黃連解毒湯古法煎煮與現(xiàn)代煎煮的差異研究

李軍鴿　王永春　孟珈同　邱智東　唐秋竹

【摘 要】 目的：通過水煎液化學成分及轉(zhuǎn)移率、出膏率、日服化學成分劑量等指標，比較黃連解毒湯古法煎煮與現(xiàn)代煎煮的差異，為黃連解毒湯開發(fā)研究提供參考。方法：按照古籍《外臺秘要》記載的煎煮方法（“黃連三兩，黃芩、黃柏各二兩，梔子十四杖擘，以水六升，煮取二升”）和現(xiàn)代煎煮方法（黃連9 g，黃芩6 g，黃柏6 g，梔子9 g，1200 mL水，煮取400 mL”）制備水煎液，凍干得干粉，采用高效液相色譜法，檢測飲片和凍干粉中表小檗堿、黃連堿，巴馬汀、小檗堿、黃柏堿、黃芩苷、梔子苷含量，計算出膏率、轉(zhuǎn)移率和日服有效成分量，比較湯古法煎煮與現(xiàn)代煎煮的差異。結(jié)果：古法煎煮平均出膏量為17.86 g，出膏率為15.99%，現(xiàn)法煎煮平均出膏量為7.42，出膏率為24.34%，從出膏率看，現(xiàn)法煎煮優(yōu)于古法煎煮，從化學指標轉(zhuǎn)移率看，現(xiàn)法煎煮化學成分轉(zhuǎn)移率均大于古法煎煮;各化學成分日服用量差異與日服生藥量差異不一致，古法煎煮高于現(xiàn)法煎煮。結(jié)論：從化學角度出發(fā)，通過比較黃連解毒湯不同煎煮方法，為其“物質(zhì)基準”研究中劑量及煎煮方法的確定提供實驗參考。

【關(guān)鍵詞】 黃連解毒湯;煎煮;化學成分;出膏率

【中圖分類號】R283 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2022）14-0065-06

Study on the Difference between Ancient Decoction and Modern Decoction of Huanglian Jiedu Decoction

LI Junge WANG Yongchun MENG Jiatong QIU Zhidong TANG Qiuzhu^*

Changchun University of Traditional Chinese Medicine， Changchun 130117， China

Abstract：Objective Through the chemical composition and transfer rate of the water decoction， the ointment rate， the daily dosage of chemical components and other indicators， the difference between the ancient decoction of Huanglian Jiedu Decoction and the modern decoction is compared， which provides a reference for the development and research of the classic prescription-Huanglian Jiedu Decoction. Methods According to the decocting method recorded in the ancient book “Wai Tai Mi Yao” （Coptis scutellaria three liang， scutellaria baicalensis， cypress each two liang， gardenia fourteen sticks， six liters of water， two liters of boiling） and modern decocting methods （Coptis chinensis 9 g， Scutellaria baicalensis 6 g， Cork 6 g， Gardenia 9 g， 1200 mL water， boil 400 mL） Prepare water decoction， freeze-dried dry powder， use high performance liquid chromatography to detect epiberberine in decoction pieces and freeze-dried powder， Berberine， palmatine， berberine， phellodendron， baicalin， geniposide content， calculate the cream rate， transfer rate and daily effective ingredients， and compare the difference between ancient decoction and modern decoction. Results From a chemical point of view， by comparing different decoction methods of Huanglian Jiedu Decoction， it provides experimental reference for the determination of dosage and decoction method in its “material benchmark” study.

Key words：Huanglian Jiedu Decoction;Decoction;Chemical Composition;Paste Rate

經(jīng)典名方是近年來的研究熱點之一^[1]，是古代醫(yī)者通過實踐與檢驗得到的智慧成果，是留給后人的寶貴財富。自2018年起隨著關(guān)于經(jīng)典名方相關(guān)政策、法規(guī)、技術(shù)指導文件的頒布^[2-3]，經(jīng)典名方已經(jīng)到了實質(zhì)開發(fā)階段^[4]，主要包括本草考證研究、物質(zhì)基準研究和制劑研究，其中本草考證和物質(zhì)基準研究應秉著遵古原則，應按古代方法進行研究，但是隨著歷史的發(fā)展和演變有些經(jīng)典名方在藥材基源^[5]、飲片的炮制選擇、臨床劑量、煎煮方法、用法等方面記載存在差別。為了后期的制劑研究，有些傳統(tǒng)方法、制劑劑型等需要重新選擇與考量，還原經(jīng)典的同時還要注重傳承可用，使經(jīng)典名方標準化，因此有必要考慮現(xiàn)代的科學技術(shù)與中醫(yī)藥理論結(jié)合，合理選擇劑量、劑型與用法等，為得到有效的標準物質(zhì)，工藝設(shè)計很重要，例如可以先從對古代煎煮與現(xiàn)代煎煮差異進行對比研究入手，確定關(guān)鍵工藝參數(shù)，有利于經(jīng)典名方量化生產(chǎn)，應用于市場，早日成為適用于現(xiàn)代生活的中成藥產(chǎn)品。

黃連解毒湯最早記載于東晉葛洪撰寫的《肘后備急方》，但方中只有藥味組成和制法，后由唐代王燾在《外臺秘要》第一卷崔氏方一十五首中命名為黃連解毒湯^[6-9]，原文“黃連三兩，黃芩、黃柏各二兩，梔子十四杖擘，以水六升，煮取二升”。黃連解毒湯是一個清熱解毒的經(jīng)典名方，其主要功效為清熱解毒，主治三焦實熱火毒證^[10]。目前對黃連解毒湯藥效物質(zhì)基準研究較少，提取工藝研究各不相同，但關(guān)于黃連解毒湯一直存在劑量爭議，根據(jù)《中國度量衡史》和《經(jīng)典名方開發(fā)指引》中唐代“一兩”折合現(xiàn)代13.8g，因此“黃連三兩”折算為黃連41.4g，“黃芩，黃柏各二兩”折算為各27.6g，“梔子十四杖擘”折算為15g，唐“一升”折合現(xiàn)代200mL，因此古法煎煮方法為：黃連41.4g，黃芩27.6g，黃柏27.6g，梔子15g，加水1200mL，煮取400mL。現(xiàn)代一些名老中醫(yī)及教科書上認為古代一兩約為3g，黃連、黃柏、黃芩為苦寒之藥，量不適多?，F(xiàn)代臨床常用黃連解毒湯：黃連9g，黃芩6g，黃柏6g，梔子9g，加水1200mL，煮取400mL。即3∶2∶2∶3比例配伍劑量被普遍認知和應用^[11-13]。本研究將古法與現(xiàn)代方法分別煎煮，得到標準湯的凍干粉，從化學角度為黃連解毒湯“物質(zhì)基準”中劑量的確定提供實驗參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津LC2030），真空冷凍干燥機（Epsilon 2-4 LSCplus），超聲波清洗機（昆山KQ-250B），萬分之一電子天平（梅特勒XS105DU）。

1.2 材料 鹽酸小檗堿（批號：111638-201907）、鹽酸巴馬汀（批號：110723-201913）、鹽酸黃連堿（批號：112026-201802）、黃柏堿（批號：111895-201805）、黃芩苷（批號：110715-201318）、梔子苷（批號：110749-201919）等對照品購自中國食品藥品檢定研究院，試藥表小檗堿對照品（批號：B20108，源葉生物）。甲醇、乙腈（Fisher，色譜純）;水為超純水;其它試劑均為分析純。

黃連飲片產(chǎn)地為四川，吉林省北藥藥材加工有限公司（批號：20210511）;黃芩飲片產(chǎn)地為內(nèi)蒙古，吉林省北藥藥材加工有限公司（批號：20201005）;黃柏飲片產(chǎn)地為四川，吉林省北藥藥材加工有限公司（批號：20200712）;梔子飲片產(chǎn)地為四川，吉林省北藥藥材加工有限公司（批號：20201115），以上藥材飲片經(jīng)長春中醫(yī)藥大學翁麗麗教授鑒定及檢驗均合格。

2 方法

2.1 黃連解毒湯樣品制備

2.1.1 古代方法煎煮 唐代《外臺秘要》記載“黃連三兩，黃芩、黃柏各二兩，梔子十四杖擘，以水六升，煮取二升，分二服”。唐“一兩”折合現(xiàn)代13.8g，唐“一升”折合現(xiàn)代200mL^[14-15]，故折算后取黃連41.4g、黃芩27.6g、黃柏27.6g、梔子15g，加水1200mL，用武火保持沸騰，后文火煎煮，煎煮40min，用2層200目紗布趁熱過濾，得藥液400mL，冷凍干燥72h，得凍干粉，稱重，平行制備兩份。

2.1.2 現(xiàn)代方法煎煮 參考臨床常用劑量及《方劑學》教材^[16-17]，一錢約為3g，確定黃連9g、黃芩6g、黃柏6g、梔子9g，加水1200mL，浸泡30min，用武火保持沸騰，后文火煎煮，煎煮50min，用2層200目紗布趁熱過濾，得藥液400mL，冷凍干燥72h得凍干粉，稱重，平行制備兩份。

2.2 化學成分指標含量測定

2.2.1 對照品溶液制備 分別取表小檗堿、鹽酸黃連堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、黃柏堿、黃芩苷、梔子苷對照品^[18-19]，精密稱定，加甲醇分別制成每1mL含90μg、90μg、120μg、90μg、100μg、60μg、30μg的對照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液制備 表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿含量測定按2020版《中國藥典》黃連項下處理供試品溶液，精密稱定黃連飲片粉末（過二號篩）0.2g和兩種煎煮方法凍干粉各0.6g，分別置具塞錐形瓶中，精密加甲醇-鹽酸（100∶1）的混合液50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，甲醇補足減失重量，搖勻，過濾，精密吸取續(xù)濾液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，備用，平行制備兩份。

黃芩苷含量測定按2020版《中國藥典》黃芩項下處理供試品溶液，精密稱取黃芩飲片粉末0.3g和兩種煎煮方法凍干粉各0.6g，各加70%乙醇40mL，加熱回流3 h，放冷，濾液置100mL量瓶中，用少量70%乙醇分次數(shù)洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇搖勻，精密量取1mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，備用，平行制備兩份。

黃柏堿含量測定按2020版《中國藥典》黃連項下處理供試品溶液，精密稱取黃柏飲片粉末0.5g和兩種煎煮方法凍干粉各1.0g，分別置具塞錐形瓶中，加乙腈-0.1%磷酸（13∶87）混合溶液25mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，用乙腈-0.1%磷酸（13∶87）混合溶液補足減失的重量，搖勻，即得，平行制備兩份。

梔子苷含量測定按2020版《中國藥典》梔子項下處理供試品溶液，精密稱取梔子飲片粉末0.1g和兩種煎煮方法凍干粉各0.3g，分別置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，甲醇補足減失的重量，搖勻，即得，平行制備兩份。

2.3 色譜條件

2.3.1 表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿含量測定 按2020版《中國藥典》黃連項下^[20]，Apollo C₁₈色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀（以磷酸調(diào)pH為4.0）（25∶75），檢測波長354nm，柱溫35℃，各對照品進樣量5μL，供試品10μL。

2.3.2 黃芩苷含量測定 按2020版《中國藥典》黃芩項下，Apollo C₁₈色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），檢測波長280nm，柱溫35℃，對照品和供試品進樣量10μL。

2.3.3 黃柏堿含量測定 按2020版《中國藥典》黃柏項下，Apollo C₁₈色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相乙腈-0.1%磷酸水（13∶87），檢測波長284nm，柱溫35℃，對照品和供試品進樣量10μL。

2.3.4 梔子苷含量測定 按2020版《中國藥典》梔子項下，techmate C₁₈色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相乙腈-水（13∶87），檢測波長238nm，柱溫35℃，對照品進樣量5μL，供試品10μL。

2.4 出膏率、浸出物、各化學成分指標轉(zhuǎn)移率及日服用量的計算 出膏率是制劑研究的一個重要指標，其穩(wěn)定性與量值直接影響成型工藝研究;轉(zhuǎn)移率是反映提取方法和指標成分被提取效率的一個重要指標，轉(zhuǎn)移率越高，反映該提取方法越合理，工藝更有利于實際生產(chǎn)。通過出膏率、各化學成分指標轉(zhuǎn)移率及日服用量來對比古法煎煮與現(xiàn)代煎煮差異。

出膏率=煎煮液凍干粉量/總飲片量×100%。

化學成分指標轉(zhuǎn)移率=（方中飲片總量×出膏率×凍干粉中化學成分指標含量）/（方中相應飲片用量×飲片化學成分指標含量）。

化學成分指標日服用量=日服方凍干粉量×凍干粉中化學成分含量。

3 結(jié)果

3.1 飲片及不同煎煮方法凍干粉中化學成分指標含量測定 平行兩份煎煮樣品凍干粉，各平行制備兩份供試品溶液，按照2.3色譜條件測定，飲片和不同煎煮方法凍干粉中的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿、黃柏堿、黃芩苷、梔子苷化學成分色譜峰型良好，分離度都大于1.5，方法穩(wěn)定可靠，各飲片含量符合2020版《中國藥典》要求，具體化學成分指標含量見表1，色譜圖如圖1、圖2、圖3、圖4。黃連解毒湯古法煎煮與現(xiàn)代煎煮提取液凍干粉中各化學成分含量差異不大，嚴格說古法煎煮略高于現(xiàn)法煎煮，表小檗堿含量古法為1.35%，現(xiàn)法為1.02%;黃連堿含量古法為1.41%，現(xiàn)法為1.07%;巴馬汀含量古法為1.19%，現(xiàn)法為0.70%;小檗堿含量古法為6.18%，現(xiàn)法為4.69%;黃芩苷含量古法為8.99%，現(xiàn)法為7.47%;黃柏堿含量古法為0.35%，現(xiàn)法為0.24%;梔子苷含量古法為2.19%，現(xiàn)法為1.95%。從結(jié)果看，古法和現(xiàn)法中小檗堿含量均高于黃連飲片，是因為黃柏飲片中也含有小檗堿。導致兩種煎煮方法各化學成分差異不大的原因可能是因為以上化學成分無揮發(fā)性，水溶性都較好，且都易溶于水，容易煎出。

3.2 不同煎煮方法中出膏率和化學指標轉(zhuǎn)移率比較 平行制備的古法煎煮和現(xiàn)法煎煮出膏量重復性良好，古法煎煮平均出膏量為17.86g，出膏率為15.99%，現(xiàn)法煎煮平均出膏量為7.42，出膏率為24.34%，從出膏率看，現(xiàn)法煎煮優(yōu)于古法煎煮，從指標轉(zhuǎn)移率看現(xiàn)法煎煮表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿、黃柏堿、黃芩苷、梔子苷的轉(zhuǎn)移率均大于古法煎煮。見表2。因此從飲片利用率方面考慮，現(xiàn)法煎煮比古法煎煮好。

通過各化學成分轉(zhuǎn)移率可知，梔子苷的轉(zhuǎn)移率最高，可能與梔子苷易溶于水有關(guān)，有文獻報道梔子苷30 min提取完全^[21]。另外從日服提取物用量方面看，古法煎煮每日服17.86g，現(xiàn)法每日服用7.42g，古法是現(xiàn)法的2.4倍，如按后期制成顆粒劑考慮，從服用劑量角度看現(xiàn)法煎煮比古法煎煮好。

3.3 不同煎煮方法化學成分日服用量比較 古方煎煮一日服用生藥量為111.6g，是現(xiàn)代煎煮一日服用生藥量（30g）的4.6倍。經(jīng)計算，不同煎煮方法的各化學成分日服用量差異小于日服生藥量差異。見表3。從數(shù)據(jù)看，表小檗堿古法煎煮日服量為233.99mg是現(xiàn)法煎煮73.16mg的3.2倍;黃連堿古法煎煮日服量為246.17mg是現(xiàn)法煎煮76.77mg的3.2倍;巴馬汀古法煎煮日服量為208.18mg是現(xiàn)法煎煮46.75mg的4.4倍;小檗堿古法煎煮日服量為1070.32mg是現(xiàn)法煎煮337.53mg的3.2倍;黃芩苷古法煎煮日服量為649.20mg是現(xiàn)法煎煮540.14mg的1.2倍;黃柏堿古法煎煮日服量為61.70mg是現(xiàn)法煎煮17.39mg的3.5倍;梔子苷古法煎煮日服量為381.34mg是現(xiàn)法煎煮231.55mg的1.6倍;可見，不同煎煮方法的各化學成分日服用量差異與日服生藥量差異不一致，古法煎煮高于現(xiàn)法煎煮，原因可能是各藥材入方劑量、煎煮時間、各化學成分轉(zhuǎn)移率不同導致的。

4 討論

黃連解毒湯療效顯著，應用廣泛^[22]，臨床上一直沿用湯劑^[23]，隨著歷史時間的推移，黃連解毒湯在劑量上發(fā)生爭議，從而導致煎煮工藝不同。研究從出膏率、有效成分轉(zhuǎn)移率等化學實驗角度比較古法煎煮和現(xiàn)代煎煮差異，發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯古法煎煮與現(xiàn)代煎煮提取液凍干粉中各化學成分含量差異不大，現(xiàn)代煎煮的出膏率和化學成分轉(zhuǎn)移率大于古代煎煮，因此從飲片利用率角度出發(fā)，現(xiàn)代煎煮優(yōu)于古代煎煮。從日服用量上看，如小檗堿和黃芩苷古法煎煮日服量分別為1070.32mg和649.20mg是現(xiàn)法煎煮的3.2倍和1.2倍，古法煎煮日服用量有效成分大于現(xiàn)代煎煮。但是，兩種煎煮方法得到的物質(zhì)還需在藥理活性和臨床療效方面進一步比較，通過閱讀《外臺秘要》黃連解毒湯原文“……一服目明，再服進粥，于此漸瘥，余以療凡大熱盛煩嘔呻吟錯語不得眠”，古代用比現(xiàn)代劑量大4.6倍的原因猜想可能是利用其劑量使療效加快，對應急重癥。綜上所述，本研究從化學角度出發(fā)，為黃連解毒湯“物質(zhì)基準”研究中劑量及煎煮方法的確定，提供基礎(chǔ)實驗參考。

參考文獻

[1]張鵬，劉安，鄔蘭，等.經(jīng)典名方概述與開發(fā)探討[J].中國實驗方劑學雜志，2020，26（15）：183-194.

[2]國家中醫(yī)藥管理局.關(guān)于發(fā)布《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》的通知[EB/OL].（2018-04-13）[2019-05-20].http：//kjs.satcm.gov.cn/zhengcewenjian/2018-04-16/7017.html.

[3]國家中醫(yī)藥管理局辦公室，國家藥品監(jiān)督管理局綜合和規(guī)劃財務(wù)司.關(guān)于發(fā)布《古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息考證原則》的通知[EB/OL].（2020-10-15）[2020-11-10].http：//kjs.satcm.gov.cn/zhengcewenjian/2020-10-15/18132.html.

[4]王歡歡，唐璇，許靜，等.半夏厚樸湯古法煎煮與現(xiàn)代煎煮的差異研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2020，31（10）：2386-2389.

[5]黃仕文，顏媛媛，嵇晶，等.經(jīng)典名方質(zhì)量研究及其量值傳遞關(guān)鍵技術(shù)[J].南京中醫(yī)藥大學學報，2021，37（3）：446-449.

[6]張婷，宋厚盼，林也，等.黃連解毒湯之“清熱解毒”藥效與作用機制研究進展[J].中華中醫(yī)藥學刊，2020，38（11）：135-139.

[7]魏婷. 黃連解毒湯提取精制工藝及安全性評價[D].重慶：西南大學，2011.

[8]江玲麗，何鵬，凌驄.不同方法制備的黃連解毒湯提取液指紋圖譜比較分析[J].藥物與人，2014，27（8）：269-270.

[9]蔣斌，張星海，唐樑，等.正交試驗優(yōu)選黃連解毒湯的機器煎煮工藝[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（23）：32-35.

[10]張綦慧，張麗，劉晶，等.黃連解毒湯系列制劑臨床應用研究[J].吉林中醫(yī)藥，2016，36（11）：1181-1184.

[11]司南，楊陽，王巍，等.黃連解毒湯來源及用藥劑量換算的考證[J].中國現(xiàn)代中藥，2012，14（2）：31-33.

[12]王海霞，王青，朱向東.黃連臨床應用及其用量[J].吉林中醫(yī)藥，2019，39（9）：1150-1153.

[13]劉衛(wèi)霞，尤凱，孫燕.黃連解毒湯化學成分及臨床應用的研究進展[J].沈陽醫(yī)學院學報，2015，17（2）：121-124.

[14]楊琳，傅延齡，倪勝樓，等.《外臺秘要》湯劑全方量的研究[J].北京中醫(yī)藥大學學報，2013，36（11）：725-728.

[15]楊琳. 經(jīng)方常用50味藥物在《外臺秘要》中的用量規(guī)律研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學，2012.

[16]韓濤.方劑學[M].濟南：山東科學技術(shù)出版社，2020：46-47.

[17]鄧中甲.方劑學[M].上海：上海科學技術(shù)出版社，2008：92-93.

[18]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國中醫(yī)藥科技出版社，2020.

[19]馬克強，桑曉光，殷曉敏，等.黃連解毒湯主要成分的含量測定[J].中國農(nóng)村衛(wèi)生，2020，12（15）：40-41.

[20]呂茂翠.中國藥典中黃連含量測定項下色譜條件的改進建議[J].科學技術(shù)創(chuàng)新，2019（27）：42-43.

[21]王佳琳，張貴君，郭亞芳，等.煎煮時間對梔子柏皮湯藥效組分的影響[J].世界中醫(yī)藥，2018，13（9）：2300-2303.

[22]董穎，劉保光，許二平.黃連解毒湯抗炎作用與臨床應用研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2021，27（12）：245-250.

[23]徐玉玲，譚小君，徐騰達，等.黃連解毒湯最佳提取工藝研究[J].成都大學學報（自然科學版），2016，35（1）：19-22.

（收稿日期：2021-11-15 編輯：陶希睿）