棒毛絡(luò)新婦Trichonephila clavate的脂溶性成分、微量元素及氨基酸分析研究

李文銳 代欣桃 顧小亮 楊志斌 聞焜 楊自忠

摘要：目的研究棒毛絡(luò)新婦Trichonephila clavate中含有的脂溶性成分、微量元素和氨基酸。方法采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用儀、電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）和氨基酸分析儀分別分析棒毛絡(luò)新婦中的脂溶性成分、微量元素及氨基酸。結(jié)果自棒毛絡(luò)新婦脂溶性提取物中共鑒定出26個(gè)脂溶性成分，占離子流圖總峰面積的94.52%，其中，油酸乙酯和亞油酸乙酯含量較高。富含7種人體必需微量元素，其中Fe和Zn含量較高，重金屬元素As和Pb的含量符合限度要求。此外，棒毛絡(luò)新婦中共含有17種氨基酸，其中6種為人體必需氨基酸。結(jié)論本研究將為進(jìn)一步開展蜘蛛資源的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：棒毛絡(luò)新婦;脂溶性成分;氨基酸;微量元素

【中圖分類號(hào)】 F763 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）10--03

蜘蛛在自然界種類較多，分布較廣，數(shù)量較大，是農(nóng)林害蟲的重要天敵[1-2]，也是人類重要的藥用資源和食物資源[3-4]。棒毛絡(luò)新婦Trichonephila clavata（L.Koch，1878）是一種常見蜘蛛，民間俗稱花蜘蛛、草蜘蛛，常見于我國南方各省份，北方的北京、河北、山西、陜西、河南和遼寧也有分布[5]。

食用蜘蛛在我國雖然不普遍，但在世居海南的黎族和云南的傣族、景頗族、布朗族、彝族常有食用蜘蛛的習(xí)俗，如海南的黎族喜食海南單柄蛛、施氏單柄蛛、廣西纓毛蛛;而云南的西雙版納的布朗族喜食橫紋金蛛Argiope bruennichi（Scopoli，1772）、傣族喜食斑絡(luò)新婦Nephila pilipes（Fabricius，1793），德宏的傣族、景頗族喜食大囊地蛛Atypus sacculatus Zhu et al.，2006，瀘水的傈僳族和雙柏的彝族喜食棒毛絡(luò)新婦Trichonephila clavata（L.Koch，1878）[3-4]。

為了探索蜘蛛的營養(yǎng)成分，揭示其對(duì)人類營養(yǎng)價(jià)值的秘密，本課題組選擇了棒毛絡(luò)新婦Trichonephila clavata（L.Koch，1878）作為研究對(duì)象，采用GC-MS、ICP-MS和氨基酸分析儀對(duì)該蜘蛛的脂溶性成分、微量元素和氨基酸進(jìn)行分析研究，研究結(jié)果將為進(jìn)一步開展蜘蛛資源的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器

7890A/5975C型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司）;Ethos Up型微波消解儀（意大利Milestone公司）;Agilent 7900型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）;S-433D型氨基酸自動(dòng)分析儀（德國賽卡姆公司）。

1.2樣品與試劑

樣品采集自云南省大理市龍龕碼頭洱海周邊地區(qū)，陰干。批號(hào)：20181101-20181110，經(jīng)大理大學(xué)昆蟲生物醫(yī)藥研究院楊自忠教授鑒定為棒毛絡(luò)新婦Trichonephila clavate（L.Koch，1878），標(biāo)本及樣品現(xiàn)保存于大理大學(xué)昆蟲生物醫(yī)藥研究院。多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（含Cr、Fe、Ni、Zn、As、Se、Sr、Mo、Ba、Pb，國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，100.0μg/mL，批號(hào)：17DA224）;混合內(nèi)標(biāo)溶液（45Sc、72Ge、103Rh、115In、185Re、209Bi，美國Agilent公司，10μg/mL，批號(hào)：5188-6525）;雞肉成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（地球物理地球化學(xué)勘查研究所，批號(hào)：GBW10018）;17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：谷氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、賴氨酸、精氨酸、脯氨酸（德國塞卡姆公司，批號(hào)：09070113，濃度均為2.5?mol.mL-1）;甲醇（色譜純，批：10945607 812）和硝酸（質(zhì)量分?jǐn)?shù)65%，批號(hào)：K47365856 551）均購于德國默克公司;其他試劑均為分析純，水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1樣品制備將干燥的棒毛絡(luò)新婦蟲體用中藥粉碎機(jī)打碎，過40目篩，樣品粉末于干燥器中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2脂溶性成分分析

2.2.1供試品溶液制備稱取備用樣品15g，用石油醚進(jìn)行索氏提取1h，提取液減壓濃縮得浸膏，取浸膏10mg，加石油醚溶解并定容為濃度1mg/mL的溶液，上機(jī)備用。

2.2.2 GC-MS條件Agilent HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）色譜柱;起始柱溫60℃;10℃/min升至160℃，保留3 min;5℃/min升至200℃，保留10 min;5℃/min升至240℃，保留5 min;3℃/min升至250℃，保留5 min;2℃/min升至260℃，保留3 min;300℃后運(yùn)行3 min;前進(jìn)樣口溫度200℃;載氣為高純氦氣;進(jìn)樣量1.0μL（分流比10：1）;柱流量：1.0 mL/min。離子源：電離能量70 eV;離子源溫度230℃;四級(jí)桿溫度150℃;質(zhì)量掃描范圍為m/z 50-550，溶劑延遲3 min。

2.2.3樣品測(cè)定樣品按“2.2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定，得到總離子流圖，見圖1。通過NIST11.L標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索（取相似度90%以上），各成分相對(duì)百分含量采用面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算，見表1。

2.3微量元素分析[6]

2.3.1精密稱取樣品粉末約0.3 g，置聚四氟乙烯消解罐中，加入6 mL硝酸和2 mL雙氧水，微波消解，消解功率1800 w，30 min內(nèi)升至190℃，保持20 min。冷卻，于130℃趕酸至溶液剩余約1.0 mL，轉(zhuǎn)入50 mL量瓶，超純水定容。同法制備試劑空白溶液。

2.3.2 ICP-MS工作條件射頻功率1550 w，等離子氣體流量15.0 L·min-1，霧化氣體流量0.99 L·min-1，輔助氣體流量0.90 L·min-1，采樣深度10.0 mm;霧化室溫度2℃，重復(fù)次數(shù)3次。

2.3.3樣品測(cè)定精密稱取10批樣品（20181101-20181110），按照“2.3.1”的方法和“2.3.2”項(xiàng)下條件分別處理和測(cè)定10種微量元素，結(jié)果見表2。

2.4氨基酸分析

2.4.1參考文獻(xiàn)方法[7]制備茚三酮溶液，樣品稀釋液和流動(dòng)相。

2.4.2樣品的制備精密稱取樣品粉末約0.3g于水解管中，加6 mol/L的鹽酸6 mL，苯酚9 mg，充氮?dú)?，融封，?10℃干燥箱中水解22 h，冷卻后濾過至蒸發(fā)皿中，蒸干，殘?jiān)映兯芙獠⑾♂屩?5 ml，搖勻，精密量取2 mL，用樣品稀釋液定容至10 mL，備用。

2.4.3標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密量取混合對(duì)照品溶液適量，用樣品稀釋液逐級(jí)稀釋為10、20、40、60、80、100 mmol/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.4.4色譜條件色譜柱：LCA KO6/Na分離柱4.6×150 mm;流速：洗脫泵0.45 mL/min，衍生泵0.25 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：570 nm和440 nm，柱溫：57℃;進(jìn)樣體積：50μL。梯度洗脫（0～2.5 min，100%A;2.5～11.0 min，85%A;11.0～17.0 min，80%A;17.0～23.0 min，67%A;23.0～29.0 min，20%A;29.0～42.0 min，100%B）。

2.4.5樣品測(cè)定精密稱取10批（20181101-20181110）樣品，按“2.4.2”的方法和“2.4.4”項(xiàng)下條件分別處理和測(cè)定，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算各氨基酸的含量。結(jié)果見表3。

3討論

本研究從棒毛絡(luò)新婦脂溶性提取物中共分離鑒定了26個(gè)化學(xué)成分，其中，油酸乙酯和亞油酸乙酯含量較高，油酸乙酯主要作為潤(rùn)滑劑;亞油酸乙酯為多不飽和脂肪酸類物質(zhì)，能調(diào)節(jié)人體的脂質(zhì)代謝，治療和預(yù)防心腦血管疾病，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，具有防癌抗癌作用，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)[8]。

本實(shí)驗(yàn)采用ICP-MS法同時(shí)測(cè)定棒毛絡(luò)新婦中10種元素的含量，結(jié)果顯示棒毛絡(luò)新婦中富含人體必需微量元素Fe、Zn、Sr、Cr、Se、Ni和Mo，這些元素是人體重要生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)人體健康具有積極意義[9]。其中Fe和Zn的含量較高，F(xiàn)e參與血紅蛋白的形成，具有造血功能;Zn對(duì)人體健康有重要的調(diào)控功能，可以增強(qiáng)免疫力，加快生長(zhǎng)發(fā)育，缺乏可導(dǎo)致細(xì)菌、病毒等反復(fù)感染[10]。另外，兩種重金屬元素As和Pb的含量符合2012年我國頒布的《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)重金屬含量的限度要求：As≤2.0 ug/g、Pb≤5.0 ug/g。

由本研究表6可知，檢測(cè)的17種氨基酸中，含6種人體必需氨基酸，藥效氨基酸約占氨基酸總量的53%。其中甘氨酸和谷氨酸的含量較高。甘氨酸有神經(jīng)活動(dòng)抑制性的遞質(zhì)作用，對(duì)生物體內(nèi)代謝調(diào)節(jié)起重要作用;谷氨酸為主要的鮮味氨基酸，可以參與肌肉、肝臟和大腦等組織的解毒活動(dòng)。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證實(shí)，棒毛絡(luò)新婦不僅是人類重要的藥食資源，還具有一定的營養(yǎng)價(jià)值，是極具開發(fā)利用的可更新的自然資源。但此次研究樣品采集地單一，所檢測(cè)的數(shù)據(jù)不足以代表我國棒毛絡(luò)新婦的整體情況，因此還需進(jìn)一步探討。

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作者簡(jiǎn)介 ; 李文銳（1987-），女，本科，主管藥師，研究方向：食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)。

通訊作者 ： 楊自忠（1969-），男，博士，教授，研究方向：蛛形動(dòng)物資源及開發(fā)利用。