多糖作為獸用疫苗佐劑作用機(jī)制的研究進(jìn)展

史 茜，徐新峰，李學(xué)文，肖媛媛，白梅花，張富春

(1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，烏魯木齊 830046；2.烏魯木齊海關(guān)技術(shù)中心，烏魯木齊 830063)

多糖是由至少10個(gè)單糖分子脫水聚合而成的高分子碳水化合物，可形成直鏈或分支長(zhǎng)鏈，結(jié)構(gòu)復(fù)雜且龐大。多糖在自然界分布廣泛，從天然產(chǎn)物中分離出的多糖化合物多達(dá)數(shù)千種，根據(jù)其來(lái)源不同可分為植物多糖、動(dòng)物多糖和微生物多糖。多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗炎、抗氧化等多種功能活性[1]。天然來(lái)源的多糖具有毒副作用小、安全性高、功能多樣，并具有廣譜免疫調(diào)節(jié)作用等優(yōu)點(diǎn)，臨床已有獲得獸藥證書的黃芪多糖和香菇多糖。

免疫佐劑是指一類能非特異性地增強(qiáng)或改變機(jī)體對(duì)匹配抗原的特異性免疫應(yīng)答，增強(qiáng)抗原的免疫原性或改變免疫的反應(yīng)類型，但其本身并無(wú)抗原性的一類物質(zhì)[2]。常用獸用疫苗免疫佐劑按其成分及來(lái)源可分為油乳佐劑、無(wú)機(jī)佐劑、人工合成佐劑、生物性佐劑等。多糖促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)具有多靶點(diǎn)、多功能和多因子效應(yīng)[3]，因此可廣泛用作獸用疫苗免疫佐劑。 筆者闡述了多糖作為免疫佐劑對(duì)免疫器官、免疫細(xì)胞、免疫分子作用的相關(guān)機(jī)制及多糖受體關(guān)系等內(nèi)容。

1 多糖對(duì)免疫器官的促進(jìn)作用

免疫器官分為中樞免疫器官和外周免疫器官。中樞免疫器官包括胸腺和骨髓及鳥類法氏囊，主要是免疫細(xì)胞發(fā)生、分化和成熟的場(chǎng)所，如法氏囊是B細(xì)胞誘導(dǎo)和分化的場(chǎng)所，胸腺則為T細(xì)胞誘導(dǎo)和分化的場(chǎng)所；外周免疫器官包括淋巴結(jié)、脾臟、黏膜相關(guān)淋巴組織，主要是成熟T細(xì)胞和B細(xì)胞定居的場(chǎng)所，也是免疫細(xì)胞在抗原刺激下發(fā)生免疫應(yīng)答的部位。多糖通過(guò)刺激免疫器官自身的細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和分裂增殖，導(dǎo)致免疫器官重量或指數(shù)的增加，從而達(dá)到增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用[4]。金絲小棗多糖(Ziziphusjujubapolysaccharide,ZJP)可顯著提高環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)導(dǎo)致的免疫抑制蛋雛雞胸腺和法氏囊指數(shù)，可顯著緩解環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的臟器萎縮[5]。脾臟是動(dòng)物最大的外周淋巴器官，富含多種免疫細(xì)胞，脾臟增殖代表著動(dòng)物免疫系統(tǒng)的增強(qiáng)[6]。黃芪多糖(Astragaluspropinquuspolysaccharide,APS)能使小鼠、豬和海蘭褐雛雞的脾臟指數(shù)提高，同時(shí)提高胸腺及法氏囊等免疫器官的重量[7]，云芝中提取的蛋白結(jié)合多糖K作為卵清蛋白(oval bumin,OVA)p323-339疫苗佐劑可導(dǎo)致引流淋巴結(jié)腫大，淋巴結(jié)中細(xì)胞總數(shù)升高，CD11c+樹突細(xì)胞(dendritic cell,DC)的百分比和數(shù)量顯著增加，并上調(diào)CD80、CD86、主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ)和CD40的表達(dá)量，從而促進(jìn)樹突細(xì)胞的活性增加[8]。

2 多糖對(duì)免疫細(xì)胞的作用

多糖通過(guò)調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞的活性發(fā)揮佐劑作用,其能通過(guò)增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力和自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)的殺傷能力調(diào)節(jié)固有免疫反應(yīng)；通過(guò)提高樹突細(xì)胞的抗原遞呈能力，從而誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞亞群(Th1、Th2、Th17、Treg和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL細(xì)胞))的分化并誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體，激活適應(yīng)性免疫反應(yīng)；通過(guò)刺激細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(interleukin,IL)、干擾素(interferon,IFN)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor,TGF)等的產(chǎn)生發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用(圖1)。

圖1 多糖對(duì)免疫細(xì)胞的作用機(jī)制Fig.1 Mechanism of polysaccharide on immune cells

2.1 增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活性及抗原遞呈能力

巨噬細(xì)胞作為固有免疫的組成部分，在應(yīng)對(duì)病原體感染時(shí)起到吞噬作用，同時(shí)其也是一類抗原遞呈細(xì)胞，參與機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫。 多糖作為疫苗佐劑，可改變巨噬細(xì)胞的體積，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)NO和細(xì)胞因子分泌，增強(qiáng)酶活性[9-11]。 以五味子多糖(Schisandrachinensispolysaccharide,SCP)為佐劑，聯(lián)合畢赤酵母表達(dá)的鴨IgY Fc與鴨疫里默氏桿菌外膜蛋白A(OmpA)的融合蛋白OmpA-Fc進(jìn)行免疫，對(duì)雛鴨的免疫應(yīng)答具有明顯的調(diào)節(jié)作用，能顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，提高血清抗體滴度、增加CD4+T細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和血清IL-2和IL-4水平[12]。多糖佐劑也可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的抗原遞呈能力，將仙茅多糖(Curculigoorchioidespolysaccharide)與流感疫苗同時(shí)注射免疫昆明小鼠，免疫3 d后提取各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，不同濃度的仙茅多糖均可促使腹腔巨噬細(xì)胞表面CD80、CD86和小鼠MHCⅡ出現(xiàn)不同程度的表達(dá)上調(diào)[13]。

2.2 增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷能力

NK細(xì)胞通過(guò)免疫調(diào)節(jié)作用，可增強(qiáng)宿主對(duì)病毒、細(xì)菌和某些寄生蟲的抵抗力，并具有識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力[14]。多糖可通過(guò)調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性、促進(jìn)細(xì)胞因子及免疫調(diào)節(jié)介質(zhì)的產(chǎn)生發(fā)揮佐劑功能。通過(guò)人參多糖(Panaxginsengpolysaccharide,GPS)對(duì)環(huán)磷酰胺免疫抑制的小鼠NK細(xì)胞毒性的研究發(fā)現(xiàn)，人參多糖能增加全血中NK細(xì)胞的數(shù)量，上調(diào)穿孔素和顆粒酶的表達(dá)，促進(jìn)免疫抑制小鼠NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性[15]。多糖可激活NK細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-4、IL-12和TNF-α等細(xì)胞因子，IFN-γ能增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，并促進(jìn)原始Th細(xì)胞分化為Th1細(xì)胞。IL-12通過(guò)刺激NK細(xì)胞形成穿孔素，介導(dǎo)腫瘤和病毒感染細(xì)胞的凋亡[16]。使用黃芪多糖與雞OVA經(jīng)皮下免疫C57BL/6 小鼠，末次免疫7～14 d后，檢測(cè)免疫小鼠血清和脾臟發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖組小鼠OVA特異性抗體含量明顯高于OVA組小鼠，但小鼠脾臟內(nèi)NK和NKT細(xì)胞的百分比含量與OVA組和正常小鼠差別不大。經(jīng)PI刺激后，黃芪多糖組小鼠脾臟內(nèi)NK細(xì)胞中IL-4+細(xì)胞明顯高于OVA組和正常組，且IFN-γ+細(xì)胞的比例明顯下降；雖然經(jīng)過(guò)PI刺激以后黃芪多糖組小鼠脾臟內(nèi)NK細(xì)胞中IL-4+細(xì)胞升高不明顯，但I(xiàn)FN-γ+細(xì)胞的比例明顯下降[17]。

2.3 促進(jìn)樹突細(xì)胞的成熟和分化

樹突細(xì)胞是一種抗原遞呈細(xì)胞，能捕獲、加工并遞呈抗原給淋巴細(xì)胞以啟動(dòng)和調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)。樹突細(xì)胞成熟是誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫的關(guān)鍵，未成熟的樹突細(xì)胞具有較強(qiáng)的內(nèi)吞抗原能力，在多種刺激條件下向成熟樹突細(xì)胞轉(zhuǎn)化，使樹突細(xì)胞表面共刺激分子(CD40、CD80和CD86)及MHC分子的表達(dá)量增加，刺激T淋巴細(xì)胞的活化及分化，同時(shí)增加促炎細(xì)胞因子分泌，促進(jìn)免疫反應(yīng)沿著特定的方向發(fā)展[18]。多糖通過(guò)促進(jìn)樹突細(xì)胞的成熟和分化，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的攝取能力，從而發(fā)揮免疫佐劑效應(yīng)。 川明參多糖(Chuanminshenviolaceumpolysaccharide,CVP)作為口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)疫苗佐劑，可增強(qiáng)樹突細(xì)胞上CD40、CD80和CD86的表達(dá)，上調(diào)MHC Ⅰ/Ⅱ、TLR-2/4的mRNA水平，同時(shí)下調(diào)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β) mRNA表達(dá)，下調(diào)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的頻率，表明CVP可通過(guò)TLR-2和TLR-4信號(hào)通路發(fā)揮免疫佐劑的效果[19]。黃芪多糖作為乙型肝炎(HBV)DNA疫苗的佐劑免疫小鼠，能顯著增強(qiáng)特異性抗體水平的產(chǎn)生，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生相關(guān)細(xì)胞因子，并誘導(dǎo)殺傷性T細(xì)胞活化，促進(jìn)樹突細(xì)胞成熟，同時(shí)抑制TGF-β表達(dá)和Treg細(xì)胞頻率[20]。多糖被證實(shí)具有黏膜佐劑的作用，地黃多糖(Rehmanniaglutinosapolysaccharide,RGP)作為黏膜免疫佐劑，滴鼻免疫C57BL/6小鼠，可誘導(dǎo)小鼠縱隔淋巴結(jié)(mediastinal lymph-nodes,mLN)中C-C基序趨化因子受體7(CC-chemokine receptor 7,CCR7)上調(diào)，使樹突細(xì)胞數(shù)量顯著增加，并上調(diào)mLN-Dc中共刺激分子的表達(dá)和肺泡內(nèi)促炎細(xì)胞因子的濃度，誘導(dǎo)mLN中T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和TNF-α[21]。

2.4 促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖

T淋巴細(xì)胞亞群是評(píng)價(jià)細(xì)胞免疫的關(guān)鍵指標(biāo)，多糖通過(guò)影響T淋巴細(xì)胞的數(shù)量、比例和形態(tài)從而發(fā)揮免疫佐劑的作用。多糖佐劑功能研究較多的細(xì)胞亞群主要包括CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及Treg細(xì)胞等。CD4+T細(xì)胞，即輔助性T細(xì)胞，包括Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞，具有輔助細(xì)胞免疫和體液免疫的功能。CD8+T細(xì)胞，即CTL細(xì)胞，其主要作用是殺死感染了病原體的宿主細(xì)胞和破壞腫瘤細(xì)胞[22]。Treg細(xì)胞具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)能力，可以抑制免疫系統(tǒng)的功能和免疫細(xì)胞活性[23]。黃芪多糖和白花蛇舌草(Hedyotisdiffusa)多糖作為免疫增強(qiáng)劑聯(lián)合高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)滅活疫苗免疫仔豬,均能顯著提高仔豬CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞的百分比和特異性抗體滴度[24]。一枝蒿(ArtemisiarupestrisL.)多糖作為FMDV疫苗佐劑免疫小鼠，增加了CD4+CD44+和CD8+CD44+有效T細(xì)胞的水平，同時(shí)顯著增加了FMDV免疫小鼠脾細(xì)胞的CTL反應(yīng)[25]。 肉蓯蓉(Cistanchedeserticola)水提物作為多糖佐劑聯(lián)合季節(jié)性流感疫苗(IVV)可促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，提高引流淋巴結(jié)和脾臟CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD44+T細(xì)胞的陽(yáng)性率，誘導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答，同時(shí)伴有CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞IFN-γ的誘導(dǎo)，激活樹突細(xì)胞，降低Treg細(xì)胞的表達(dá)[26]。

2.5 促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖

B淋巴細(xì)胞主要參與體液免疫反應(yīng)，在抗原刺激下可轉(zhuǎn)化為效應(yīng)B細(xì)胞(漿細(xì)胞)，合成免疫球蛋白，能與靶抗原結(jié)合的免疫球蛋白即為抗體。多糖作為佐劑可刺激B淋巴細(xì)胞的增殖。將茯苓多糖-Ⅱ(Poriacocospolysaccharide Ⅱ,PCP-Ⅱ)與滅活狂犬病病毒RCVS-11-G通過(guò)肌內(nèi)注射小鼠后，對(duì)小鼠病毒中和抗體效價(jià)的提高有促進(jìn)作用，還可激活腹股溝淋巴結(jié)中B淋巴細(xì)胞的增殖，激活血液中的B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，刺激脾細(xì)胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ[27]。磷酸化川牛膝多糖(pRCPS)作為FMDV疫苗佐劑可上調(diào)FMDV特異性IgG、IgG1、IgG2b和IgG2a抗體水平和脾細(xì)胞增殖[28]。記憶性B細(xì)胞具有再次暴露于抗原時(shí)迅速增殖分化為漿細(xì)胞并分泌抗體的能力。PCP-Ⅰ可顯著提高炭疽菌特異性抗PA抗體、毒素中和抗體、抗PA抗體親和力，以及IgG1和IgG2a水平。PCP-Ⅰ可增加PA特異性記憶B細(xì)胞的頻率，增加PA特異性脾細(xì)胞的增殖，顯著刺激IL-4的分泌，增強(qiáng)樹突細(xì)胞的活化[29]。

3 多糖對(duì)免疫分子的作用

3.1 刺激細(xì)胞因子的產(chǎn)生

細(xì)胞因子在功能性免疫系統(tǒng)的發(fā)育和機(jī)體對(duì)感染的反應(yīng)中都起著重要作用。多糖刺激細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子按功能劃分為Th1型細(xì)胞因子(IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-β等)與Th2型細(xì)胞因子(IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等)[30]。Th1細(xì)胞主要促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，而Th2細(xì)胞以促進(jìn)抗體產(chǎn)生為主[31]。常用的鋁佐劑只能誘導(dǎo)Th2型免疫應(yīng)答，理想的佐劑應(yīng)能同時(shí)誘導(dǎo)Th1型及Th2型的免疫反應(yīng)。由表1可知，許多多糖佐劑能刺激機(jī)體產(chǎn)生IL、IFN、TNF、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)等細(xì)胞因子，通過(guò)使免疫反應(yīng)向Th1/Th2型免疫反應(yīng)改變，從而改變疫苗的免疫特性。

3.2 促進(jìn)抗體的產(chǎn)生

抗體是B淋巴細(xì)胞在抗原刺激后增殖分化為漿細(xì)胞所產(chǎn)生的免疫球蛋白?？贵w可特異性地與抗原結(jié)合，發(fā)揮免疫作用。哺乳動(dòng)物免疫球蛋白分為IgG、IgM、IgA、IgE及IgD。IgG是血清中含量最多的免疫球蛋白，具有抗菌、抗病毒、抗毒素等特性，對(duì)毒性產(chǎn)物起中和、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合作用，IgG1滴度可反映Th2免疫反應(yīng)的強(qiáng)度，IgG2a、IgG2b和IgG3抗體滴度可反映Th1免疫反應(yīng)的強(qiáng)度。IgA主要由呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道等處黏膜固有層中的漿細(xì)胞合成，是機(jī)體黏膜防御感染的重要因素[33]。IgM是機(jī)體被感染后最先出現(xiàn)的抗體，具有強(qiáng)有效的病毒清除作用[36]。多糖佐劑可誘導(dǎo)IgG、IgA、IgM等抗體的生成，發(fā)揮特異性的免疫作用(表1)。

4 多糖相關(guān)受體及信號(hào)通路

多糖作為獸用疫苗佐劑，不僅能促進(jìn)抗原特異性免疫系統(tǒng)，還能增強(qiáng)機(jī)體的自然免疫功能，通過(guò)對(duì)先天性免疫反應(yīng)的激活，產(chǎn)生刺激和引導(dǎo)隨后的適應(yīng)性免疫反應(yīng)信號(hào)，從而發(fā)揮佐劑作用。 多糖通常是以病原體相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)識(shí)別免疫細(xì)胞上的模式識(shí)別受體(pattern recognition receptor,PRR)，進(jìn)而活化免疫細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放，介導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)[38]。多糖作為配體主要與Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)、C型凝集素受體(C-type lectin-like receptor，CLR)、補(bǔ)體受體3(complement receptor 3,CR3)、清道夫受體(scavenger receptor,SR)等受體分子結(jié)合[39]。

4.1 TLR

TLR是主要在宿主抗原提呈細(xì)胞(APCs)中表達(dá)的PRRs，并在決定致病性感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用。TLR家族的10個(gè)成員(TLR1～TLR10)中能與多糖相互作用的TLRs主要是TLR4和TLR2。

4.1.1 TLR4 TLR4是目前研究最廣泛的一類PRRs，它不僅在免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、樹突細(xì)胞中表達(dá)，還表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞等多種細(xì)胞中。其配體包括革蘭氏陰性菌的脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)、脂寡糖、細(xì)菌內(nèi)毒素和病毒、真菌和霉菌分泌物質(zhì)[40]。其介導(dǎo)的植物多糖糖鏈主要由α-(1→3)和α-(1→6)構(gòu)型組成，通過(guò)介導(dǎo)髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)依賴與非依賴兩種途徑，促進(jìn)核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)、 絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的激活，進(jìn)而促進(jìn)IL-1、IL-1β、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子的產(chǎn)生[41]，從而產(chǎn)生強(qiáng)有力的炎癥反應(yīng)。

4.1.2 TLR2 TLR2常表達(dá)于巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞的表面，能識(shí)別多種病原體，是識(shí)別范圍最廣的TLR，其配體有革蘭氏陽(yáng)性菌的脂蛋白、肽聚糖(peptidoglycan,PGN)、脂磷壁酸(lipteichoic acid，LTA)、阿拉伯甘聚糖(lipoarabinomannan，LAM)、酵母聚糖(zymosan)等[42]。TLR2可與大部分配體直接結(jié)合誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，但對(duì)PGN的識(shí)別還需要TLR1與TLR6的參與[43]。TLR2介導(dǎo)的植物多糖的糖鏈主要由α(1→3)或β(1→4)構(gòu)型組成，通過(guò)MyD88依賴途徑激活NF-κB或磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶(protein-serine-threonine kinase,AKT)信號(hào)通路通路，導(dǎo)致IRF3、IRF7、AP-1和NF-κB等促炎因子的磷酸化和激活，發(fā)揮抗菌、抗病毒和抗腫瘤的作用[44]。

4.2 CLR

CLR是一個(gè)大的蛋白超家族，具有一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域(CTLDs)。CLR具有Ca2+依賴性，通過(guò)其碳水化合物識(shí)別域(carbohydrate recognition domain,CRD)識(shí)別多糖[45]。 識(shí)別的多糖主要含有α-(1→3)、α-(1→4)、β-(1→3)和β-(1→4) 型的糖苷鍵。CLR中主要作用于多糖的受體包括甘露糖受體(mannose receptor,MR)、Dectin-1、Dectin-2、Dectin-3等。

4.2.1 MR MR屬于鈣依賴性Ⅰ型跨膜蛋白受體。MR既能識(shí)別巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和樹突細(xì)胞等細(xì)胞表達(dá)的內(nèi)源性分子，又能識(shí)別病原體，它是連接固有免疫和適應(yīng)性免疫之間的橋梁。MR識(shí)別的配體主要有L-巖藻糖、D-甘露糖和D-N-乙酰葡萄糖胺等[46]。MR通過(guò)胞外結(jié)構(gòu)域識(shí)別和結(jié)合許多內(nèi)源性配體，通過(guò)內(nèi)吞作用和吞噬作用將其內(nèi)化和降解，從而維護(hù)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[47]。MR需其他受體共同參與完成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，激活轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)IL-1、IL-6、IL-12、TNF-α、GM-CSF、IL-10等細(xì)胞因子的表達(dá)，發(fā)揮免疫防御、免疫穩(wěn)定、免疫監(jiān)視的功能[48]。

4.2.2 Dectin-1 Dectin-1受體是一種Ⅱ型CLR，主要介導(dǎo)具有β-(1→3)和β-(1→6)構(gòu)型的葡聚糖配體，被稱為β-葡聚糖受體。因β-葡聚糖是真菌細(xì)胞壁的主要成分，所以Dectin-1受體也可作為真菌的主要模式識(shí)別受體。Dectin-1存在于髓系細(xì)胞上，包括巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，它也存在于某些淋巴細(xì)胞上，如γδT細(xì)胞[49]。 Dectin-1介導(dǎo)的下游信號(hào)通路分為脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)的NF-κB信號(hào)通路和非Syk的NF-κB通路，以及其他與Dectin-1受體下游信號(hào)相互作用的通路[50]。Dectin-1也可增強(qiáng)TLR4及TLR2介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)細(xì)胞因子分泌。這誘導(dǎo)了多種細(xì)胞反應(yīng)，包括呼吸爆發(fā)、磷脂酶A2(PLA2)和環(huán)氧化酶2(COX2)的激活和調(diào)節(jié)、內(nèi)吞和吞噬的配體攝取及多種細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，包括TNF、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2(MIP-2)、IL-2、IL-10、IL-6和IL-23。

4.2.3 Dectin-2與Dectin-3 Dectin-2是一種Ⅱ型CLR，廣泛存在于巨噬細(xì)胞上。 最初鑒定Dectin-2所識(shí)別的多糖均含有甘露糖成分，含ITAM的銜接蛋白(如FcRγ)相互作用，誘導(dǎo)多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)，然后通過(guò)Syk和CARD9依賴途徑激活NF-κB，誘導(dǎo)Th17的分化，細(xì)胞因子如TNF-α、IL-2、IL-10、IL-23、IL-1β、IL-6和IL-12等介導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答[51]。Dectin-3能識(shí)別某些真菌的α-甘露聚糖，與Dectin-2分子的作用機(jī)制相同[52]。

4.3 CR3

在免疫系統(tǒng)的細(xì)胞中，最豐富的補(bǔ)體受體是CR3。CR3屬于黏附分子整合素家族中的成員，是最重要的吞噬受體之一，主要與β-葡聚糖結(jié)合。CR3在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的某些亞群上表達(dá)[53]。 CR3介導(dǎo)的活化需要黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、Syk、PI3K、Akt、p38MAPK、磷脂酶C(phospholipaseC,PLC)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)，可使NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞處于預(yù)激活化狀態(tài)，然后通過(guò)補(bǔ)體iC3b的紐帶作用使效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞相互結(jié)合，殺傷靶細(xì)胞[54]。

4.4 SR

SR主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞上，同時(shí)也在內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞中表達(dá)。 SR最初是根據(jù)它們結(jié)合修飾的低密度脂蛋白(LDL)的能力來(lái)識(shí)別和分類的，根據(jù)其序列相似性或共同的結(jié)構(gòu)特征被分為A～J 10類，具有結(jié)合LPS和磷脂酰絲氨酸的能力。SR具有廣泛的功能，如清除病原體、凋亡細(xì)胞清除、脂質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞黏附、細(xì)胞內(nèi)貨物運(yùn)輸，甚至是味覺感知。SR所識(shí)別的多糖可具有α-和β-構(gòu)型，通過(guò)激活PLC，隨之激活 PKC和P13K，導(dǎo)致 MAPK、ERK 及NF-κB 激活，致使下游相關(guān)基因表達(dá)[55]。

由表2可知，不同多糖因其結(jié)構(gòu)和組成不同，所結(jié)合的受體種類和其作用機(jī)制也不相同。

5 小結(jié)與展望

目前獸用疫苗中主要依賴鋁佐劑或油佐劑，多糖作為植物來(lái)源天然產(chǎn)物具有毒性低、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，作為疫苗佐劑具有廣泛的應(yīng)用前景。近些年人們對(duì)多糖進(jìn)行了廣泛的研究，但只有少數(shù)可實(shí)際應(yīng)用于臨床中，主要是因?yàn)槎嗵蔷哂屑兌鹊?、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不易控制、分子結(jié)構(gòu)不明確、影響其生物活性因素多、具有量效關(guān)系等缺點(diǎn)，從而限制了其應(yīng)用。今后多糖的研究趨勢(shì)主要以廣泛篩選可應(yīng)用的天然多糖并開展佐劑效果評(píng)價(jià)，對(duì)其佐劑機(jī)制進(jìn)行深入研究，與其他佐劑配伍作用的可能性與作用機(jī)制的研究，以及對(duì)其結(jié)構(gòu)的解析和構(gòu)效關(guān)系的研究等內(nèi)容著手，深入系統(tǒng)地研究多糖的佐劑作用，使人們從更多的角度認(rèn)識(shí)并應(yīng)用多糖。