不同殺菌劑對小麥赤霉病的室內(nèi)毒力測定及配比試驗

鄭 研 ，王理想 ，吳怡燃 ，廖 燦 ，何海燕，何 明 ，王書祥 ，李俊凱 ，b

（長江大學(xué)，a.農(nóng)學(xué)院；b.農(nóng)藥研究所，湖北 荊州 434025）

小麥赤霉?。‵usariumhead blight，F(xiàn)HB）是由鐮刀菌屬（Fusariumspp.）等多種真菌引起的真菌病害，常出現(xiàn)于溫暖潮濕的溫帶地區(qū)［1］。20 世紀(jì)以來，受全球氣候變暖、秸桿還田等因素的影響，小麥赤霉病在長江中下游和黃淮海等地區(qū)頻繁流行，成為該地區(qū)最具危害的真菌病害之一，對國家糧食安全危害巨大［2］。小麥感病后出現(xiàn)苗腐、稈腐和穗腐等癥狀，其中以穗腐危害最為嚴(yán)重，病穗產(chǎn)生脫氧雪腐鐮刀烯醇（Deoxynivalenol，DON）、赤霉烯酮（Zearalenone）等已知次生代謝物，多數(shù)代謝物能抑制小麥芽鞘的生長，嚴(yán)重時可使小麥產(chǎn)量減產(chǎn)10%～30%甚至絕收［3，4］。其中 DON 是中國小麥赤霉病病菌產(chǎn)生的主要毒素，該毒素不僅對小麥產(chǎn)生強(qiáng)抑制活性，而且還會造成食用病麥的人、畜發(fā)生腹瀉、嘔吐、流產(chǎn)等中毒反應(yīng)，威脅人、畜健康［5，6］。

國內(nèi)外防治小麥赤霉病的方法有很多，其中抗病育種可從根源上防治小麥赤霉病?，F(xiàn)階段中國栽培的主要品種中對小麥赤霉病有顯著抗性的品種較少［7］，其中揚麥33 為新審定的高抗赤霉病的一個新品種。近年含有芽孢桿菌屬、鏈霉菌屬等具有抑菌效果的微生物及其代謝物生物制劑受到人們的密切關(guān)注，因其殺菌譜較窄，不會對非靶標(biāo)生物造成明顯影響而備受歡迎，但大規(guī)模投入生產(chǎn)應(yīng)用仍需進(jìn)一步研究［8，9］。因此，目前化學(xué)防治仍然是實際生產(chǎn)過程中應(yīng)對小麥赤霉病危害的主要手段。

目前，中國針對小麥赤霉病的登記制劑共391個，其中單劑211 個，混劑180 個，涉及農(nóng)藥品種有效成分38 個，分為咪唑類、甲氧基丙烯酸酯類、氰基丙烯酸酯類等9 大類［10］。本研究選用不同種類的15 種殺菌劑原藥，采用菌絲生長抑制法對其進(jìn)行了室內(nèi)毒力測定，并從中篩選出低毒、殺菌效果更為突出的高效殺菌劑復(fù)配組合，從而為減緩常規(guī)殺菌劑對小麥赤霉病菌的抗藥性和減少農(nóng)藥使用劑量提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

本試驗所用禾谷鐮孢菌株（Fusarium graminearum）由長江大學(xué)植物病理實驗室提供。

1.2 供試藥劑

選擇生產(chǎn)上常規(guī)應(yīng)用的14 種殺菌劑原藥開展室內(nèi)篩選試驗：95%己唑醇原藥，連云港立本作物科技有限公司；98%戊唑醇原藥，江蘇龍燈化學(xué)有限公司；95%烯唑醇原藥、92%氟硅唑原藥，湖北玖豐隆化工有限公司；95%三唑醇原藥，湖北速普爾化工有限公司；96.6%苯醚甲環(huán)唑原藥，湖北雙焱化工有限公司；90%丙環(huán)唑原藥，溫州綠佳化工有限公司；97%丙硫菌唑原藥，湖北貓爾沃生物醫(yī)藥有限公司；92%吡唑醚菌酯原藥，河北銳藥生物科技有限公司；96%抑霉唑原藥，成都邁恩凱化工有限公司；95%咪鮮胺原藥，江蘇輝豐生物農(nóng)業(yè)股份有限公司；95%惡霉靈原藥，山東京博農(nóng)化有限公司；95%福美雙原藥，淄博兆凱商貿(mào)有限公司；98%拌種靈原藥，湖北鑫鳴泰化學(xué)有限公司。

1.3 試驗方法

對小麥赤霉病的室內(nèi)毒力測定，采取菌絲生長速率法［11］進(jìn)行篩選，計算14 種供試殺菌劑的抑制中濃度（EC50）。

菌絲生長速率抑制法：根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果選擇合適的5～7 個藥劑濃度，將配制好的供試樣品按比例加入滅菌冷卻至55 ℃的PDA 培養(yǎng)基，充分搖勻后倒入9 cm 的滅菌培養(yǎng)皿中，待其凝固接入7 mm 菌餅，每處理設(shè)3 次重復(fù)，封口后置于28 ℃恒溫箱培養(yǎng)。4 d 后采用十字交叉法測定菌落直徑，計算菌絲生長抑制率。

菌絲生長抑制率=（對照菌落生長直徑-處理菌落生長直徑）/（對照菌落生長直徑-菌餅直徑）×100%。

將菌落的生長抑制率換算成抑制幾率作為因變量（y），各藥劑濃度（mg/L）轉(zhuǎn)為以10 為底的對數(shù)值（x），并用DPS 軟件求出各供試藥劑的有效抑制中濃度EC50、相關(guān)系數(shù)（r）及毒力回歸方程［12］。

殺菌劑復(fù)配效果測定：根據(jù)單劑毒力測定結(jié)果，挑選出2 種藥劑96%抑霉唑和97%丙硫菌唑進(jìn)行混配［13］，有效成分配比為 1∶0、0∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5、1∶7（質(zhì)量比），每個配比配置成5 個濃度梯度。采用室內(nèi)菌絲生長速率抑制法測定殺菌組合物的菌絲生長抑制率、毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)（r）、有效抑制中濃度EC50。根據(jù) Sun 等［14］和 Wadley［15］的共毒系數(shù)法分別計算不同比例混配藥劑的增效系數(shù)（SR）和共毒系數(shù)（CTC）。

式中，A、B分別為96%抑霉唑和97%丙硫菌唑原藥，a、b分別為相應(yīng)單劑在混劑中含量的比率；當(dāng)SR≤0.5 時，表示該混劑呈現(xiàn)出拮抗作用；當(dāng)SR=0.5～1.5 時，表示該混劑呈現(xiàn)出加和作用法；當(dāng)SR≥1.5時，表示該混劑呈現(xiàn)出增效作用。

式中，A為96%抑霉唑（標(biāo)準(zhǔn)藥劑），B為97%丙硫菌唑，M為不同配比的混劑；A（TI）是指A藥劑的毒力指數(shù)，A（TI）=100；B（TI）為 B 藥劑的毒力指數(shù)；P（A）為A藥劑成分在M混劑中所占百分比；P（B）為B藥劑成分在M混劑所占百分比；M（ATI）是M混劑的實際毒力指數(shù)；M（TTI）是M 混劑的理論毒力指數(shù)；CTC為共毒系數(shù)。當(dāng)CTC＞120 為增效作用；CTC＜80 拮抗作用；80＜CTC＜120 為相加作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試殺菌劑對小麥赤霉病菌菌絲生長的影響

14 種殺菌劑均對小麥赤霉病菌呈現(xiàn)出一定的毒力，但不同殺菌劑之間的毒力差異較大，結(jié)果見表1。其中戊唑醇、烯唑醇、苯醚甲環(huán)唑、氟硅唑、咪鮮胺、抑霉唑?qū)Σ≡z生長的EC50為0.106 6～0.905 9 mg/L，均小于1.000 0 mg/L，表明小麥赤霉病菌對這6 種殺菌劑極為敏感；己唑醇、三唑醇、丙環(huán)唑、丙硫菌唑、吡唑醚菌酯的EC50為1.423 6～7.664 2 mg/L，均小于10.000 0 mg/L，表明小麥赤霉病菌對上述殺菌劑較為敏感；惡霉靈、福美雙、拌種靈的EC50分別是 17.343 8、11.290 1、84.518 8 mg/L，說明上述藥劑抑菌活性較差。

表1 14 種殺菌劑對禾谷鐮孢的毒力測定結(jié)果

2.2 2 種殺菌劑的混配試驗

將抑霉唑與丙硫菌唑分別進(jìn)行1∶0、0∶1、3∶1、5∶1、1∶1、1∶3、1∶5、1∶7 混配。經(jīng)過計算可知，1∶1、1∶3、1∶5、3∶1、1∶7 配比的SR＞1.5，CTC＞120，表示抑霉唑與丙硫菌唑在這5 種配比下均具有增效作用；其中 1∶3 和 1∶5 的SR分別為 2.69、4.18；CTC分別為269.33、417.58，表明這2 種配比下的混劑對禾谷鐮孢抑制作用明顯（表2）。

表2 抑霉唑與丙硫菌唑及其混劑對禾谷鐮孢的室內(nèi)毒力測定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

菌絲生長速率抑制法的毒力測定結(jié)果表明，14種殺菌劑對小麥赤霉病病菌的EC50大小順序為，咪鮮胺＜氟硅唑＜烯唑醇＜苯醚甲環(huán)唑＜戊唑醇＜抑霉唑＜己唑醇＜丙環(huán)唑＜三唑醇＜丙硫菌唑＜吡唑醚菌酯＜福美雙＜惡霉靈＜拌種靈，其中咪鮮胺對菌絲生長的抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.106 6 mg/L，與劉程程等［16］試驗結(jié)果較為一致；拌種靈作為常用的種子保護(hù)劑對菌絲的抑制作用最弱，EC50為84.518 8 mg/L。在混劑試驗中，采用聯(lián)合毒力得出1∶3、1∶5 比例下的抑霉唑和丙硫菌唑增效作用最為突出，為混劑篩選試驗提供了理論依據(jù)。

針對小麥赤霉病的高效殺菌劑篩選仍然是控制小麥赤霉病的主要手段。抑霉唑作為咪唑類殺菌劑具有內(nèi)吸廣譜性，農(nóng)藥登記中常作為水果蔬菜保鮮劑，具有高活性、人畜低毒性的特點，在小麥赤霉病防治方面鮮有報道；丙硫菌唑作為三唑類殺菌劑有很好的內(nèi)吸、治療鏟除活性，還具有良好的生物生態(tài)安全性和殺菌廣譜性，可作為理想的混劑使用［17，18］。本試驗通過室內(nèi)聯(lián)合毒力篩選，驗證得出抑霉唑與丙硫菌唑的1∶3 和1∶5 配比下的混劑對于小麥赤霉病菌具有優(yōu)異的抑制作用，可作為混劑應(yīng)用于田間防治小麥赤霉病，具有良好的市場開發(fā)前景；但本研究的其他混配制劑及大田試驗用量和防效有待進(jìn)一步完善驗證。