高海拔大馬士革玫瑰的黃酮類化學(xué)成分

劉夢(mèng)影, 俞雅芮, 黃 嬌, 張 藝, 黃 靜*

(1. 四川大學(xué) 華西藥學(xué)院,四川 成都 610041； 2. 成都中醫(yī)藥大學(xué) 民族醫(yī)藥學(xué)院,四川 成都 610041)

薔薇科(Rosaceae)薔薇屬(Rosa)植物大馬士革玫瑰(Rosadamascena)是世界公認(rèn)的優(yōu)質(zhì)玫瑰品種,具有大的觀賞和藥用價(jià)值。大馬士革玫瑰精油具有舒緩鎮(zhèn)靜[1]、抗菌、抗炎、抗氧化和抗血栓形成的藥理活性[2],其非揮發(fā)性提取物具有止咳、降血糖、抗衰老、肝保護(hù)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制作用等[3]。然而,上述研究的原料均為中低海拔(500～1500 m)地區(qū)栽培的大馬士革玫瑰[4],并且有研究指出海拔高度對(duì)大馬士革玫瑰葉片中葉綠素含量[5]及甲醇提取物抗氧化活性[6]有顯著影響。因此,本研究以高海拔大馬士革玫瑰為研究對(duì)象,探究其化學(xué)成分。

本文從高海拔大馬士革玫瑰花蕾的95%乙醇提取物中分離得到了9個(gè)黃酮醇類化合物(1,3,5～11),以及兩個(gè)黃酮類化合物(2和4),分別鑒定為5,7-二羥基-3,6,4′-三甲氧基黃酮醇(1)、 5,7-二羥基-6,4′-二甲氧基黃酮(2)、 5,7,4′-三羥基-3,6-二甲氧基黃酮醇(3)、 5,7-二羥基-6,8,4′-三甲氧基黃酮(4)、 5,4′-二羥基-3,6,7-三甲氧基黃酮醇(5)、 5,7-二羥基-3,6,8,4′-四甲氧基黃酮醇(6)、 8-甲氧基取代山奈酚(7)、山奈酚(8)、槲皮素(9)、槲皮素 3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷(10)和銀鍛苷(11)。化合物1～5為首次從薔薇屬植物中分離得到,化合物1～7、10、11為首次從大馬士革玫瑰中分離得到(Chart 1)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Bruker AV-400 MHz型核磁共振儀；GL-3000制備型高效液相色譜儀；Agela Technologies C18型反相柱；GF254型薄層色譜硅膠、G型柱色譜硅膠；柱層析聚酰胺。

實(shí)驗(yàn)所用植物材料于2020年06月購自四川省鹽源縣玫瑰基地,經(jīng)四川大學(xué)華西藥學(xué)院天然藥物學(xué)系黃靜教授鑒定為大馬士革玫瑰Rosedamascena的花蕾,憑證標(biāo)本(MG202006)現(xiàn)存于四川大學(xué)天然藥物化學(xué)系；其余所用試劑均為分析純或化學(xué)純。

1.2 提取分離

取干燥大馬士革玫瑰花蕾4.0 kg,粉碎后用95%乙醇連續(xù)回流提取2 h,過濾,濾液減壓濃縮得總浸膏1.0 kg；總浸膏加入丙酮(10 L),加熱至56 ℃溶解,過濾,濾液減壓濃縮得丙酮浸膏400.0 g。丙酮浸膏(400.0 g)經(jīng)硅膠柱層析純化(梯度洗脫劑：石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮和甲醇),TLC檢查并合并相同部分,得到6部分(Frs.1～6)。 Fr.3經(jīng)硅膠柱層析(梯度洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1～0/1,V/V)純化得8部分(Frs.3-1～3-8)； Fr.3-4先后經(jīng)聚酰胺柱層析、反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱,依次得到化合物1(175.0 mg),2(17.0 mg),3(81.0 mg),4(16.0 mg),5(67.0 mg),6(12.0 mg)和7(3.0 mg)。 Fr.4經(jīng)硅膠柱層析,石油醚-乙酸乙酯(8:1～0:1)梯度洗脫,得7部分(Frs.4-1～4-7)； Fr.4-6先后經(jīng)聚酰胺柱層析得5部分(Frs.4-6-1～4-6-5)； Fr.4-6-2經(jīng)C18反相柱、反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱,得化合物8(87.0 mg)和9(35.0 mg)。 Fr.4-6-3經(jīng)C18反相柱、反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱,得化合物10(8.0 mg)和11(5.0 mg)。

1： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了1組活潑氫信號(hào)：δH12.91(1H, s, 5-OH)； 1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH8.06(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和7.01(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1個(gè)芳香氫單峰信號(hào)：δH6.54(1H, s, 8-H)； 3組甲氧基的氫信號(hào)：δH3.06(3H, s, C4′-OCH3),2.98(3H, s, C6-OCH3)和2.76(3H, s, C3-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC155.2(C2)和138.5(C3)； 1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC179.3(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC152.3(C5), 130.2(C6), 156.3(C7), 93.3(C8), 151.9(C9), 106.3(C10), 122.9(C1′), 130.3(C2′), 114.2(C3′), 161.8(C4′), 114.2(C5′)和130.3(C6′)； 3個(gè)甲氧基碳信號(hào)：δC60.3(C3-OCH3), 61.0(C6-OCH3)和55.6(C4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致,故鑒定1為5,7-二羥基-3,6,4′-三甲氧基黃酮醇。

2： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了2組活潑氫信號(hào)：δH13.01(1H, s, 5-OH)和10.70(1H, s, 7-OH)；1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：

Chart 1

δH8.00(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和7.07(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 2個(gè)芳香氫單峰信號(hào)：δH6.83(1H, s, 3-H)和6.59(1H, s, 8-H)； 2個(gè)甲氧基氫信號(hào)：δH3.83(3H, s, 4′-OCH3)和3.74(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC163.3(C2)和103.1(C3)； 1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC182.2(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC152.8(C5), 131.4(C6), 157.4(C7),94.3(C8), 152.4(C9), 104.2(C10),122.9(C1′),128.3(C2′), 114.6(C3′), 162.3(C4′), 114.6(C5′)和128.3(C6′)；2個(gè)甲氧基碳信號(hào)：δC59.9(C6-OCH3)和55.5(C4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致,故鑒定2為5,7-二羥基-6,4′-二甲氧基黃酮。

3： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.77(H, s, 5-OH)和10.45(H, s, 7-OH)； 1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH7.93(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和6.94(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)；1個(gè)芳香氫單峰信號(hào)：δH6.91(1H, s, 8-H)； 2個(gè)甲氧基氫信號(hào)：δH3.77(3H, s, 3-OCH3)和3.75(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC155.7(C2)和137.3(C3)； 1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC178.2(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC151.6(C5), 131.2(C6), 157.4(C7), 91.0(C8), 151.5(C9), 104.6(C10), 120.6(C1′), 130.1(C2′), 115.7(C3′), 160.3(C4′), 115.7(C5′)和130.1(C6′)； 2個(gè)甲氧基碳信號(hào)：δC59.7(C3-OCH3)和60.0(C6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致,故鑒定3為5,7,4′-三羥基-3,6-二甲氧基黃酮醇。

4： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz ,DMSO-d6)顯示了1個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.76(H, s, 5-OH)； 1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH8.02(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和7.14(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1個(gè)芳香氫單峰信號(hào)：δH6.87(1H, s, 3-H)； 3個(gè)甲氧基氫信號(hào)：δH3.87(3H, s, 4′-OCH3), 3.85(3H, s, 8-OCH3)和3.78(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC163.1(C2)和103.0(C3)； 1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC182.2(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC148.3(C5), 131.5(C6), 150.9(C7), 127.9(C8), 145.4(C9), 102.9(C10), 122.9(C1′), 128.1(C2′), 114.7(C3), 162.3(C4′), 114.7(C5′)和128.1(C6′)； 3個(gè)甲氧基碳信號(hào)：δC60.1(C6-OCH3), 61.2(C8-OCH3)和55.5(C4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致,故鑒定4為5,7-二羥基-6,8,4′-三甲氧基黃酮。

5： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.63(H, s, 5-OH)和10.30(1H, s, 4′-OH)； 1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH7.99(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H), 6.96(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1個(gè)芳香氫單峰信號(hào)：δH6.91(1H, s, 8-H)； 3組甲氧基氫信號(hào)：δH3.92(3H, s, 3-OCH3), 3.80(3H, s, 6-OCH3)和3.74(3H, s, 7-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC158.6(C2)和137.6(C3)； 1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC178.2(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC151.7(C5), 131.6(C6), 155.9(C7), 91.4(C8), 151.6(C9), 105.5(C10), 120.5(C1′), 130.2(C2′), 115.6(C3′), 160.3(C4′), 115.6(C5′)和130.2(C6′)； 3個(gè)甲氧基碳信號(hào)：δC59.6(C3-OCH3), 60.0(C6-OCH3)和56.5(C7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致,故鑒定5為5,4′-二羥基-3,6,7-二甲氧基黃酮醇。

6： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了1個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.47(H, s, 5-OH)； 1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH8.04(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H), 7.17(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 4個(gè)甲氧基氫信號(hào)：δH3.86(3H, s, 4′-OCH3), 3.84(3H, s, 3-OCH3), 3.80(3H, s, 8-OCH3)和3.78(3H, s, 6-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC155.1(C2)和137.6(C3)；1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC178.4(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC147.9(C5), 131.4(C6), 150.9(C7), 127.8(C8), 144.6(C9), 103.5(C10), 122.3(C1′), 129.8(C2′), 114.4(C3′), 161.4(C4′),114.4(C5′)和129.8(C6′)；4個(gè)甲氧基碳信號(hào)：δC59.7(C3-OCH3),60.2(C6-OCH3), 61.2(C8-OCH3)和55.4(C4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致,故鑒定6為5,7-二羥基-3,6,8,4′-四甲氧基黃酮醇。

7： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了4個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.16(1H, s, 5-OH), 10.65(1H, s, 3-OH), 10.13(1H, s, 7-OH)和9.44(1H, s, 4′-OH)； 1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH8.06(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和6.96(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1個(gè)芳香氫單峰信號(hào)：δH6.27(1H, s, 6-H)； 1個(gè)甲氧基的氫信號(hào)：δH3.82(3H, s, 8-OCH3)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC146.7(C2)和135.7(C3)； 1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC176.1(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC155.4(C5), 98.3(C6), 156.4(C7), 127.4(C8), 148.4(C9), 102.9(C10), 121.8(C1′), 129.3(C2′), 115.5(C3′), 159.2(C4′), 115.5(C5′)和129.3(C6′)； 1個(gè)甲氧基碳信號(hào)：δC60.9(C8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致,故鑒定7為8-甲氧基山奈酚。

8： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了4個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.50(1H, s, 5-OH), 10.77(1H, s, 3-OH), 10.13(1H, s, 7-OH)和9.39(1H, s, 4′-OH)； 1組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH8.06(2H, d,J=8.8 Hz, 2′-H, 6′-H)和6.94(2H, d,J=8.8 Hz, 3′-H, 5′-H)； 1組間位偶合的芳香氫信號(hào)：δH6.45(1H, d,J=1.7 Hz, 8-H)和6.21(1H, d,J=1.7 Hz, 6-H)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC146.8(C2)和135.6(C3)； 1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC175.9(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC160.7(C5), 98.2(C6), 163.9(C7), 93.5(C8), 156.2(C9), 103.0(C10), 121.6(C1′), 129.5(C2′), 115.4(C3′), 159.2(C4′), 115.4(C5′)和129.5(C6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致,故鑒定8為山奈酚。

9： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了5個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.49(1H, s, 5-OH), 10.77(1H, s, 7-OH), 9.56～9.35(3H, brs, 3-OH, 3′-OH, 4′-OH)；1組ABX偶合的芳香氫信號(hào)：δH7.62(1H, d,J=2.0 Hz, 2′-H), 7.54(1H, dd,J=8.8 Hz, 2.0 Hz, 6′-H)和6.88(1H, d,J=8.8 Hz, 5′-H)； 1組間位偶合的芳香氫信號(hào)：δH6.40(1H, d,J=1.2 Hz, 6-H)和6.18(1H, d,J=1.2 Hz, 8-H)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC147.2(C2)和136.1(C3)；1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC176.3(C4)；12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC161.1(C5), 98.6(C6), 164.3(C7), 93.8(C8), 156.5(C9), 103.4(C10), 122.4(C1′), 115.5(C2′), 145.5(C3′), 148.1(C4′), 116.0(C5′)和120.4(C6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致,故鑒定9為槲皮素。

10： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)顯示了4個(gè)活潑氫信號(hào)：δH12.65(1H, s, 5-OH), 10.87(1H, brs, 7-OH), 9.72(1H, brs, 4′-OH)和9.26(1H, brs, 3′-OH)； 1組ABX偶合的芳香氫信號(hào)：δH7.56(1H, d,J=8.4, 2.0 Hz, 6′-H), 7.49(1H, d,J=2.0 Hz, 2′-H)和6.86(1H, d,J=8.4 Hz, 5′-H)； 1組間位偶合的芳香氫信號(hào)：δH6.42(1H, d,J=2.1 Hz, 8-H)和6.21(1H, d,J=2.1 Hz, 6-H)； 1組糖端基的氫信號(hào)：δH5.51(1H, d,J=4.4 Hz, 1″-H)。13C NMR(100 MHz, DMSO-d6)顯示了2個(gè)烯碳信號(hào)：δC157.0(C2)和133.4(C3)；1個(gè)羰基碳信號(hào)：δC177.7(C4)； 12個(gè)芳香碳信號(hào)：δC161.2(C5), 98.7(C6), 164.2(C7), 93.5(C8), 156.3(C9), 104.0(C10), 121.7(C1′), 115.5(C2′), 145.1(C3′), 148.5(C4′), 115.5(C5′)和120.9(C6′)； 1組五碳糖的碳信號(hào)：δC107.8(C1″), 82.1(C2″), 76.9(C3″), 85.8(C4″)和60.6(C5″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致,故鑒定10為槲皮素 3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷。

11： 黃色粉末狀固體,10%硫酸乙醇顯黃色,HCl-Mg反應(yīng)呈現(xiàn)陽性,FeCl3-K3[Fe(CN)6]反應(yīng)呈現(xiàn)陽性。1H NMR(400 MHz, CD3OD)顯示了2組AA′BB′偶合的芳香氫信號(hào)：δH7.98(2H, d,J=8.7 Hz, 2′-H, 6′-H), 6.81(2H, d,J=8.7 Hz, 3′-H, 5′-H)和7.30(2H, d,J=8.9 Hz, 2?-H, 6?-H), 6.79(2H, d,J=8.9 Hz, 4?-H, 5?-H)；1組間位偶合的芳香氫信號(hào)：δH6.30(1H, d,J=2.0 Hz, 8-H)和6.13(1H, d,J=2.0 Hz, 6-H)；1組反式烯烴氫信號(hào)：δH7.40(1H, d,J=15.9 Hz, 3?-H)和6.07(1H, d,J=15.9 Hz, 2?-H)； 1組糖端基的氫信號(hào)：δH5.25(1H, d,J=7.5 Hz, 1″-H)。13C NMR(100 MHz, CD3OD)顯示了4個(gè)烯碳信號(hào)：δC159.3(C2),135.1(C3), 114.7(C7?), 146.5(C8?)；2個(gè)羰基碳信號(hào)：δC179.4(C4), 168.8(C9?)； 18個(gè)芳香碳信號(hào)：δC158.3(C5), 94.81(C6), 165.8(C7), 99.9(C8), 162.9(C9), 105.5(C10), 122.6(C1′), 132.2(C2′), 116.7(C3′), 161.5(C4′), 116.7(C5′), 132.2(C6′), 127.0(C1?), 131.1(C2?), 116.0(C3?), 161.1(C4?), 116.0(C5?)和131.1(C6?)； 1組六碳糖的碳信號(hào)：δC103.9(C1″), 77.9(C2″), 75.7(C3″), 71.7(C4″), 75.7(C5″)和64.3(C6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致,故鑒定11為銀鍛苷。

從高海拔大馬士革玫瑰中分離得到了9個(gè)黃酮醇類化合物,以及兩個(gè)黃酮類化合物,其中化合物1～5為首次從薔薇屬植物中分離得到,化合物1～7、10、11為首次從大馬士革玫瑰中分離得到。在分離得到的11個(gè)個(gè)黃酮類化合物中,有9個(gè)化合物以前未在大馬士革玫瑰中分離得到過,推測(cè)可能是種植海拔影響了其生長(zhǎng)代謝,使其化學(xué)成分與中低海拔大馬士革玫瑰相比略有差異,但具體的影響過程還有待研究。