不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠脂代謝的影響及機(jī)制

任廷遠(yuǎn)，徐方艷

（1.貴州大學(xué)釀酒與食品工程學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025；2.貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550006）

隨著人們膳食結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變，高脂高能量膳食誘發(fā)的超重和肥胖已成為困擾全球的公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]，因肥胖及其繼發(fā)的慢性代謝性疾病死亡的人數(shù)與日俱增。高糖高脂類的食物含有更多的熱量，同時(shí)其食物營(yíng)養(yǎng)組成缺少膳食纖維等益生元物質(zhì)，長(zhǎng)期攝入高糖高脂類食物易打破機(jī)體熱量攝入代謝平衡[2]，而膳食結(jié)構(gòu)的調(diào)整是預(yù)防肥胖以及肥胖誘導(dǎo)的一系列代謝性疾病最有效的方法。藜麥（Chenopodium quinoa），又稱藜谷、南美藜、昆諾阿藜等，是藜科植物中一種具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的擬谷類植物[3]，我國(guó)的藜麥主要分布在山西、內(nèi)蒙古、甘肅，青海等地[4]。藜麥富含多樣的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，其中大約含10%的膳食纖維，膳食纖維有增加飽腹感、減少膽固醇和脂質(zhì)吸收、改善腸道菌群等作用[5]。胡一晨等[6]通過(guò)深入研究藜麥降脂作用，發(fā)現(xiàn)藜麥中非淀粉類多糖為降血脂的主要活性成分；Tang Yao等[7]通過(guò)體外酶抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)藜麥中的酚類和黃酮類物質(zhì)能夠抑制消化系統(tǒng)中的α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶，從而具有潛在控制體質(zhì)量的作用；于躍等[8]研究表明，植物甾醇是與膽固醇類似的親脂性化合物，在腸道中與膽固醇競(jìng)爭(zhēng)吸收，減少腸內(nèi)和肝臟中脂肪的積累。

藜麥中含有的黃酮類化合物、酚酸和皂苷等生物活性物質(zhì)具有抗菌[9]、抗氧化[10]、抗炎作用。皂苷在藜麥種皮中的含量較高，且具有抗菌、抗病毒等作用；藜麥中還含有較高含量的甾醇，它具有抗癌、抗炎等作用[11]；同時(shí)藜麥籽粒富含礦物質(zhì)、膳食纖維等，在保障人體健康方面發(fā)揮重要作用[12]；藜麥油脂富含VE和角鯊烯，有良好的氧化穩(wěn)定性，可調(diào)節(jié)膽固醇代謝。綜合以上研究和文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，以往針對(duì)藜麥的研究往往是對(duì)單一成分的功能性進(jìn)行評(píng)價(jià)，雖然單一組分的分離純化及功能性研究能更好地排除其他物質(zhì)的影響，也能更好地說(shuō)明其作用機(jī)制。但藜麥作為健康食材或主食化食材是其發(fā)展的主要趨勢(shì)。目前，我國(guó)關(guān)于藜麥的研究還處于起步階段，其營(yíng)養(yǎng)成分和功能的研究不夠深入[13]，不同色型的功能效果差異研究更是少之又少，這給消費(fèi)者選擇藜麥時(shí)帶來(lái)一定困難。本實(shí)驗(yàn)采用高脂膳食誘導(dǎo)小鼠機(jī)體肥胖，研究同一產(chǎn)地、不同色型藜麥對(duì)其預(yù)防效果，通過(guò)測(cè)定Lee’s指數(shù)、脂肪指數(shù)、血清和肝臟組織的總膽固醇（total cholesterol，TC）及甘油三酯（triglyceride，TG）等水平，考察不同色型藜麥改善高脂膳食機(jī)體脂代謝紊亂的效果；通過(guò)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）和Western Blot檢測(cè)研究同一產(chǎn)地、不同色型藜麥改善高脂膳食小鼠脂代謝的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

‘青白藜1號(hào)’（白）、‘青藜2號(hào)’（黑）、‘貢扎3號(hào)’（紅）藜麥（圖1）均產(chǎn)自青海省海西蒙古族藏族自治州都蘭縣宗家鎮(zhèn)諾木洪農(nóng)場(chǎng)；50只SPF級(jí)健康KM雄性小鼠（體質(zhì)量為18～20 g）由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（遼）2015-0001；基礎(chǔ)飼料 重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司。

圖1 不同色型藜麥Fig. 1 Pictures of different colored quinoas

定量引物 北京擎科生物科技有限公司；M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、RNase Inhibitor 美國(guó)普洛麥格；熒光定量試劑、熒光定量膜和熒光定量板子、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法（enhanced chemiluminescence，ECL）顯影液美國(guó)Bio-Rad公司；DNA marker DL2000 大連寶生物工程有限公司；TC測(cè)定試劑盒、TG測(cè)定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）測(cè)定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）測(cè)定試劑盒南京建成生物工程研究所；PBST溶液 北京索萊寶生物科技有限公司；乙酰輔酶A羧化酶（acetyl-CoA carboxylases alpha，ACACA）、3-羥基-3甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase，HMG-CoAr）、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（sterol regulatory element binding protein，SREBP）-1c、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α（peroxisome proliferators-activated receptor-α，PPARα）、低密度脂蛋白受體（low density lipoprotein receptor，LDL-R）抗體 英國(guó)Abcam公司；Tris、脫脂奶粉、甘氨酸美國(guó)Sigma公司；全蛋白提取試劑盒、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）蛋白上樣緩沖液（5×） 上海碧云天生物技術(shù)有限公司；DNA凝膠回收試劑盒 德國(guó)Qiagen公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

Nano Drop 1000微量紫外分光光度儀 美國(guó)Thermo公司；SpectraMax190連續(xù)波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀美國(guó)Molecular Devices公司；H1-16KR高速冷凍離心機(jī)湖南可成儀器設(shè)備有限公司；FSH-2可調(diào)高速勻漿器江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠；S1000梯度PCR儀、DYY-6C型電泳儀、凝膠成像系統(tǒng) 美國(guó)Bio-Rad公司；L5S紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海儀電分析儀器有限公司；YH-A5003分析天平 合肥五星衡器有限公司；Light Cycler Nano熒光定量PCR儀 美國(guó)羅氏公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組與樣品采集

實(shí)驗(yàn)經(jīng)貴州大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)：EAE-GU-2020-P003），符合NIH實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)。小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對(duì)照組（Control）、高脂模型組（HFD）、黑藜麥組（HFD-BQ）、白藜麥組（HFD-WQ）、紅藜麥組（HFD-RQ），每組10只，同室分籠，一籠4只。飼養(yǎng)條件：恒溫（（22f2）℃）、恒濕（（60f2）%），12 h晝夜交替，飼養(yǎng)8周，采食和飲水由小鼠自由進(jìn)行，每隔1周測(cè)定體質(zhì)量。各組飼料配方參照文獻(xiàn)[14-15]設(shè)計(jì)，具體配方如表1所示。

表1 飼料配方Table 1 Formulation of experimental diets

飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，禁食不禁水12 h，乙醚麻醉小鼠，眼眶取血，斷頸處死，在冰袋上迅速解剖，準(zhǔn)確稱量肝臟、心臟、腎臟、脾臟、腹腔脂肪的質(zhì)量后，各組織分裝于無(wú)RNA酶的小試管中，放入－80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 藜麥功能性成分分析

藜麥中多酚含量的測(cè)定參照文獻(xiàn)[16]；總黃酮含量的測(cè)定參照文獻(xiàn)[17]；多糖含量的測(cè)定參照文獻(xiàn)[18]；脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定參考GB/T 5512ü2008《糧油檢驗(yàn)糧食中粗脂肪含量測(cè)定》進(jìn)行；水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測(cè)定參考GB 5009.3ü2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》。

1.3.3 小鼠體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、腹腔脂肪質(zhì)量的測(cè)定

飼喂結(jié)束時(shí)測(cè)定小鼠肥胖相應(yīng)指數(shù)。小鼠體長(zhǎng)指從鼻尖到肛門(mén)的長(zhǎng)度；小鼠的腰圍，即用卷尺測(cè)定小鼠腹部經(jīng)過(guò)劍突與后肢間垂直距離中點(diǎn)一周的長(zhǎng)度；小鼠腹腔脂肪質(zhì)量，即取小鼠腹腔脂肪稱質(zhì)量；小鼠的Lee’s指數(shù)按下式進(jìn)行計(jì)算。

1.3.4 血清和肝臟組織指標(biāo)測(cè)定

血清和肝臟組織的TC、TG、HDL-C和LDL-C水平的測(cè)定按照相應(yīng)的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.5 肝臟組織切片分析

解剖摘取各組小鼠肝臟，經(jīng)4%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）多聚甲醛溶液固定，固定狀態(tài)良好后，進(jìn)行修剪、脫水、包埋、切片、染色、封片制作切片，蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)并分析。

1.3.6 肝臟mRNA表達(dá)量檢測(cè)

從肝臟組織樣品中提取總RNA，使用DNA凝膠回收試劑盒提取并反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，使用紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)用于檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)，內(nèi)參基因?yàn)棣?actin，根據(jù)2－ΔΔCt法計(jì)算各基因相對(duì)表達(dá)量[19]，操作步驟如下：總RNA提取→反轉(zhuǎn)錄及cDNA的合成與檢測(cè)→qPCR檢測(cè)。各基因的引物序列如表2所示。

表2 qPCR引物序列Table 2 Primer sequences used for qPCR

1.3.7 Western Blot檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)

采用Western Blot檢測(cè)ACACA、HMG-CoAr、SREBP-1c、PPARα、LDL-R的蛋白表達(dá)水平。提取小鼠的肝臟組織蛋白并使用二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）法進(jìn)行定量，蛋白定量后用SDS-PAGE分離轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯膜，用含5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）脫脂奶粉進(jìn)行封閉，分別加入一抗，室溫孵育2 h或4 ℃孵育12 h，然后TBST緩沖液洗滌3 次，每次5 min；室溫下用二抗孵育1～2 h，TBST沖洗，ECL顯影發(fā)光，采用凝膠成像儀觀察。采用Quantity one軟件對(duì)Western Blot條帶進(jìn)行灰度分析，蛋白表達(dá)量檢測(cè)參考Ren Tingyuan等[20]方法進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 22.0和Origin 9.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用Duncan顯著性差異檢驗(yàn)，顯著水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同色型藜麥功能性成分

由表3可知，白、黑、紅色型的藜麥水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)無(wú)顯著差異（P＞0.05）；多糖含量分別為44.45、63.76、43.39 g/100g，且不同色型之間有顯著性差異（P＜0.05），其中黑色藜麥多糖含量顯著高于白色和紅色藜麥（P＜0.05）。白、黑、紅色型藜麥的脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為4.97%、4.25%、5.35%，且不同色型之間差異顯著（P＜0.05），其中紅色藜麥脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于白色和黑色藜麥（P＜0.05）；白、黑、紅色型藜麥的多酚含量分別為1.47、1.51、1.44 mg/g，黑色藜麥和白色藜麥的多酚含量顯著高于紅色藜麥（P＜0.05）；總黃酮含量分別為1.11、1.28、1.92 mg/g，且紅色藜麥的總黃酮含量顯著高于白色藜麥和黑色藜麥（P＜0.05）。

表3 3種色型藜麥籽粒的品質(zhì)指標(biāo)Table 3 Grain quality indexes of three colored quinoas

2.2 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠體質(zhì)量及攝食量的影響

在喂養(yǎng)期間，小鼠生長(zhǎng)發(fā)育良好，體質(zhì)量持續(xù)增加。由表4可知，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠體質(zhì)量增加量顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05）。與模型組相比，不同色型藜麥可顯著降低小鼠體質(zhì)量增加量（P＜0.05），且白、黑、紅藜麥分別降低了36.71%、45.25%和28.16%。與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠平均每周攝食量顯著降低了21.00%（P＜0.05），呈現(xiàn)食少體胖的狀態(tài)。與模型組相比，白、黑、紅藜麥組小鼠攝食量分別顯著增加了44.24%、38.80%、21.16%（P＜0.05）說(shuō)明藜麥有增加攝食量、控制體質(zhì)量的作用。

表4 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠體質(zhì)量及攝食量的影響（n ＝10）Table 4 Effects of different colored quinoas on body mass and feed intake of high-fat diet-fed mice (n = 10)

2.3 不同色型藜麥對(duì)小鼠肥胖相應(yīng)指數(shù)的影響

體質(zhì)量、體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、腹腔脂肪質(zhì)量常作為評(píng)定肥胖的標(biāo)準(zhǔn)。由表5可知，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠的體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、腹腔脂肪質(zhì)量明顯較高，其中腰圍和腹腔脂肪質(zhì)量具有顯著差異（P＜0.05）。與模型組相比，各藜麥干預(yù)組的體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、腹腔脂肪質(zhì)量明顯降低，黑藜麥組和白藜麥組的下降趨勢(shì)比紅藜麥組的下降趨勢(shì)明顯。結(jié)果表明，藜麥可減少高脂膳食小鼠脂肪生成，控制體型，其中，黑色藜麥和白色藜麥的作用效果比紅色藜麥好。

表5 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠肥胖相應(yīng)指標(biāo)的影響（n＝ 10）Table 5 Effects of different colored quinoas on lipid metabolism indexes of high-fat diet-fed mice (n = 10)

2.4 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠血清指標(biāo)的影響

血清中的LDL-C、HDL-C、TC和TG濃度均為常規(guī)的血脂檢測(cè)指標(biāo)，通常將上述指標(biāo)作為評(píng)價(jià)機(jī)體發(fā)生肥胖的經(jīng)典指標(biāo)[21]。研究表明，不合理的飲食會(huì)導(dǎo)致機(jī)體血液中的TC、LDL-C濃度增加，致使機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂，發(fā)生一系列疾病[22]。由表6可知，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠血清的TC、TG、LDL-C和HDL-C濃度顯著升高（P＜0.05）。與模型組相比，白、黑、紅藜麥組的TG濃度分別顯著降低了25.35%、30.99%和37.32%（P＜0.05）；TC濃度分別顯著降低了31.00%、34.83%和25.17%（P＜0.05）。綜上可知，藜麥可降低小鼠血清的LDL-C水平，提高小鼠血清HDL-C的水平。

表6 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠血清脂質(zhì)水平的影響（n ＝10）Table 6 Effects of different colored quinoas on serum lipid levels of high-fat diet-fed mice (n = 10)

2.5 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠肝臟組織指標(biāo)的影響

不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠肝臟脂質(zhì)水平的影響如表7所示，模型組肝臟TG含量顯著高于空白對(duì)照組（P＜0.05）。符合Turgis等[23]的研究，即高脂膳食導(dǎo)致肝臟TG的積累。與模型組相比，白、黑和紅藜麥組的小鼠肝臟TG、TC水平明顯降低，且白、黑、紅不同色型藜麥干預(yù)組的TG水平比模型組分別顯著降低了25.21%、34.73%、32.39%（P＜0.05）。藜麥各組的HDL-C水平明顯較模型組高。說(shuō)明藜麥可降低肝臟組織的TG、TC、LDL-C水平，提高HDL-C水平，進(jìn)而調(diào)節(jié)肝臟脂代謝紊亂，減少相關(guān)疾病的發(fā)生。

表7 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠肝臟脂質(zhì)水平的影響（n＝10）Table 7 Effects of different colored quinoas on lipid levels in liver of high-fat diet-fed mice (n = 10)

2.6 肝臟病理學(xué)結(jié)果

各組肝臟HE染色后的病理學(xué)結(jié)果如圖2所示，空白對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列緊密，未見(jiàn)明顯炎癥。模型組小鼠肝細(xì)胞排列松散，廣泛可見(jiàn)肝細(xì)胞空泡變性，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大小不一、數(shù)量不等的圓形空泡，較多肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松淡染呈空泡狀。與模型組相比，藜麥各組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列較整齊，有少量空泡變性，形態(tài)改善明顯。

圖2 肝臟病理學(xué)結(jié)果Fig. 2 Pathological analysis of the liver

2.7 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食小鼠肝臟膽固醇代謝關(guān)鍵基因mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響

高脂膳食對(duì)小鼠肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響如圖3所示。與空白對(duì)照組相比，高脂模型組可顯著升高小鼠肝臟HMG-CoAr、SREBP-1c mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量，顯著降低LDL-R和PPARα蛋白相對(duì)表達(dá)量，顯著下調(diào)AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）α mRNA的相對(duì)表達(dá)量。經(jīng)過(guò)8周藜麥干預(yù)后，與模型組相比，白、黑、紅藜麥顯著下調(diào)HMG-CoAr與SREBP-1c mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量并顯著升高AMPKαmRNA的相對(duì)表達(dá)量，其中HMG-CoArmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別下調(diào)了56.22%、72.55%和27.77%，蛋白相對(duì)表達(dá)量分別下降了53.02%、29.72%、29.80%；SREBP-1c的mRNA相對(duì)表達(dá)量分別下調(diào)了62.96%、45.50%和21.27%，蛋白相對(duì)表達(dá)量分別下降了20.79%、23.97%、20.26%；AMPKαmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別上調(diào)了414.67%、436.04%和46.50%。

由圖3可知，模型組與空白對(duì)照組相比，高脂膳食可顯著降低小鼠肝臟肝X受體（liver X receptor，LXR）、LDL-R、PPARαmRNA相對(duì)表達(dá)量，顯著降低小鼠肝臟LDL-R、PPARα蛋白相對(duì)表達(dá)量，升高膽固醇7α-羥化酶（cytochrome P450 family 7 subfamily A member 1，CYP7A1）mRNA相對(duì)表達(dá)量。經(jīng)過(guò)8周藜麥干預(yù)后，與模型組相比，白、黑、紅藜麥均可顯著升高LDL-R、LXR、PPARα和CYP7A1mRNA相對(duì)表達(dá)量，其中LDL-R和PPARα蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著升高。其中LDL-RmRNA相對(duì)表達(dá)量分別升高了243.86%、273.04%和121.93%，蛋白相對(duì)表達(dá)量分別上調(diào)了18.02%、17.16%、22.45%；LXRmRNA相對(duì)表達(dá)量分別升高了286.46%、229.74%和103.71%；PPARαmRNA相對(duì)表達(dá)量分別升高了62.45%、87.54%和126.91%，蛋白相對(duì)表達(dá)量分別上調(diào)了54.26%、51.10%、33.82%；CYP7A1mRNA相對(duì)表達(dá)量分別升高了36.94%、16.81%和15.22%。

圖3 對(duì)高脂膳食小鼠肝臟膽固醇代謝關(guān)鍵基因mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響（n＝10）Fig. 3 Effects of high-fat diet on the mRNA and protein relative expression levels of key genes related to cholesterol metabolism in the liver of mice (n = 10)

2.8 不同色型藜麥對(duì)高脂膳食鼠肝臟脂代謝關(guān)鍵基因的影響

高脂膳食對(duì)小鼠肝臟脂質(zhì)合成和分解關(guān)鍵基因mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響如圖4所示。模型組與空白對(duì)照組相比，高脂膳食可顯著升高小鼠肝臟ACACAmRNA、ACACA蛋白和脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)ASN）mRNA相對(duì)表達(dá)量，顯著下調(diào)肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1（carnitine palmitoyltransferase 1，CPT1）mRNA的相對(duì)表達(dá)量。經(jīng)過(guò)8周藜麥干預(yù)后，與模型組相比，白、黑、紅藜麥均可顯著降低ACACA和FASNmRNA相對(duì)表達(dá)量，降低ACACA蛋白相對(duì)表達(dá)量，顯著升高CPT1mRNA相對(duì)表達(dá)量，其中白、黑、紅藜麥組的ACACAmRNA相對(duì)表達(dá)量分別下降了33.94%、24.92%和25.37%；ACACA蛋白相對(duì)表達(dá)量均有所降低，其中白、黑藜麥組的降低更為顯著，分別降低了12.81%、7.86%、0.48%，F(xiàn)ASNmRNA相對(duì)表達(dá)量分別下降了28.12%、22.81%和45.90%，CPT1mRNA相對(duì)表達(dá)量分別上升了210.93%、591.72%和553.94%。

圖4 對(duì)高脂膳食小鼠肝臟脂代謝關(guān)鍵基因mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量的影響（n＝10）Fig. 4 Effects of high-fat diet on the mRNA and protein relative expression levels of key genes of lipid metabolism in the liver of mice (n = 10)

3 討 論

大量研究顯示，高脂膳食引起的脂代謝絮亂是導(dǎo)致肥胖病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素[24]。體質(zhì)量、體長(zhǎng)、腰圍、Lee’s指數(shù)、脂肪指數(shù)是肥胖的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。Tang Yao等[25]測(cè)定了3種不同色型藜麥的總黃酮和總多酚的含量，也發(fā)現(xiàn)黑色藜麥的總多酚含量較高，紅色藜麥的黃酮含量較高，白色藜麥的總酚和總黃酮含量均相對(duì)較低；趙萌萌等[26]測(cè)定了不同粒色藜麥營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)并對(duì)多酚組成與抗氧化活性進(jìn)行比較分析，結(jié)果表明多酚以游離型為主要形式且含量存在顯著差異（P＜0.05），游離酚和結(jié)合酚含量依次為黑色＞紅色＞白色，黃酮含量較低，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。本研究中，藜麥可明顯增加高脂膳食小鼠的攝食量，降低體質(zhì)量、腰圍、Lee’s指數(shù)等，說(shuō)明藜麥可抑制脂肪生成、控制體質(zhì)量和體型，有預(yù)防肥胖的作用，這與石振興[27]研究出藜麥有抑制脂肪生成、治療肥胖的結(jié)果一致；其中，黑色和白藜麥效果比紅藜麥效果顯著。

TC、TG、HDL-C、LDL-C水平是衡量血脂水平的常用指標(biāo)[28]。TC指膽固醇的總和，而肝臟是膽固醇合成和貯存的主要器官，TC能夠損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，擾亂脂代謝，促使高脂血癥的形成和發(fā)展。TG通過(guò)食物消化吸收后成為乳糜微粒的主要成分，可以診斷高甘油三酯血癥、代謝綜合征以及評(píng)價(jià)肥胖癥危險(xiǎn)性。LDL-C將膽固醇和TG運(yùn)輸?shù)饺梭w組織中，而HDL-C是以磷脂和載脂蛋白I為主，可逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)多的膽固醇到肝臟進(jìn)行代謝分解。高TG、TC和LDL-C，低HDL-C水平是代謝綜合征等多種疾病的危險(xiǎn)因子[29-31]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同色型藜麥干預(yù)組小鼠的血清和肝臟組織的TG、TC、LDL-C水平與模型組相比都有下降的趨勢(shì)，HDL-C水平有升高的趨勢(shì)，這與蔡云汐[32]研究中藜麥可下調(diào)TC、TG、LDL-C水平，上調(diào)HDL-C水平的結(jié)果一致。而臨床試驗(yàn)也證明每日攝入50 g藜麥就可降低肥胖患者血清TG水平[33]。Pa?ko等[34]研究表明，食用含藜麥多糖的高脂飼料的小鼠血清中TC、TG、LDL-C和血糖水平顯著降低，可能原因是藜麥多糖中含有豐富的膳食纖維，膳食纖維可抑制膽固醇的吸收，促進(jìn)其代謝或分解，可降低血清中脂質(zhì)的含量；還有研究表明藜麥中的膳食纖維具有較強(qiáng)的保持水分的性能，能夠增強(qiáng)飽腹感[35]。Hirose等[36]研究表明，藜麥中的總多酚含量與其清除自由基能力和抑制脂肪生成能力呈顯著正相關(guān)，多酚類物質(zhì)抑制細(xì)胞增殖和脂肪氧化酶活力，降低間隙連接蛋白-43的表達(dá)量，阻止脂肪氧化和生成；Tang Yao等[7]通過(guò)進(jìn)行體外酶抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，藜麥中的多酚類和黃酮類物質(zhì)能夠抑制消化系統(tǒng)中的α-葡萄糖苷酶和胰脂肪酶，具有控制體質(zhì)量的作用；王文琦等[37]研究發(fā)現(xiàn)參芪茯苓片能顯著下調(diào)小鼠血清中TC、TG的含量，參芪茯苓片可以幫助調(diào)節(jié)亞健康人群的糖脂代謝紊亂。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)藜麥也可以顯著下調(diào)小鼠血清中的TC、TG的含量，說(shuō)明藜麥有調(diào)節(jié)高脂膳食機(jī)體血脂代謝紊亂的作用。本研究發(fā)現(xiàn)從小鼠生長(zhǎng)狀況、血清和肝臟生理發(fā)現(xiàn)，不同色型藜麥降脂效果差異較大，這可能與其功能性成分含量及組成有關(guān)，但其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

LXR-α是核受體超家族成員，在肝臟、腎臟、巨噬細(xì)胞中大量分布，具有調(diào)節(jié)膽固醇代謝的作用，通過(guò)調(diào)控下游基因AB-CA1，促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)[38-39]。機(jī)體內(nèi)膽固醇清除的經(jīng)典有效途徑是在CYP7A1的作用下生成膽汁酸，而CYP7A1基因是LXR-α的下游基因，故LXR-α也有調(diào)控膽汁酸的作用[40]。SREBP-1c是SREBP的一種異構(gòu)體，其具有潛在的生脂作用，在肝臟、白色脂肪組織以及骨骼肌中高表達(dá)[21]，并且SREBP-1c還能作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，直接激活脂質(zhì)代謝過(guò)程中的30多個(gè)基因的表達(dá)從而調(diào)控脂質(zhì)代謝，其中FASN和ACC1作為催化脂質(zhì)代謝的重要基因，體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)，SREBP-1c能夠促進(jìn)FASN和ACC1表達(dá)，增加TG的合成及沉積[41]。ACACA基因編碼乙酰輔酶A羧化酶（acetyl-Co A carboxylase，ACC），在脂肪酸代謝中起到重要調(diào)控作用，ACACA基因表達(dá)量的下調(diào)導(dǎo)致脂肪酸從頭合成減少。SREBP1調(diào)控下游參與脂肪酸從頭合成的靶基因，F(xiàn)ASN和ACACA也下調(diào)[42]，本研究表明藜麥組可以顯著下調(diào)ACACA和FASN基因的表達(dá)。PPARα是控制脂肪分解的主要基因，石振興等[27]研究了藜麥lunasin（一種多肽）的減肥活性，發(fā)現(xiàn)藜麥lunasin可顯著降低PPARγ和C/EBPα的mRNA表達(dá)，抑制脂肪細(xì)胞脂肪生成；高俊鳳等[43]研究發(fā)現(xiàn)葛根素能夠通過(guò)下調(diào)肝臟細(xì)胞因子Fetuin B干預(yù)AMPK/ACC通路的相關(guān)蛋白調(diào)控，增強(qiáng)AMPK磷酸化，上調(diào)磷酸化ACC蛋白表達(dá)，降低ACC活性，從而調(diào)節(jié)糖脂代謝。這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符合，黑、白、紅三色藜麥均可以顯著升高AMPK的mRNA相對(duì)表達(dá)量。研究表明芝麻酚通過(guò)提高肝臟PPARγ、降低SREBP-1c以及LXR的表達(dá)水平來(lái)改善高膽固醇[44]，本研究發(fā)現(xiàn)，藜麥顯著抑制了ACACA基因的表達(dá)，升高了LXRmRNA的相對(duì)表達(dá)量，說(shuō)明藜麥對(duì)小鼠的膽固醇代謝有一定的影響。本實(shí)驗(yàn)研究表明，藜麥可以顯著下調(diào)HMG-CoAr和SREBP-1cmRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量，顯著升高AMPKα、LDL-R、LXR、PPARα和CYP7A1mRNA的相對(duì)表達(dá)量和LDL-R、PPARα蛋白相對(duì)表達(dá)量，說(shuō)明藜麥可通過(guò)膽固醇代謝和脂質(zhì)從頭合成信號(hào)通路調(diào)節(jié)因高脂膳食引起的機(jī)體內(nèi)脂代謝紊亂的作用。

4 結(jié) 論

同一產(chǎn)地、不同色型藜麥所含的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量不同；黑色藜麥的多糖和多酚含量較高，脂肪較低，紅色藜麥脂肪和黃酮含量較高；不同色型藜麥均可降低高脂膳食小鼠血清和肝臟TC、TG和LDL-C水平，其中白藜麥和黑藜麥比紅藜麥效果好，其降脂的機(jī)制可能與降低膽固醇合成和減少脂肪酸從頭合成都有關(guān)聯(lián)。另外，不同色型藜麥對(duì)高脂膳食機(jī)體肝臟膽固醇合成與分解、脂肪酸從頭合成的影響均存在差異，而這一差異是由何引起，其中的具體機(jī)制是什么還需進(jìn)一步研究。