張淑芳 崔婷婷
摘 要:目的:利用高效液相色譜法測定含乳飲料中三聚氰胺非法添加劑的含量。方法:利用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)、可變波長紫外檢測器(Variable Wavelength Ultraviolet Detector,VWD),設(shè)置進(jìn)樣量20 μL、流速1.0 mL/ min、檢測波長240 nm,以離子對試劑緩沖液-乙腈(90∶10,V/V)為流動相,采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。結(jié)果:三聚氰胺非法添加劑可以得到很好的分離,在1.0~20.0 μg/mL具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99,加標(biāo)回收率為87.974%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)中高效液相色譜法檢測含乳飲料中三聚氰胺非法添加劑,結(jié)果重復(fù)性好,簡單方便,適用于食品中含乳飲料的三聚氰胺非法添加劑的含量測定。
關(guān)鍵詞:高效液相色譜;三聚氰胺;含乳飲料
Determination of Melamine in Milk Beverage by HPLC
ZHANG Shufang1, CUI Tingting2*
(1.Ulanqab Product Quality Measurement, Inspection and Testing Center, Ulanqab 012000, China; 2.Ulanqab Inspection and Testing Center, Ulanqab 012000, China)
Abstract: Objective: To determine the content of melamine illegal additive in milk beverage by HPLC. Method: Agilent ZORBAX SB-C18 column (250 mm × 4.6 mm,5 μm) variable wavelength ultraviolet detector was used. The injection volume was 20 μL, the flow rate was 1.0 mL/min, the detection wavelength was 240 nm, and the ion-pairing reagent buffer-acetonitrile (90∶10, V/V) was used as the mobile phase, and the quantitative analysis was carried out by the external standard method. Result: The illegal additives of melamine could be well separated, with a good linear relationship between 1.0 and 20.0 μg/mL, the correlation coefficients R2 were all greater than 0.99, the standard addition recovery was 87.974%, and the relative standard deviation was less than 10%. Conclusion: In this experiment, high performance liquid chromatography was used to detect illegal melamine additives in milk-containing beverages. The results were reproducible, simple and convenient, and it was suitable for the determination of melamine illegal additives in milk-containing beverages in food.
Keywords: high performance liquid chromatography; melamine; milk beverage
三聚氰胺(Melamine)是一種白色粉末狀物質(zhì),是一種化工原料,用于制造三聚氰胺樹脂,嚴(yán)禁人為添加到食品中[1]。三聚氰胺雖有低毒性,但同時(shí)攝入三聚氰胺和三聚氰酸會導(dǎo)致嚴(yán)重的腎毒性[2-3]。在傳統(tǒng)的檢驗(yàn)檢測方法中,主要采用凱氏定氮法對待測物質(zhì)進(jìn)行含氮量的測定,最終確定蛋白質(zhì)的含量。這種檢驗(yàn)檢測方法只能測得含氮量的多少,忽略了氮的來源和種類,一些不法商家添加三聚氰胺,從而提高含氮量,造成食品中蛋白質(zhì)含量高的假象。此類不合格食品被人食用后嚴(yán)重影響人體健康,在社會上也造成了惡劣影響[4]。本實(shí)驗(yàn)中,利用高效液相色譜儀檢測三聚氰胺的含量,為保障食品安全提供一定的參考。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
6種含乳飲料樣品隨機(jī)市購;三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品(純度為99.5%,壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司);甲醇(色譜純,天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司);乙腈(色譜純,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司);檸檬酸(河北省保定化學(xué)試劑廠);辛烷磺酸鈉(色譜純,天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司);試驗(yàn)用水為自制超純水。
1.2 儀器與設(shè)備
Agilent 1260高效液相色譜儀系統(tǒng),配有可變波長紫外檢測器(Variable Wavelength Ultraviolet Detector,VWD);電子分析天平(賽多利斯);超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1 色譜條件
色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);進(jìn)樣量:20μL;流速1.0 mL/min;檢測波長:240 nm;離子對試劑緩沖液-乙腈(90∶10,V/V)為流動相。
1.3.2 樣品處理
按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》(GB/T 22388—2008)第一法處理樣品[5]。
1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶液稀釋,得到
1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL及20.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
2 結(jié)果與分析
2.1 線性范圍
利用上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以峰面積y為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)x繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為y=61.304 179 9x-36.316 309、相關(guān)系數(shù)為0.999 89、線性范圍為1.0~20.0 μg/mL。三聚氰胺的相關(guān)系數(shù)R2大于0.99,具有良好的線性關(guān)系。
2.2 精密度試驗(yàn)
取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液,各進(jìn)樣6次,計(jì)算精密度,見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、
5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.15%、8.87%、4.04%、2.56%及2.53%,均小于10%,實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好,精密度符合要求。
2.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)
取空白樣品,加入已知濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液,測3次,結(jié)果如表2。由表2可知,三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均回收率為87.974%,準(zhǔn)確度好。
2.4 部分市售樣品檢測
如圖2所示,三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間為20.963 min。隨機(jī)選取部分市售含乳飲料樣品6種,按照上述的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。圖3是該6種市售含乳飲料樣品其中一種三聚氰胺色譜圖,在20.963 min時(shí),沒有任何峰出現(xiàn),說明該樣品不含三聚氰胺。其他5個(gè)樣品圖和圖3相似,都沒有在20.963 min出現(xiàn)峰。結(jié)果表明,這6種含乳飲料樣品均沒有非法添加劑三聚氰胺檢出,符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。該方法簡單方便,可以用于含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺的檢測。
3 結(jié)論
本文利用高效液相色譜法檢測含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺,該方法簡單方便,重復(fù)性與準(zhǔn)確度好,方便實(shí)驗(yàn)室檢測含乳飲料中非法添加劑三聚氰胺。
參考文獻(xiàn)
[1]王吉河,李卿沛.高效液相色譜法測定牛奶中三聚氰胺含量的不確定度評定[J].農(nóng)業(yè)科技與信息,2019(20):56-58.
[2]林曉珊,吳惠勤,黃曉蘭,等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定乳制品中三聚氰胺及其3種類似物[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2014,35(6):537-543.
[3]栗建輝,趙真,李玉蘭,等.三聚氰胺及其同系物三聚氰酸毒性的研究概況[J].臨床薈萃,2011,26(5):457-460.
[4]朱曉晨.高效液相色譜法在乳制品三聚氰胺含量檢測中的應(yīng)用淺析[J].山東工業(yè)技術(shù),2015(9):270-271.
[5]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法:GB/T 22388—2008[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.