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    草莓莖尖組織培養(yǎng)技術研究

    2022-05-30 21:39:31蒲忠貴張慶全
    甘肅農(nóng)業(yè)科技 2022年9期
    關鍵詞:組織培養(yǎng)草莓

    蒲忠貴 張慶全

    摘要:為建立完善的草莓組培快繁體系,解決種苗退化問題,以當?shù)夭葺髟云贩N紅顏莖尖為試材,設置0.1%升汞和0.1%升汞+2%吐溫-80溶液2種外植體消毒處理,以MS為基本培養(yǎng)基,分別添加不同濃度6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的6個誘導和繼代增殖培養(yǎng)基、5個生根培養(yǎng)基,研究草莓莖尖外植體消毒最佳方式與時間, 篩選誘導、繼代增殖及生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。結(jié)果表明,0.1%升汞+2%吐溫-80溶液處理8 min時草莓莖尖污染率及褐化率較低,萌發(fā)率最高,可達82.3%,為最佳的消毒方式。外植體在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培養(yǎng)基中,可誘導出更多的健壯不定芽,萌發(fā)率為83.3%,為最佳誘導培養(yǎng)基;適宜的繼代增殖培養(yǎng)基為 MS+1.0 mg/L 6-BA +0.02 mg/LNAA,增殖系數(shù)為4.5%;1/2MS+0.01 mg/L NAA為最佳生根培養(yǎng)基,生根率高達100%。

    關鍵詞:草莓;莖尖;快繁;組織培養(yǎng)

    中圖分類號:S668.4? ? ? ? ? ? 文獻標志碼:A? ? ? ? ? ? 文章編號:1001-1463(2022)09-0086-04

    doi:10.3969/j.issn.1001-1463.2022.09.020

    Study on the Tip-shoot Tissue Culture Techniques for Strawberry

    PU Zhonggui, ZHANG Qingquan

    (Agriculture and Rural Bureau at Yongjing County, Yongjing Gansu 731600, China)

    Abstract: In order to improve the strawberry tissue culture and rapid propagation system and to address the quality degradation issue in seedlings, taking tip-shoots of a main strawberry variety Hongyan as material, two explant disinfection methods were used i.e., 0.1% HgCl2 solution and 0.1% HgCl2 plus 2% Tween-80 solution, 6 induction media and multiplicative culture media and 5 rooting culture media based on MS culture base plus different concentrations of 6-BA and NAA were formulated to study the optimum explant disinfection method and time, and to select the optimum culture media for induction, multiplicative culture and rooting culture for tip-shoot tissue culture of strawberry, respectively. Results showed that 0.1% HgCl2 plus 2% Tween-80 solution treated for 8 min had the lowest pollution rate and browning rate of tip-shoot tissue, and the highest germination rate of 82.3%, which was considered as the optimum explant disinfection method. The optimum induction medium was MS plus 1.0 mg/L 6-BA plus 0.2 mg/L NAA which could induce more health adventitious buds with a germination rate of 83.3%. The optimum medium for multiplicative culture was MS plus 1 mg/L 6-BA plus 0.02 mg/L NAA which had a multiplication coefficient of 4.5%. The optimal medium for rooting was 1/2MS plus 0.01 mg/L NAA which showed a rooting rate of 100%.

    Key words: Strawberry; Tip-shoot; Rapid propagation; Tissue culture

    草莓為薔薇科草莓屬多年生草本植物,漿果色澤艷麗,鮮美可口,營養(yǎng)豐富,深受人們喜? ? 愛[1 - 3 ]。草莓在全國各地均有種植。近年來,永靖縣把發(fā)展草莓產(chǎn)業(yè)作為鄉(xiāng)村振興的重要抓手積極推進, “劉家峽草莓”已享譽蘭州、西寧、臨夏等周邊城市。目前,全縣種植面積達到220 hm2,全部以日光溫室和鋼架、竹架大棚的形式保護地種植,主栽品種以紅顏和妙香系列為主,分布在三塬、峴塬、劉家峽、太極等川塬鄉(xiāng)鎮(zhèn)。采摘期從每年元月份開始,長達7個月,平均產(chǎn)量達37 500 kg/hm2。主要銷往蘭州、西寧、臨夏等周邊城市以及以電商物流的形式銷往全國各地,電商率達到40%。但近年來,草莓種植戶為追求經(jīng)濟效益,盲目擴大種植面積,同時由于種植草莓周期長,種苗以匍匐莖繁殖和分株繁殖等無性繁殖方式為主,造成種苗種性退化快、花葉病等病毒病感染率高,導致果實畸形,果個不大,產(chǎn)量和質(zhì)量下降。從北京、山東、遼寧等種苗繁育基地引進的草莓脫毒種苗,由于地域差異或者脫毒苗本身問題,草莓產(chǎn)量很不穩(wěn)定,種植戶對優(yōu)質(zhì)草莓種苗的渴求愈發(fā)強烈。我們以紅顏草莓匍匐莖莖尖作為外植體,研究了草莓莖尖培養(yǎng)技術,以期為完善草莓莖尖組培快繁技術體系奠定基礎。

    1? ?材料與方法

    1.1? ?外植體制備

    供試草莓品種為紅顏,大田生產(chǎn)種苗,于5 — 6月份采集種植于永靖縣三塬鎮(zhèn)兩合村鋼架大棚內(nèi)的草莓匍匐莖尖作為外植體。

    1.2? ?外植體消毒

    表面消毒劑選用0.1%升汞和0.1%升汞+2%吐溫-80溶液。消毒劑消毒時間設4、6、8、10、12 min共5個水平10個處理(表1),消毒后接種于MS培養(yǎng)基上,篩選出最佳消毒方法。

    從健壯的紅顏草莓母株上,選取飽滿稚嫩的匍匐莖2~4 cm長的頂芽,用紗布包好,流水沖洗1~2 h后瀝干,在超凈工作臺中用75%酒精消毒30 s,迅速用無菌水沖洗4~5次,隨即用0.1%升汞+2%吐溫-80溶液處理8 min,再用無菌水沖洗4~6次。

    1.3? ?芽誘導培養(yǎng)

    消毒后的外植體用濾紙吸干水分,在雙目解剖鏡下剝?nèi)ビ兹~露出莖尖生長點,用解剖針挑去小于0.5 mm的莖尖生長點,立即接入誘導分化培養(yǎng)基(表2)中,每瓶接5個,10瓶為1個處理,重復3次。用封口膜綁扎好后放置在培養(yǎng)架上。觀察統(tǒng)計萌發(fā)芽數(shù)和生長狀況,篩選出最佳芽誘導培養(yǎng)基。

    1.4? ?繼代增殖培養(yǎng)

    將萌發(fā)的草莓莖尖轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基(表3)中,每瓶接種5個叢生芽,各接種10瓶。觀察統(tǒng)計增殖芽數(shù)、增殖系數(shù)和芽生長狀況,篩選出適宜的繼代增殖培養(yǎng)基。

    1.5? ? 生根培養(yǎng)

    待繼代培養(yǎng)結(jié)束后,立即轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基(表4)中,每瓶接種5株健壯幼苗,各接10瓶。觀察統(tǒng)計試管苗生長狀況、平均根長、平均根數(shù)、平均生根株數(shù),篩選出最佳生根培養(yǎng)基。

    1.6? ?培養(yǎng)方法與條件

    培養(yǎng)溫度為22~26 ℃,光照時間14 h/d,光照強度1 600~2 000 lx。培養(yǎng)基MS、1/2MS、1/4MS均添加蔗糖3%,瓊脂6.5 g/L,pH 5.8。

    1.7? ?統(tǒng)計方法

    接種10 d后統(tǒng)計污染率、褐化率。接種20 d后統(tǒng)計萌發(fā)率。接種30 d后統(tǒng)計增殖芽數(shù),計算增殖系數(shù)和生根率。

    增殖系數(shù)=(增值芽數(shù)/原個體數(shù))×100%

    1.8? ?數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)采用Excel 2003和SAS 9.1統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。

    2? ?結(jié)果與分析

    2.1? ? 不同消毒劑和處理時間對莖尖外植體消毒效果的影響

    經(jīng)消毒處理的外植體接種7~10 d后,外植體周圍出現(xiàn)褐化現(xiàn)象,但15 d后褐化逐漸減輕。從表1可知,0.1%升汞附加2%吐溫-80溶液的處理消毒效果較好,消毒4、6、8、10 min的污染率和褐化率均比0.1%升汞單一處理低,莖尖萌發(fā)率均高于0.1%升汞單一處理??赡芴砑油聹?80溶液作為水包油型乳化劑在降低褐化方面具有特殊機理[4 ]。從表1還看出,0.1%升汞+2%吐溫-80處理隨著消毒時間從4、6、8、10、12 min延長,污染率也從58.3%、43.4%、25.3%、21.9%逐漸降低為20.4%,當消毒時間為8 min時,莖尖萌發(fā)率最高,達82.3%。已萌發(fā)的莖尖在后期培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn),處理時間越短,莖尖長勢越迅速,同時褐化率較低,莖尖生長也較快。因此,0.1%升汞+2%吐溫-80處理8 min為草莓匍匐莖莖尖脫毒最佳的消毒方式。

    2.2? ? 不同誘導培養(yǎng)基上外植體的誘導效果

    從表2可以看出,草莓莖尖在MS+1.0 mg/L 6-BA +0.2 mg/LNAA培養(yǎng)基上誘導效果較好,萌發(fā)率為83.3%,為最佳誘導培養(yǎng)基。從不同濃度的6-BA來看,高濃度的6-BA會影響莖尖的正常分化與生長,同時NAA濃度也影響到莖尖萌發(fā)率。當6-BA濃度為1.0 mg/L,NAA濃度為0.1、0.2 mg/L時的生長狀況均較好,幼苗健壯,萌發(fā)芽數(shù)和萌發(fā)率均較高。說明6-BA對草莓組培苗影響較大,外植體分化培養(yǎng)基中6-BA的最適濃度為1.0 mg/L。同時,NAA的濃度也影響到莖尖的萌發(fā)率,其濃度為0.1 mg/L 萌發(fā)率遠低于0.2 mg/L,說明適當提高NAA含量有助于促進草莓莖尖的誘導。

    2.3? ?草莓幼苗不定芽的繼代增殖培養(yǎng)效果

    從表3可以看出,隨著6-BA濃度的不斷增加,草莓增殖系數(shù)呈先增后減趨勢,當6-BA濃度為1.0 mg/L、NAA的濃度為0.02 mg/L時,增殖系數(shù)達到最高,為4.5%,且增殖出的小苗長勢健壯、葉片深綠;當6-BA濃度繼續(xù)升高時,增殖系數(shù)反而有所下降,說明適于草莓幼苗不定芽增殖的6-BA最佳濃度為1.0 mg/L。因此,適宜的繼代增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA +0.02 mg/L NAA。

    2.4? ?不同生根培養(yǎng)基上草莓組培苗的生根情況

    由表4可知,草莓組培苗在5種生根培養(yǎng)基中均能生根,但不同的培養(yǎng)基中平均根數(shù)、根長及長勢均有很大差異。以1/2MS+0.01 mg/L NAA為最佳生根培養(yǎng)基,根數(shù)多,根系粗壯,利于后期移栽,生根率達100%。對不添加激素的培養(yǎng)基而言,1/4MS中的草莓植株根系纖長,長勢較弱;1/2MS中的植株根系多且長,生長健壯。表明植株對NAA濃度變化比較敏感,稍高濃度則誘導植株基部形成愈傷組織,根系雖分化較多,但生長受到抑制。

    3? ?討論與結(jié)論

    表面消毒劑的種類,外植體消毒時間及外植體發(fā)育時期是建立草莓莖尖快繁技術體系的關鍵步驟[4 - 5 ]。草莓匍匐莖莖尖表面長有大量絨毛,致使消毒劑通過吸附進入外植體分生組織,而吐溫-80具有潤展劑的作用,可使外植體表面絨毛與升汞更好的接觸、附著及吸入[6 - 8 ],可提高外植體消毒效果。

    試驗結(jié)果表明,用0.1%升汞+2%吐溫-80溶液處理8 min時草莓莖尖污染及褐化水平較低,成苗率最高,可達82.3%。外植體在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的誘導培養(yǎng)基中,可以誘導出更多的健壯,萌發(fā)率為83.3%,為最佳誘導培養(yǎng)基;適宜的繼代增殖培養(yǎng)基為 MS+1.0 mg/L 6-BA + 0.02 mg/L NAA,增殖系數(shù)為4.5%;1/2MS+0.01 mg/L NAA為最佳生根培養(yǎng)基,生根率達100%。因此,紅顏草莓匍匐莖外植體消毒時采用0.1%升汞+2%吐溫-80處理8 min效果為好。

    外源激素的濃度和比例能影響培養(yǎng)物的基因表達,進而影響器官的分化,通過內(nèi)源激素的平衡調(diào)節(jié)來達到控制器官發(fā)生的目的[8 ]。在進行草莓誘導分化、繼代增殖培養(yǎng)時,激素種類、濃度和配比對萌發(fā)率和增殖系數(shù)表現(xiàn)得尤為明顯。在增殖培養(yǎng)前期,使用較高濃度的6-BA能夠短期增加基數(shù)、縮短繼代周期。而在增殖后期,則較低濃度的6-BA能夠分化出較多生長良好的幼苗,便于后期生根,可提高育苗生產(chǎn)效率。

    參考文獻:

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    [2] 李玉亮,胡軾林,潘旭升,等.? 蘭州新區(qū)日光溫室綠色食品草莓生產(chǎn)技術規(guī)程[J].? 甘肅農(nóng)業(yè)科技,2020(5):91-94.

    [3] 楊馥霞,湯? ?玲,賀? ?歡,等.? 取樣部位對6 個草莓品種低溫半致死溫度的影響[J].? 甘肅農(nóng)業(yè)科技,2019(12):31-34.

    [4] 周厚成,何水濤.? 草莓病毒病研究進展[J]. 果樹學報,2003(5):421-426.

    [5] 肖君澤,黃益鴻,姜放軍.? 草莓病毒病及其脫毒與檢測技術研究進展[J].? 江西農(nóng)業(yè)學報,2010,22(8):88-90.

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    [7] 王振磊,閆芬芬,王? ?靜.? ?草莓組培快繁技術研究[J].? 北方園藝, 2012(11):130-132.

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