产第一区| 免费高清在线观看日韩| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 国产日韩欧美亚洲二区| 又大又黄又爽视频免费| 国产精品蜜桃在线观看| 一区二区三区精品91| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久免费观看电影| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久热精品热| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲精品视频女| 亚洲精品成人av观看孕妇| 最新的欧美精品一区二区| 最近的中文字幕免费完整| 视频在线观看一区二区三区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 只有这里有精品99| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲天堂av无毛| 婷婷色av中文字幕| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 久久av网站| av国产精品久久久久影院| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产黄片视频在线免费观看| 久久鲁丝午夜福利片| 国产成人免费无遮挡视频| 久久久国产精品麻豆| 好男人视频免费观看在线| 免费观看av网站的网址| 大香蕉97超碰在线| 永久免费av网站大全| 成年人午夜在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av|